高效液相色譜法測定復(fù)方承氣顆粒中芍藥苷和橙皮苷的含量*

王洪志，喬曉莉，劉 勇，莊志宇，李婉晴

(天津市南開醫(yī)院，天津 300100)

復(fù)方承氣顆粒為本院院內(nèi)制劑，主要由赤芍、枳實(shí)、大黃、厚樸、桃仁和芒硝組成，具有泄熱通下，行氣祛瘀的功效，適用于單純性機(jī)械性腸梗阻、麻痹性腸梗阻等腹部疾病。為了有效控制該制劑質(zhì)量，采用RPHPLC法測定方中君藥赤芍和枳實(shí)的主要成分芍藥苷和橙皮苷的含量，該方法可靠、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)。

1 儀器與材料

LC－10A型高效液相色譜儀，島津SPD－10A紫外檢測器，AUTO SCIENCE AT－330柱溫箱，AGT C18色譜柱(250 mm ×4.6 mm，5μm);KQ 3200超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器廠);甲醇(色譜純)，磷酸(分析純)，水為娃哈哈飲用純凈水。芍藥苷對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)110736－200731);橙皮苷對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)110721－200613)。復(fù)方承氣顆粒2批(本院院內(nèi)制劑，批號(hào)20120523，2120525);實(shí)驗(yàn)用藥均購自天津市中藥飲片廠。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:AGT C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇 －1%磷酸(35∶65);檢測波長:270 nm;流速:1.0 ml/min;柱溫:30 ℃;理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算不低于3 000。

2.2 樣品的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷和橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 ml含芍藥苷56μg，含橙皮苷14μg的對(duì)照品混合溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取復(fù)方承氣顆粒1 g，加甲醇50 ml，稱定重量，超聲處理20 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5 ml，加水20 ml，混勻，用水飽和的正丁醇萃取3次，每次25 ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次50 ml，揮干，殘?jiān)蛹状级ㄈ葜?5 ml，即得。

2.2.3 陰性溶液的制備 按處方藥味比例，分別配制不含赤芍與枳實(shí)的模擬制劑，并按“2.2.2”項(xiàng)下方法制成陰性樣品溶液。分別精密量取對(duì)照品溶液，供試品溶液和陰性溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，結(jié)果見圖1。

1.芍藥苷 2.橙皮苷

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取一定量的對(duì)照品，用甲醇溶解并定容，得到芍藥苷濃度為 28.00、56.00、84.00、108.00 和 280.00 μg/ml，橙皮苷濃度為 7.00、14.00、21.00、28.00 和 70.00 μg/ml的對(duì)照品溶液的系列溶液。將上述溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，以對(duì)照品峰面積值(Y)對(duì)其相應(yīng)濃度(X)做線性回歸，得到芍藥苷的回歸方程∶Y=1 288.1 X+5 459.2(r=0.999 4)，表明芍藥苷在28.00 ～280.00 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;橙皮苷的回歸方程為Y=10 194 X －13 074，r=0.999 5，表明橙皮苷在7.00 ～70.00μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn) 取芍藥苷和橙皮苷的混合對(duì)照品溶液(芍藥苷 56.00 μg/m l，橙皮苷 14.00 μg/m l)，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，測定峰面積值，得芍藥苷峰面積RSD為0.97%，橙皮苷峰面積RSD為1.55%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6和8 h按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，得芍藥苷峰面積RSD為0.97%，橙皮苷峰面積RSD為1.55%，表明樣品在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 回收率試驗(yàn) 取同一批樣品，研細(xì)，取0.5 g，共5份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入一定量的芍藥苷和橙皮苷，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算回收率，結(jié)果芍藥苷平均回收率為99.52%，RSD為1.20%，橙皮苷平均回收率為99.12%，RSD為0.66%。結(jié)果見表1、2。

表1 芍藥苷回收率試驗(yàn)(n=5)

樣品中橙皮苷含量(mg)對(duì)照品加入量(mg)測得量(mg)回收率(%)2.984 3.000 5.923 98.98 2.996 3.000 5.912 98.60 2.954 3.000 5.966 100.20 2.984 3.000 5.901 98.61 3.002 3.000 5.953 99.19

2.7 樣品測定 取2批次的復(fù)方承氣顆粒，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測定(n=2) mg/g

3 討論

本實(shí)驗(yàn)根據(jù)文獻(xiàn)的報(bào)道［1－3］，對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行了選擇，最終確定流動(dòng)相為甲醇－1%磷酸(35∶65)時(shí)，峰形良好并可達(dá)到完全分離且保留時(shí)間較短。

芍藥苷和橙皮苷的最大吸收波長分別為230 nm和275 nm［4］，為了提高對(duì)兩種成分的檢測靈敏度，本實(shí)驗(yàn)選擇270 nm為檢測波長。

本實(shí)驗(yàn)建立的反相高效液相色譜法，采用一種流動(dòng)相同時(shí)測定復(fù)方承氣顆粒中芍藥苷和橙皮苷的含量，操作簡單，重復(fù)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于復(fù)方承氣顆粒中芍藥苷和橙皮苷的含量測定，為該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供了參考依據(jù)。

1 周海玲，許舜軍，楊柳.HPLC法測定赤芍中芍藥苷的含量.臨床醫(yī)學(xué)工程，2011，18(4):487

2 傅國強(qiáng)，王少軍，錢星文，等.RP－HPLC法測定枳實(shí)藥材中橙皮苷含量.江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，16(2):62

3 梁遠(yuǎn)園，馮彪，倪晨，等.HPLC法測定枳實(shí)藥材中橙皮苷與柚皮苷的含量.中藥新藥與臨床藥理，2006，17(5):359

4 中國藥典.一部.2010:23，147