oh8 dG在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

王 建 潘月龍

環(huán)境致癌劑、營養(yǎng)不良或局部炎癥等都可增加機(jī)體的氧化負(fù)荷，進(jìn)而引起脂質(zhì)過氧化和DNA氧化損傷，oh8dG作為一種氧化損傷的重要產(chǎn)物，與癌變、衰老等疾病密切相關(guān)［1］。因此，測定oh8dG的表達(dá)水平對了解DNA氧化損傷在癌變的發(fā)生和發(fā)展中的作用有重要意義。

胃癌的發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜的、多因素的過程，DNA氧化損傷是導(dǎo)致胃癌發(fā)生的原因之一［2］。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化方法檢測胃癌組織中和正常胃黏膜組織標(biāo)本中oh8dG的表達(dá)，并探討oh8dG的表達(dá)與胃癌的臨床病理分期之間的關(guān)系。

材料與方法

1．試劑和標(biāo)本:SP免疫組化染色超敏試劑盒(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司)，oh8dG單克隆抗體(上海西唐生物科技有限公司)，組織標(biāo)本取自杭州市第一人民醫(yī)院病理科。

2．免疫組化方法:脫蠟、水化組織切片;以3%H2O2去離子水孵育5～10min，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶;對組織切片進(jìn)行預(yù)處理;滴加一抗，37℃孵育1～2h，PBS沖洗，滴加山羊抗小鼠IgG抗體－HRP多聚體，室溫或37℃孵育30min，PBS沖洗，以DAB顯色，顯微鏡下觀察，蒸餾水充分沖洗，終止顯色反應(yīng);蘇木素復(fù)染，藍(lán)化水沖洗，脫水;中性樹膠封片。

3．胃癌的臨床分期:參照AJCC 2010第7版分期標(biāo)準(zhǔn)。

4．結(jié)果判斷:按照陽性細(xì)胞所占百分比及著色深淺進(jìn)行結(jié)果判斷。①按細(xì)胞著色深淺評分:細(xì)胞不顯色記為0分;淺黃色記為1分;棕黃色記為2分;棕褐色記為3分;②按陽性細(xì)胞數(shù)百分比評分:陽性細(xì)胞數(shù)＜30%記為1分，30% ～70%記為2分，＞70%記為3分。將細(xì)胞著色深淺評分和陽性細(xì)胞數(shù)百分比評分的乘積作為總積分，0～1分記為陰性，≥2分記為陽性。

5．統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包SPSS11．0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，應(yīng)用非參數(shù)檢驗(yàn)(Mann－Whitney Test)對臨床分期的組間差異進(jìn)行檢驗(yàn);對性別、年齡等組間差異采用卡方檢驗(yàn)，應(yīng)用Logistic回歸進(jìn)行多因素分析，P＜0．05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1．胃癌組和對照組中oh8dG的表達(dá):胃癌組中有30例oh8dG表達(dá)陽性，陽性表達(dá)率為75%，對照組中有4例oh8dG表達(dá)陽性，陽性表達(dá)率為20%，兩者差異顯著(P ＜0．05，圖1)。

2．oh8dG的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系:oh8dG的表達(dá)與年齡、性別無關(guān)(P＞0．05)，而oh8dG的表達(dá)與癌組織浸潤深度、淋巴轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系(P ＜0．05)(表1)。

圖1 oh8 dG的表達(dá)(×200)

表1 oh8 dG的表達(dá)與臨床特征的關(guān)系

討 論

DNA氧化損傷與很多疾病尤其是癌的發(fā)生有關(guān)，生物體內(nèi)的DNA損傷可通過酶來修復(fù)，從而使細(xì)胞功能恢復(fù)正常。然而DNA損傷所致的堿基錯配會引起突變?nèi)鐗A基的缺失、置換，從而導(dǎo)致原癌基因的激活和抑癌基因的失活進(jìn)而導(dǎo)致癌變［3］。oh8dG是鳥嘌呤氧化損傷的產(chǎn)物，在DNA復(fù)制過程中可引起GC→TA的顛換，oh8dG表達(dá)穩(wěn)定且易于檢測，因此oh8dG作為DNA氧化損傷重要的生物標(biāo)志物，被廣泛用于DNA氧化損傷研究。

國內(nèi)外許多研究發(fā)現(xiàn)oh8dG是一個(gè)普遍存在的氧化損傷標(biāo)志物，在動物致癌實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)oh8dG的蓄積可導(dǎo)致癌變［4，5］。oh8dG在癌癥患者含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常人群，并且oh8dG的高表達(dá)與很多腫瘤的預(yù)后不佳有相關(guān)性［6～10］。胃癌在我國發(fā)病率較高，胃癌的發(fā)生與多種因素有關(guān)，飲食在胃癌發(fā)生中有重要影響，我國胃癌流行病學(xué)研究表明，飲食中硒的含量增高與胃癌的發(fā)病率呈負(fù)相關(guān)，硒是谷胱甘肽過氧化物酶的重要成分，這些酶有清除自由基、減少機(jī)體氧化損傷的作用。這些研究提示，氧化損傷在胃癌的發(fā)生和發(fā)展過程中可能起重要作用。

本研究證實(shí)胃癌組織中oh8dG表達(dá)水平明顯升高，并且發(fā)現(xiàn)oh8dG的表達(dá)與癌組織浸潤深度、淋巴轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系，表明DNA氧化損傷在胃癌發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用，oh8dG作為一突變劑，可能是導(dǎo)致基因突變和細(xì)胞癌變的原因之一，因此檢測oh8dG可用于胃癌易感人群的預(yù)警和抗氧化治療效果的評價(jià)，并且有助于我們更好地判斷胃癌患者的預(yù)后。

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