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    HBV DNA檢測在血清HBsAg與HBsAb共存模式中的臨床價值

    2012-11-06 08:52:58劉偉平殷明剛阮艷秋
    醫(yī)學(xué)研究雜志 2012年7期
    關(guān)鍵詞:載量乙肝乙型肝炎

    劉偉平 殷明剛 阮艷秋

    目前HBV感染者約有3.5億人,成為威脅人類健康的全球性問題之一,其持續(xù)感染可致嚴(yán)重的肝損傷,并可能進一步發(fā)展為肝硬化和肝癌[1]。乙肝的康復(fù)或進展過程中,有賴于體液和細胞免疫的協(xié)同作用[2],可出現(xiàn) HBeAg向 HBeAb或 HBsAg向 HbsAb的血清學(xué)轉(zhuǎn)換。有文獻[3~5]報道了HBV感染患者血清中存在HBsAg與HBsAb共存的少見模式,而這些血清模式的病毒學(xué)意義、免疫反應(yīng)機制以及患者預(yù)后仍未完全弄清楚。HBV DNA定量檢測可反映患者體內(nèi)HBV DNA載量,反映人體感染HBV與否的可靠指標(biāo)[6]。為了解HBsAg和HBsAb共存血清模式的分布特點和病毒復(fù)制情況,以便更好指導(dǎo)臨床治療和監(jiān)測急、慢性乙型肝炎,我們對96例HBsAg和HB-sAb共存的血清模式樣本進行了HBV DNA定量檢測,同時對HBV DNA熒光定量檢測在此模式中的臨床價值進行了初步探討。

    材料與方法

    1.標(biāo)本來源:收集筆者醫(yī)院2008年8月1日~2010年8月1日門診和住院患者乙肝血清標(biāo)志物HBsAg和HBsAb檢測同時陽性的標(biāo)本96例。其中男性54名,女性42名,患者年齡為43.7±15.2歲。所有兩者同時陽性的標(biāo)本均通過重新抽血并用同一廠家ELISA法試劑和另一廠家的時間分辨熒光免疫分析法復(fù)查,確認(rèn)結(jié)果一致后作為入選對象。同時抽取約3m l血液加入無任何添加劑的無菌真空管中,待血液凝固后2h內(nèi)離心(1500r/min,5min)分離血清標(biāo)本,-70℃保存,所有標(biāo)本在同一條件下同時測定HBV DNA拷貝數(shù)。

    2.方法:乙肝標(biāo)志物檢測試劑盒購自英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司,HBsAg、HBeAg檢測采用ELISA雙抗體夾心法,結(jié)果判定以S/CO≥1.0為陽性;HBsAb檢測采用ELISA雙抗原夾心法,以 S/CO≥1.0為陽性;HBeAb以及 HBcAb采用ELISA競爭法,以S/CO<1.0為陽性;時間分辨熒光免疫分析系統(tǒng)及配套的乙型肝炎兩對半檢測試劑盒購自上海新波生物技術(shù)有限公司,嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行操作和判讀結(jié)果。HBV-DNA熒光定量檢測試劑盒(中山大學(xué)達安基因股份有限公司),病毒載量≥1.0×103拷貝/毫升判為陽性。

    3.統(tǒng)計學(xué)方法:用SPSS 11.0軟件包進行統(tǒng)計分析,率的比較采用χ2檢驗,均值比較采用t檢驗,P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

    結(jié) 果

    1.乙肝血清標(biāo)志物HBsAg和HBsAb共存模式的分布情況:2008年8月1日~2010年8月1日共檢測乙肝血清標(biāo)志物29365例,其中乙肝表面抗原陽性3054例,占10.4%;HBsAg和HBsAb雙陽性血清學(xué)模式96例,占乙肝表面抗原陽性模式的3.1%(96/3054)。HBsAg和HBsAb共存的模式分布情況如表 1 所示,“1,2,3,5”陽性模式組最多見,占53.1%(51/96),“1,2,4,5”陽性模式組次之,占35.4%(34/96)。

    表1 HBsAg和HBsAb共存模式的分布情況

    2.HBsAg和HBsAb共存模式與HBV DNA病毒載量的關(guān)系:在96例HBsAg和HBsAb共存的血清標(biāo)本中,HBV DNA陽性的例數(shù)為70例,占73%(70/96)。按HBeAg是否為陽性,人為分為兩組,比較兩者HBV DNA的陽性率和病毒載量。結(jié)果如表2所示,兩組間HBV DNA的陽性率的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=12.096,P < 0.05),且 HBeAg 陽性組高于HBeAg陰性組;HBV DNA病毒載量亦為HBeAg陽性組高于HBeAg陰性組(P<0.05)。

    表2 HBsAg和HBsAb共存模式的HBV DNA檢測結(jié)果

    3.不同S/CO范圍的HBsAg和HBsAb共存模式與HBV DNA陽性率的關(guān)系:根據(jù)HBsAg和HBsAb的吸光度與Cut Off比值(S/CO)的相對高低,人為分為A、B、C、D 共 4 組,A 組為 HBsAg(S/CO 1.0 ~1.9),HBsAb(S/CO≥2);B組為 HBsAg(S/CO≥2),HBsAb(S/CO≥2);C組為HBsAg(S/CO≥2),HBsAb(S/CO 1.0 ~1.9);D 組為 HBsAg(S/CO 1.0 ~1.9),HBsAb(S/CO 1.0~1.9)。結(jié)果如表3所示,在 HB-sAg和HBsAb共存模式中,HBV DNA總陽性率為72.9%(70/96)。C組 HBV DNA陽性率最高,占61.5%(59/96),其他組陽性率由高到低依次為B、A、D組。

