• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    Ki-67表達及幽門螺桿菌感染在阿司匹林相關(guān)性胃黏膜病變中的作用

    2012-10-17 13:39:50程艷麗劉晉紅劉秀清王亞麗李玉紅張明奎
    關(guān)鍵詞:胞質(zhì)細胞周期阿司匹林

    程艷麗,林 靜,劉晉紅,顧 雁,劉秀清,王亞麗,閆 偉,李玉紅,張明奎

    清華大學(xué)第一附屬醫(yī)院1.消化內(nèi)科;2.病理科;3.心臟中心,北京 100016

    幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,H.pylori)是慢性胃炎和消化性潰瘍的主要病因之一,與胃癌發(fā)生關(guān)系密切。在H.pylori感染相關(guān)性胃炎、胃潰瘍及胃癌病變中,H.pylori可誘導(dǎo)胃黏膜上皮細胞凋亡,并促進其增殖[1-2]。Ki-67的表達與細胞增殖密切相關(guān),是調(diào)節(jié)細胞周期必不可少的組成部分,也是目前較為肯定的核增殖標志基因,存在于細胞周期中除G0期以外的所有階段。Ki-67作為一個重要的細胞增殖標記[3],在胃腸道間質(zhì)瘤及胃癌組織中均有高表達,Ki-67標記指數(shù)可作為胃腸道間質(zhì)瘤的預(yù)測指標,并與癌的生物學(xué)行為和預(yù)后密切相關(guān)[4-5]。但 H.pylori及 Ki-67在阿司匹林相關(guān)性胃黏膜病變中的作用尚無定論。本文通過研究Ki-67表達及H.pylori在阿司匹林相關(guān)性胃黏膜病變中的作用,以進一步揭示阿司匹林導(dǎo)致胃黏膜病變的相關(guān)機制,指導(dǎo)臨床安全使用阿司匹林。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 隨機從2008年12月-2011年1月清華大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科及心臟中心服用阿司匹林導(dǎo)致相關(guān)性胃黏膜病變患者中選擇病例189例,均經(jīng)胃鏡檢查明確診斷,并排除賁門黏膜撕裂癥、消化道腫瘤、食管胃底靜脈曲張破裂導(dǎo)致出血病例,同時排除嚴重肝腎功能不全的患者以及1個月內(nèi)有重大手術(shù)的患者。既往史中無消化道癥狀,如:上腹部疼痛、反酸、燒心、噯氣、惡心、嘔吐、食欲減退等,共136例病例入選,年齡50~78歲,平均年齡(65.66±6.01)歲。患者服用阿司匹林劑量為75~325 mg,時間最短3 d,最長2年。

    1.2 臨床分組 患者在10 d內(nèi)服用阿司匹林后有嘔血和/或黑便癥狀,大便和嘔吐物隱血檢查陽性,就診24 h內(nèi)經(jīng)胃鏡檢查確診為胃和/或十二指腸潰瘍或黏膜糜爛出血,定為出血組;患者服用阿司匹林后在7 d~6個月出現(xiàn)消化道癥狀,如:上腹部疼痛、反酸、燒心、噯氣、惡心、嘔吐、食欲減退,就診24~48 h內(nèi)經(jīng)胃鏡檢查確診為胃和/或十二指腸潰瘍,定為潰瘍組;患者服用阿司匹林后在7 d~6個月出現(xiàn)消化道癥狀,就診24~48 h內(nèi)經(jīng)胃鏡檢查確診為非萎縮性胃炎伴/或不伴糜爛,萎縮性胃炎伴/或不伴糜爛,定為胃炎組;出血組患者24例,其中男16例,女8例;潰瘍組患者46例,其中男28例,女18例;胃炎組患者66例,其中男44例,女22例。對照組為健康體檢者正常胃黏膜排除H.pylori感染,共8例,男6例,女2例,年齡19~30歲,平均年齡(25.00±4.31)歲。所有入選病例均行快速尿素酶試驗檢測、病理組織學(xué)Geimsa染色及13C尿素呼氣試驗,以上3項指標中有2項陽性定為H.pylori感染陽性,分為H.pylori感染陽性組和陰性組,并取胃黏膜組織行Ki-67檢測。

