針刺足三里、太沖對(duì)腹瀉型腸易激綜合征大鼠胃腸激素SS、SP的影響

劉美榮，王思明，肖瑞飛，左和寧，彭芝配

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410007）

腸易激綜合征（irritabel bowel snydrom，IBS）是一種以腹痛或腹部感覺不適伴排便習(xí)慣的改變?yōu)樘卣鞯墓δ苄阅c道疾病。羅馬Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)將其分為便秘型（IBS-C）、腹瀉型（IBSD）、混合型（IBS-M）和未分型IBS（IBS-U）四種亞型。我國(guó)最常見的是IBS-D，占所有確診病例的74.1%[1]。IBS作為一種功能性疾病嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，但其發(fā)病因素尚未完全明了，目前尚無特異性治療手段。在臨床上，針灸可有效調(diào)節(jié)腸道功能紊亂。本實(shí)驗(yàn)采用慢性溫和應(yīng)激加孤養(yǎng)法加灌服番瀉葉刺激大鼠造成IBS-D模型，觀察針刺足三里、太沖對(duì)IBS-D大鼠腹瀉指數(shù)及胃腸激素的影響，以期為臨床上使用針刺療法治療IBS-D提供有效的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物

健康SD大鼠50只，雌雄各半，體質(zhì)量200～250g，購(gòu)于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司（SCXK 2009－004）。

1.1.2 藥物

匹維溴銨片，50mg／片（solvay pharma公司生產(chǎn)，批號(hào)：611243）。番瀉葉，購(gòu)于湖南省藥材公司，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室鑒定為真品。

1.1.3 試劑

SS、SP酶聯(lián)免疫試劑盒，96T（上海滬峰生物科技有限公司）。

1.1.4 儀器

SHIMADZU－AY120分析天平（日本島津）；低溫離心機(jī)（湘儀實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；三用電熱恒溫水溫箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）；酶標(biāo)儀（美國(guó)伯騰儀器有限公司）；安迪牌無菌針灸針，0.25mm×25mm（貴州安迪藥械有限公司，標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：GB2024－94）；大鼠固定板（湖南中醫(yī)藥大學(xué)針灸實(shí)驗(yàn)室提供）。

1.2 方法

1.2.1 造模方法[2]

隨機(jī)分組后的大鼠除空白組外，其它組均予番瀉葉水煎劑灌胃。灌胃后，用慢性溫和束縛應(yīng)激加孤養(yǎng)法刺激大鼠。每日僅隨機(jī)對(duì)大鼠做一項(xiàng)處理：①用漆包線捆綁住大鼠的雙后肢，使大鼠不能正?；顒?dòng)，造成一定應(yīng)激刺激，每次2h；②夾尾1min；③置于45℃高溫環(huán)境5min；④置于4℃冰水游泳3min；⑤晝夜顛倒；⑥禁食24h；⑦電熱恒溫振蕩水槽水平振蕩（160次／min）45min。為使大鼠無法預(yù)料刺激的發(fā)生，任意的連續(xù)兩天所做的處理均不能相同，共刺激14d。模型評(píng)價(jià)：觀察大鼠的精神狀況、攝食量變化、體質(zhì)量改變和大便情況。大鼠發(fā)生腹瀉，食欲下降，檢測(cè)腹瀉指數(shù)，模型組與空白組比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，證明模型成功。

1.2.2 動(dòng)物分組

依據(jù)文獻(xiàn)方法[3]，用Excel隨機(jī)函數(shù)“Rand”將大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、捆綁組、針刺組、藥物組，每組10只，單籠喂養(yǎng)。

1.2.3 藥物制備及給藥劑量

匹維溴銨片，碾碎后溶入蒸餾水，按大鼠與成人體表面積換算[4]配制成濃度為0.3mg／mL的溶液，經(jīng)灌胃給藥，給藥體積10mL／kg；番瀉葉，水煮沸5min，配制成濃度為2g／mL的溶液，經(jīng)灌胃給藥，給藥體積10mL／kg。