    表3 不同S/CO范圍的HBsAg和HBsAb共存模式的HBV DNA陽性率

    討 論

    由于人體感染乙肝病毒后機體發(fā)生免疫應(yīng)答,HBsAg與HBsAb處于一種動態(tài)平衡狀態(tài),從理論上來說,HBsAg和HbsAb通常不會同時存在于同一個體的血清中[7]。但是越來越多的臨床檢測結(jié)果并不支持這一觀點。據(jù)謝士達等[8]報道HBsAg與HBsAb同時檢出的病例約占全部乙肝血清標(biāo)志物送檢標(biāo)本的0.25%,在乙肝患者中約為5%;又如王蕾等和Zhang等[9,10]分別報道 HBsAg 與 HBsAb 同時陽性的樣本占HBsAg陽性樣本的4.08%和4.9%。本調(diào)查結(jié)果顯示,HBsAg與HBsAb共存模式占HBsAg陽性模式的3.1%(96/3054)。其中無癥狀乙肝攜帶者占7.2%(7/96),慢性乙型肝炎占 61.4%(59/96),急性重型肝炎占10.4%(10/96),肝硬化占11.6%(11/96),肝癌占9.4%(9/96)。不同文獻報道存在一定差異的可能原因有:①乙肝感染率在各地區(qū)存在一定的差異,治療方法也不完全相同,可導(dǎo)致乙肝基因變異率存在差異性;②ELISA檢測乙肝血清標(biāo)志物的影響因素較多,而且方法本身也存在一定局限性,故產(chǎn)生一些假陽性和假陰性結(jié)果。此外,不同實驗室所選用的廠家試劑方法的靈敏度和準(zhǔn)確度不完全相同,也會導(dǎo)致檢測結(jié)果存在差異性。因此,對ELISA法檢測出“矛盾”模式的結(jié)果,應(yīng)該進一步使用靈敏度和準(zhǔn)確度更高的時間分辨免疫分析法或化學(xué)發(fā)光法進行復(fù)查,以提高結(jié)果的可靠性;③檢驗技術(shù)人員自身的素質(zhì)和水平也會影響檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

    HBsAg和HBsAb共存的現(xiàn)象,具體原因和機制復(fù)雜多樣。目前認(rèn)為,主要有以下幾個方面原因:①某些個體注射乙肝疫苗后,正常應(yīng)答產(chǎn)生的HBsAb不能與由于前S/S區(qū)基因變異后產(chǎn)生的HBsAg結(jié)合,在這種情況下兩者可同時共存而被檢測出來;②不同亞型的HBV先后重疊感染[11];③藥物治療的影響:如干擾素治療乙肝雖然可使部分個體出現(xiàn)HBsAg和HBsAb發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換,但不能清除S區(qū)基因變異后產(chǎn)生的HBsAg。拉米夫定抗病毒治療可使HBV P區(qū)基因發(fā)生變異,導(dǎo)致HBV突變株產(chǎn)生的HBsAg與HBsAb的結(jié)合能力變?nèi)?④部分乙肝患者曾注射高效價乙肝免疫球蛋白,導(dǎo)致血清HBsAb與HBsAg共存;⑤在病毒感染后人體免疫系統(tǒng)反應(yīng)的過程中,乙型肝炎病毒可整合入人體染色體,使得體內(nèi)表面抗原的存在與表面抗體的產(chǎn)生可能同時出現(xiàn);⑥HBsAg和HbsAb共存與HBsAg主要親水區(qū)(MHR)的氨基酸變異有關(guān),特別是與“a”抗原決定族的氨基酸發(fā)生變異有關(guān)[14];⑦某些乙肝患者體內(nèi)存在不同基因組的HBV,編碼產(chǎn)生的HBsAg結(jié)構(gòu)不同,形成的抗原-抗體循環(huán)免疫復(fù)合物可較長時間存在于患者體內(nèi)而被檢測出來[11]。

    本結(jié)果表明,HBsAg與HBsAb共存模式的血清標(biāo)本HBV DNA陽性率較高(72.9%),且在所有共存模式中,HBeAg陽性的模式組HBV DNA陽性率高達86%,顯著高于HBeAg陰性的模式組。此外,HBeAg陽性的模式組HBV DNA的平均病毒載量處于105數(shù)量級的較高水平狀態(tài),而HBeAg陰性的模式組HBV DNA的平均病毒載量在104數(shù)量級,兩者差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。HBsAg效價高于HBsAb的患者組(C組)血清HBV DNA的陽性率高于其余各組,為61.5%(59/96)。這說明HBsAg與HBsAb共存模式患者血清的HBV DNA的陽性率主要取決于HBsAg的效價,且與HBsAg和HBsAb的相對強弱有關(guān)。因此,臨床上乙肝治療和監(jiān)測過程中,若患者出現(xiàn)HBsAb與HBsAg共存模式,往往并非預(yù)示乙肝病毒的清除或疾病恢復(fù)狀態(tài),可通過熒光定量PCR檢測血清HBV DNA確定體內(nèi)病毒是否復(fù)制和載量高低,提示臨床醫(yī)生對治療方案進行必要的調(diào)整。

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