    1.3 主要試劑及實驗方法

    1.3.1 主要試劑:兔抗人Ki-67免疫組化單克隆抗體及S-P試劑盒均購自福州邁新公司。胃幽門螺桿菌快速尿素酶診斷試劑盒、試劑購自福建三強生物化工有限公司。13C尿素呼氣試驗?zāi)蛩啬z囊試劑藥盒購自原子高科股份有限公司,13C呼氣質(zhì)譜儀:ZHP2001型,購自北京中科科儀技術(shù)發(fā)展有限公司。

    1.3.2 實驗方法:(1)幽門螺桿菌檢測:行胃鏡檢查時均在胃竇部取活組織2塊,其中一塊應(yīng)用胃幽門螺桿菌快速尿素酶診斷試劑盒進行檢測。另一塊組織行病理組織學(xué)Giemsa染色;所有患者均行13C尿素呼氣試驗,陽性判斷值:以30 min時樣品中所測13C-CO2的δ‰減去零時的呼氣樣品的δ‰值的差表示,即檢測值=δ‰(30 min)-δ‰(0 min),陽性判斷值≥4.0 ±0.4時,可判斷受試者為陽性。(2)Ki-67免疫組織化學(xué)染色檢測步驟:胃黏膜組織經(jīng)10%的福爾馬林固定,石蠟包埋,4~5 μm厚連續(xù)切片后,采用免疫組織化學(xué)染色(S-P法)檢測Ki-67的表達,步驟參考試劑盒說明書操作,用已知的陽性切片作陽性對照,以 0.01 mmol/L PBS代替一抗作陰性對照。并用HE染色行常規(guī)病理組織學(xué)診斷。

    1.4 H.pylori感染的診斷標準 以上3項指標中有2項陽性,判定為H.pylori感染。

    1.5 胃黏膜組織中Ki-67表達水平的計算方法 用半定量法推算各檢測樣本Ki-67表達情況[6],分別按以下比例記分:胃黏膜上皮組織細胞染色陽性率在0~4%記0分,5% ~24%記1分,25% ~49%記2分,50% ~74%記3分,75% ~100%記4分;染色強度陰性為0分,染色弱,但明顯強于陰性對照者為1分,染色清晰者為2分,染色強者為3分。Ki-67表達水平用胃黏膜上皮組織細胞陽性率與染色強度評分的乘積來表示。

    2 結(jié)果

    2.1 H.pylori感染率 在阿司匹林相關(guān)性胃黏膜病變中,H.pylori感染率在出血組、潰瘍組及胃炎組相比較無明顯差異(P>0.05,見表1)。

    表1 阿司匹林相關(guān)性胃黏膜病變患者H.pylori感染狀況Tab 1 H.pylori infection status of patients with aspirin associated gastric mucosa injury diseas

    2.2 阿司匹林相關(guān)性胃黏膜病變組織中Ki-67表達情況 在正常胃黏膜上皮組織Ki-67無表達或呈弱陽性表達,平均染色積分為0.125±0.354。在阿司匹林相關(guān)性胃黏膜病變中,胃黏膜上皮組織有較強程度的表達,細胞胞質(zhì)著色,呈彌漫或灶狀分布。在出血組中,有58.33%(14/24)的胃黏膜上皮組織細胞胞質(zhì)中呈現(xiàn)明顯的黃色顆粒(見圖1),平均染色積分為3.916 ±1.676;在潰瘍組,有 21.74%(10/46)的胃黏膜上皮組織細胞胞質(zhì)中呈現(xiàn)明顯的黃色顆粒,平均染色積分為2.174 ±1.527;在胃炎組,有12.12%(8/66)的胃黏膜上皮組織細胞胞質(zhì)中呈現(xiàn)明顯的黃色顆粒(見圖2),平均染色積分為 1.394±0.899。出血組中胃黏膜上皮組織Ki-67的表達高于潰瘍組及胃炎組(P<0.05);Ki-67的表達在任兩組間總體均數(shù)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2.3 H.pylori感染狀態(tài)與阿司匹林相關(guān)性胃黏膜病變中Ki-67表達的關(guān)系 在阿司匹林相關(guān)性胃黏膜病變中,H.pylori感染陽性率為 75.00%(102/136)。H.pylori感染陽性患者有25.49%(26/102)的胃黏膜上皮組織細胞胞質(zhì)中呈現(xiàn)明顯的黃色顆粒,平均染色積分為2.275 ±1.511;H.pylori感染陰性患者有17.65%(6/34)的胃黏膜上皮組織細胞胞質(zhì)中呈現(xiàn)明顯的黃色顆粒,平均染色積分為 1.588 ±1.698。H.pylori感染陽性患者的胃黏膜上皮組織中Ki-67陽性表達率明顯高于陰性組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