1.2.4 針刺方法

造模結(jié)束后，空白組、模型組、捆綁組和針刺組灌生理鹽水，藥物組灌服匹維溴銨溶液。針刺組給予針刺相應(yīng)穴位；捆綁組和藥物組在同等條件下相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)給予相應(yīng)的捆綁刺激，每日1次，共14d。穴位定位：參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》“實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用腧穴簡(jiǎn)表”定位[5]。“足三里”穴捻轉(zhuǎn)針法[6]：向心角度捻轉(zhuǎn)，幅度90°左右，頻率120次／min?！疤珱_”穴行捻轉(zhuǎn)瀉法：離心角度捻轉(zhuǎn)，幅度180°左右，頻率60次／min，每穴操作3min，留針30min。

1.2.5 觀測(cè)指標(biāo)及檢測(cè)方法

（1）一般狀態(tài)觀察。每日觀察大鼠進(jìn)食、飲水、精神狀態(tài)及毛色。

（2）腹瀉指數(shù)測(cè)定。參照文獻(xiàn)[7]分別在造模前1d、治療前1d、治療后14d測(cè)定5h內(nèi)各組大鼠腹瀉指數(shù)。

（3）胃腸激素的測(cè)定。在治療14天后，各組大鼠禁食不禁水16h，腹腔注射臨時(shí)配制的10%水合氯醛，劑量0.3mL／100g。麻醉后，腹主動(dòng)脈EDTA管采血5mL低溫離心，分離出血漿待測(cè)。采血后，在大鼠回盲部以上約5cm處取一小段回腸組織，肛門以上約2cm處取一小段直腸組織，立即用生理鹽水沖洗，無菌濾紙吸干后稱重，充分勻漿后低溫離心，將分離出的上清液置于冰箱中-20℃保存?zhèn)溆谩ＩL(zhǎng)抑素（SS）和P物質(zhì)（SP）的含量分別按各自的ELISA試劑盒使用說明書方法測(cè)定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，所有計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，符合正態(tài)性和方差齊性者，組內(nèi)前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，多組比較采用單因素方差分析q檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01表示差異有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 造模后大鼠一般情況

造模后大鼠豎毛，毛枯槁無光澤，易激惹，大便稀或溏泄，漸見肛周污穢。

2.2 大鼠體質(zhì)量結(jié)果比較

造模前各組大鼠體質(zhì)量比較均無顯著性差異（P＞0.05）。造模后模型組、捆綁組、針刺組、藥物組體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢，與空白組比較，均有顯著性差異 （P＜0.05）。治療14天后捆綁組與模型組比較無顯著性差異（P＞0.05）；針刺組、藥物組體質(zhì)量增加明顯，與模型組比較，均有顯著性差異（P＜0.05），針刺組與藥物組比較無顯著性差異（P＞0.05）。結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠造模前、造模后、治療后體質(zhì)量比較（n＝10，，g）

表1 各組大鼠造模前、造模后、治療后體質(zhì)量比較（n＝10，，g）

注：與空白組比較：＊P＜0.05；與模型組比較：▲P＜0.05。

組別 造模前 造模后 治療后空白組269.12±11.76330.53±9.89385.01±9.72模型組 271.98±9.56305.16±10.50＊ 326.01±6.81捆綁組 267.02±10.60307.08±9.53＊ 317.05±7.62針刺組 267.09±10.66304.10±8.68＊ 364.31±8.06▲藥物組 261.98±9.93306.68±10.73＊ 362.50±8.61▲

2.3 大鼠攝食量比較

造模前各組每只大鼠平均日攝食量均無顯著性差異（P＞0.05）。造模期模型組、捆綁組、針刺組、藥物組攝食量減少，與空白組比較均有顯著性差異（P＜0.01）。治療期捆綁組與模型組比較無顯著性差異（P＞0.05）；針刺組、藥物組攝食量明顯增加，與模型組比較均有顯著性差異（P＜0.01），針刺組與藥物組比較無顯著性差異（P＞0.05）。結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠造模前、造模期、治療期平均攝食量比較（n＝10，，g）

表2 各組大鼠造模前、造模期、治療期平均攝食量比較（n＝10，，g）

注：與空白組比較：＊＊P＜0.01；與模型組比較：▲▲P＜0.01。

組別 造模前 造模期 治療期空白組38.75±1.12 47.36±2.41 53.44±1.52模型組 38.52±1.48 30.61±1.79＊＊ 36.84±2.13捆綁組 38.39±1.57 30.15±2.31＊＊ 35.72±1.48針刺組 38.30±1.26 29.44±1.57＊＊ 45.79±1.37▲▲藥物組 38.58±1.33 31.16±1.82＊＊ 46.27±2.45▲▲

