龍牙緩釋片釋放度測定及體外釋藥機(jī)制研究

陳大忠，劉 磊，王海龍，李 強(qiáng)

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，哈爾濱150040;2.黑龍江省軍區(qū)醫(yī)院，哈爾濱150001;3.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京100102)

龍牙緩釋片是將從東北地道中藥材龍牙楤木中提取獲得的齊墩果酸成分制成的緩釋片劑，臨床用于治療黃疸型肝炎、慢性肝炎、酒精肝和脂肪肝等[1].目前臨床應(yīng)用的主要有膠囊劑.通過對其緩釋片中齊墩果酸釋放度的測定，探討其體外釋藥機(jī)制.

1 儀器與試藥

美國Waters 600E-2487型高效液相色譜儀，美國Millennium32色譜工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng);電子分析天平BS124SGC-06(北京賽多利斯儀器有限公司);D-800LS智能藥物溶出儀(天津大學(xué)精密儀器廠).乙腈(色譜級)，其他均為分析純，齊墩果酸對照品(中國生物制品檢定所).羥丙基甲基纖維素HPMCK4M(上海COLORCON有限公司);聚乙烯吡咯烷酮(上?；瘜W(xué)試劑公司);微晶纖維素、硬脂酸鎂(山東三泰化工有限公司);乳糖(天津化學(xué)試劑有限公司).

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流動相:乙腈—0.1%磷酸溶液(67∶33)[2];檢測波長:210 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:30℃[3].

2.2 齊墩果酸緩釋片的制備

將主藥與HPMC及其他輔料以等量遞增法混合均勻，過篩(80目)，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.6%PVP乙醇溶液為粘合劑，過20目篩，濕法制粒，70℃干燥整粒，加入適量硬脂酸鎂壓片，即得.

2.3 齊墩果酸的測定方法

2.3.1 對照品溶液制備

精密稱取齊墩果酸對照品，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，制得對照品溶液(1.024 mg/mL).

2.3.2 供試品溶液制備

精密量取溶出液5 mL，經(jīng)0.8μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液.

2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密量取對照品溶液0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL分別置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得.在210 nm處測定系列質(zhì)量濃度的齊墩果酸峰面積值，以吸收峰面積為縱坐標(biāo)，對照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.回歸方程為:y=199 316.07x-686.16，r=0.999 9.齊墩果酸在0.204 8～5.120 0μg之間呈良好的線性關(guān)系.

2.3.4 精密度試驗

精密吸取2.3.2項供試品溶液20μL，注入液相色譜儀，進(jìn)行測定.RSD為0.72%(n=6)，精密度良好.

2.3.5 穩(wěn)定性試驗

精密吸取2.3.2項供試品溶液20μL，注入液相色譜儀，分別在1、2、4、8、12、24 h進(jìn)行測定.RSD為1.01%(n=6)，供試品24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好.

2.3.6 回收率試驗

精密稱取供試品，按其齊墩果酸含量計加入，加入80%、100%、120%的齊墩果酸對照品，用溶出介質(zhì)(0.5%十二烷基硫酸鈉溶液，磷酸鹽調(diào)pH值7.0±0.1)900 mL溶解，制備成供試品溶液，測定計算齊墩果酸量，以測得量與加入量對比，齊墩果酸回收率為98.49%.

2.4 釋放度考察

2.4.1 體外釋放度的測定

按照中國藥典2005版體外釋放度試驗轉(zhuǎn)籃法[4]，釋放介質(zhì)體積分?jǐn)?shù)0.5%十二烷基硫酸鈉溶液900 mL(磷酸鹽調(diào)pH值7.0±0.1)，溫度(37±1)℃，轉(zhuǎn)速100 r/min.分別于2、4、6、8、10、12 h取樣5 mL(補(bǔ)充等體積同溫介質(zhì))，濾過，取續(xù)濾液20μL和對照品溶液20μL，分別注入液相色譜儀，測定峰面積值，外標(biāo)法測定時間點內(nèi)的累計釋放度.

2.4.2 體外釋放度的重現(xiàn)性考察

測定3批龍牙緩釋片不同時間的釋放度，考察批次間釋放度的重現(xiàn)性，實驗結(jié)果見表1.

表1 緩釋片釋放度重復(fù)性試驗結(jié)果(n=6)

利用相似因子f2檢驗考察3批緩釋片之間的釋放度差異，計算方式如下.

其中:n為取樣點個數(shù);Rt為t時間參比樣品的釋藥量;Tt為t時間受檢樣品的釋藥量.當(dāng)f2在0～50之間時，兩因素有差異;f2值在50～100之間，表明兩條釋放曲線相似，即受試制劑和參比制劑間釋藥無差別[5].結(jié)果表明，3批樣品之間無差異.

2.4.3 體外釋放度的均一性考察

以其中一批為對象，在2、4、6、8、10、12 h考察同一批緩釋片的6片釋放度的均一性.結(jié)果見表2.結(jié)果表明，緩釋片釋放均一性較好.

表2 緩釋片釋放度均一性試驗結(jié)果(n=6)

2.5 緩釋片釋藥機(jī)制的探討

對釋放度進(jìn)行零級動力學(xué)方程、一級動力學(xué)方程、Higuchi模型、Ritger-Peppas方程的擬合，分別以各模型擬合方程預(yù)測各時間點的累計釋放百分率與實測值比較，計算AIC值，并求出決定系數(shù)R2(相關(guān)系數(shù)R的平方值).根據(jù)各模型擬合方程的R2值最大、AIC值最小的原則，確定緩釋片體外釋放的最佳擬合模型，并根據(jù)模型擬合結(jié)果對釋放規(guī)律進(jìn)行探討[6].

AIC的計算公式為:AIC=N ln Re+2P，其中:N為實驗數(shù)據(jù)的個數(shù)，本試驗取7;P為所設(shè)模型參數(shù)的個數(shù)，本試驗取2.Re的 計 算 公 式 為:，其中Wi為權(quán)重系數(shù)，可取1.

擬合度結(jié)果見表3.

表3 龍牙緩釋片擬合數(shù)據(jù)結(jié)果

3 討論

1)根據(jù)相關(guān)系數(shù)表明，龍牙楤木中物質(zhì)基礎(chǔ)成分齊墩果酸緩釋片符合Higuich方程、零級動力學(xué)方程和Ritger-pappas[7]方程優(yōu)于一級動力學(xué)方程，其體外釋放機(jī)制比較接近Higuich方程、零級動力學(xué)方程和Ritger-pappas方程釋藥模型.

2)根據(jù)Ritger-peppas指數(shù)釋藥模型F(t)=ktn中[8]，F(xiàn)(t)為藥物在指定時間的累積釋放率，k為常數(shù)，n為藥物釋放機(jī)制的特殊參數(shù)，當(dāng)n＜0.45時，藥物釋放符合Ficks擴(kuò)散機(jī)制，當(dāng)0.45＜n＜0.89時，藥物的釋放為擴(kuò)散與溶蝕協(xié)同作用，當(dāng)n＞0.89時，藥物的釋放為骨架溶蝕機(jī)制.本實驗中Peppas方程:Q=-2.212 7+0.880 1t，r=0.998 3，n為0.88＜0.89，其體外釋放機(jī)制為擴(kuò)散與骨架溶蝕協(xié)同作用機(jī)理，由于齊墩果酸為水難溶性藥物，偏于骨架溶蝕機(jī)制，可以減輕藥物突釋的現(xiàn)象.

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