2.4 大鼠腹瀉指數(shù)比較

造模前各組均無腹瀉，腹瀉指數(shù)為0。造模后模型組、捆綁組、針刺組、藥物組腹瀉指數(shù)明顯升高，與空白組比較均有顯著性差異（P＜0.01）。治療后捆綁組與模型組比較無顯著性差異（P＞0.05）；針刺組、藥物組腹瀉指數(shù)明顯降低，與模型組比較均有顯著性差異（P＜0.01），針刺組與藥物組比較無顯著性差異（P＞0.05）。結(jié)果見表3。

表3 各組大鼠造模前、造模后、治療后腹瀉指數(shù)比較（n＝10，）

表3 各組大鼠造模前、造模后、治療后腹瀉指數(shù)比較（n＝10，）

注：與空白組比較：＊＊P＜0.01；與模型組比較：▲▲P＜0.01。

組別 造模前 造模后 治療后空白組0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00模型組 0.00±0.00 1.07±0.13＊＊ 0.89±0.21捆綁組 0.00±0.00 1.08±0.15＊＊ 0.95±0.19針刺組 0.00±0.00 1.06±0.11＊＊ 0.18±0.17▲▲藥物組 0.00±0.00 1.07±0.12＊＊ 0.17±0.20▲▲

2.5 大鼠回腸組織中胃腸激素含量比較

模型組回腸組織中SS、SP含量顯著升高，與空白組比有顯著性差異（P＜0.01）。捆綁組與模型組相比較無顯著性差異（P＞0.05）；針刺組、藥物組與模型組比，回腸組織中SS、SP含量降低，具有顯著性差異（P＜0.01）。結(jié)果見表4。

表4 各組大鼠回腸組織中胃腸激素含量比較（n＝10，）

表4 各組大鼠回腸組織中胃腸激素含量比較（n＝10，）

注：與空白組比較：＊＊P＜0.01；與模型組比較：▲▲P＜0.01。

組別 SS（μg／g） SP（ng／g）空白組9.333±0.992 30.379±1.672模型組 24.147±0.893＊＊ 37.463±1.628＊＊捆綁組 25.443±0.709 36.691±1.671針刺組 13.750±1.225▲▲ 31.317±1.199▲▲藥物組 13.681±0.734▲▲ 31.964±1.547▲▲

2.6 大鼠直腸組織中胃腸激素含量比較

各組大鼠直腸組織中SS、SP含量無顯著性差異（P＞0.05）。結(jié)果見表5。

表5 各組大鼠直腸組織中胃腸激素含量比較（n＝10，）

表5 各組大鼠直腸組織中胃腸激素含量比較（n＝10，）

組別 SS（μg／g） SP（ng／g）空白組157.598±3.799 144.995±3.763模型組 133.270±4.216 131.312±3.070捆綁組 147.631±4.085 142.424±3.805針刺組 147.463±6.547 138.513±2.948藥物組146.268±6.291 141.555±4.208

2.7 大鼠血漿中胃腸激素含量比較

各組大鼠血漿中SS、SP含量無顯著性差異（P＞0.05）。結(jié)果見表6。

表6 各組大鼠血漿中胃腸激素含量比較（n＝10，）

表6 各組大鼠血漿中胃腸激素含量比較（n＝10，）

組別 SS（μg／L） SP（ng／L）空白組75.705±1.508 72.246±3.899模型組 75.687±2.311 72.225±2.508捆綁組 75.725±2.111 72.500±3.110針刺組 74.645±2.615 78.964±2.573藥物組76.844±2.747 80.481±2.579

3 討論

IBS在中醫(yī)學(xué)中屬“泄瀉”、“腹痛”范疇。中醫(yī)認(rèn)為七情失調(diào)可引起內(nèi)臟功能發(fā)生紊亂，尤其對(duì)肝脾有很大的影響。《醫(yī)方考》所云：“瀉責(zé)之脾，痛責(zé)之肝，肝責(zé)之實(shí)，脾責(zé)之虛，脾虛肝實(shí)，故會(huì)痛瀉。”因此肝郁脾虛是IBS最為多見的證型。

針灸治療IBS的優(yōu)點(diǎn)在于無副作用，可避免因胃腸疾病而對(duì)藥物吸收所造成的影響，減少消化道的負(fù)擔(dān)。太沖為足厥陰肝經(jīng)的原穴、輸穴，原穴為臟腑原氣所留止之處，臟腑發(fā)生病變會(huì)相應(yīng)地反應(yīng)到原穴上來，而針刺原穴又能調(diào)整臟腑氣血，通達(dá)三焦氣機(jī)，改善內(nèi)臟功能，從而發(fā)揮其維護(hù)正氣、抗御病邪的作用?！端难偢琛吩唬骸岸歉谷锪簟?，足三里是足陽明胃經(jīng)的合穴、胃之下合穴，“合治內(nèi)腑”，具有和胃健脾、補(bǔ)中益氣、通調(diào)腑氣、扶正祛邪之功能。《靈樞·五邪》記載“邪在脾胃，則病肌肉痛，陽氣有余，陰氣不足，則熱中善饑；陽氣不足，陰氣有余，則寒中腸鳴腹痛；陰陽俱有余，若俱不足，則有寒有熱，皆調(diào)于三里”。金元時(shí)代的李東垣曰“以胃合三里穴推而揚(yáng)之以伸元?dú)狻?，認(rèn)為刺激足三里穴能起到補(bǔ)益脾胃元?dú)庵?。因此，胃腸有疾，當(dāng)為首選。

隨著對(duì)IBS的進(jìn)一步了解，大量研究發(fā)現(xiàn)胃腸激素的改變和IBS的發(fā)病關(guān)系密切。其發(fā)病與胃腸激素SP、粘膜中生長(zhǎng)抑索（SS）、VIP、CGRP、細(xì)胞受體等密切相關(guān)[8]。腦腸肽是調(diào)節(jié)胃腸道運(yùn)動(dòng)的重要物質(zhì)，與IBS發(fā)病密切相關(guān)常見有 VIP、SS、5-HT、SP、NPY等。

生長(zhǎng)抑素（SS）在腦和胃腸道中分布廣泛，對(duì)胃腸道的內(nèi)分泌、外分泌、小腸的吸收和運(yùn)動(dòng)等具有廣泛作用，其主要生理作用為抑制胃腸道的運(yùn)動(dòng)和膽囊收縮[9]。新近研究發(fā)現(xiàn)，腹瀉型IBS患者的血漿和乙狀結(jié)腸黏膜中，SS的含量明顯高于正常人。推測(cè)其作用機(jī)制，腹瀉型IBS的發(fā)生可能是SS升高，間接引起肥大細(xì)胞釋放增多，而肥大細(xì)胞通過釋放生物活性物質(zhì)參與IBS患者的腹痛或腸道運(yùn)動(dòng)加速，誘發(fā)內(nèi)臟的高敏感性，使腸道呈現(xiàn)出運(yùn)動(dòng)占優(yōu)勢(shì)的癥狀：腹痛、腹瀉等[10]。SP是一種速激肽，在全身均有分布，以胃腸道和中樞神經(jīng)系統(tǒng)濃度最高。在腸道中主要存在于腸肌間神經(jīng)叢和黏膜下神經(jīng)叢，可增強(qiáng)胃腸蠕動(dòng)，有強(qiáng)烈促消化道平滑肌收縮，加強(qiáng)結(jié)腸的集團(tuán)推進(jìn)運(yùn)動(dòng)，刺激小腸、結(jié)腸黏膜分泌水和電解質(zhì)作用。

在本實(shí)驗(yàn)中，捆綁組和模型組相比，各種指標(biāo)數(shù)據(jù)均無顯著性差異（P＞0.05），說明捆綁因素在實(shí)驗(yàn)過程中無影響。模型組和捆綁組大鼠回腸組織中SS、SP含量高于其他組，有顯著性差異（P＜0.01），而直腸組織和血漿中各組SS、SP含量無顯著性差異（P＞0.05），說明針刺足三里、太沖主要作用部位在回腸組織中，可通過降低IBS-D模型大鼠回腸中SS、SP含量而發(fā)揮治療作用。

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