    圖1 Ki-67在出血組胃黏膜上皮組織的表達(SP 100×);圖2 Ki-67在胃炎組胃黏膜上皮組織的表達(SP 100×)Fig 1 Expression of Ki-67 in gastric mucosa in bleeding group(SP 100×);Fig 2 Expression of Ki-67 in gastric mucosa in gastritis group(SP 100×)

    3 討論

    細胞增殖分裂受多種因素調(diào)節(jié)。在細胞周期中,細胞DNA復(fù)制合成、有絲分裂除必需有關(guān)酶系參與外,還有些蛋白質(zhì)與細胞增殖密切相關(guān),并可被相應(yīng)抗體識別,被稱為細胞增殖相關(guān)抗原,如增殖細胞核抗原、Ki-67、核仁組成區(qū)嗜銀蛋白、statin、p53。其中,Ki-67抗原是1984年由Gerdes等[7]發(fā)現(xiàn)在增殖細胞中表達的一種核抗原,由分子量分別為395 KD和345 KD的雙鏈多肽組成,由人類基因組中約3000 bp編碼。由于Ki-67結(jié)構(gòu)獨特,缺乏與之同源的序列進行對比研究,盡管目前掌握了結(jié)構(gòu)、生物學(xué)特征方面的大量資料,但其生理功能仍不清楚。大量實驗研究證明Ki-67的表達與細胞增殖密切相關(guān),是調(diào)節(jié)細胞周期必不可少的組成部分。也是目前較為肯定的核增殖標志基因,存在于細胞周期中除G0期以外的所有階段。它開始表達于細胞周期的G1期,在S期及G2期表達增加,至M期達高峰,在分裂晚期很快消失。由于其半衰期短,脫離細胞周期后迅速降解,因此,被認為是能較可靠地全面反映細胞群體增殖活性的客觀指標[8-9],已成為目前檢測腫瘤細胞增殖活性最可靠的指標[7]。Ki-67在非腫瘤性胃黏膜中不表達或低表達,說明該組織增生活性較低。在胃腸道間質(zhì)瘤及胃癌組織中均有高表達,Ki-67標記指數(shù)可作為胃腸道間質(zhì)瘤的預(yù)測指標,并與癌的生物學(xué)行為和預(yù)后密切相關(guān)[4-5]。此外,有研究發(fā)現(xiàn),非甾體類消炎藥(nonsteroidal antiinflammatory drugs,NSAIDs)吲哚美辛可導(dǎo)致大鼠胃黏膜上皮細胞增殖減少,Ki-67表達下調(diào)[10]。既往在阿司匹林誘發(fā)導(dǎo)致胃黏膜損傷的分子機制方面,認為阿司匹林除可直接刺激胃黏膜外,同時可通過抑制環(huán)氧化酶1(Cyclooxygenase-1,COX-1)阻斷花生四烯酸代謝成前列腺素(Prostaglandins,PG),從而抑制前列腺素的合成而致胃黏膜損傷。本實驗發(fā)現(xiàn),在正常胃黏膜上皮組織Ki-67無表達或呈弱陽性表達,平均積分為0.125 ±0.354,在阿司匹林導(dǎo)致胃黏膜病變中,出血組有58.33%(7/12)的胃黏膜上皮組織細胞胞質(zhì)中呈現(xiàn)明顯的黃色顆粒,平均積分為3.916±1.676;潰瘍組有21.74%(5/23)的胃黏膜上皮組織細胞胞質(zhì)中呈現(xiàn)明顯的黃色顆粒,平均積分為2.174±1.527;胃炎組有12.12%(4/33)的胃黏膜上皮組織細胞胞質(zhì)中呈現(xiàn)明顯的黃色顆粒,平均積分為1.394±0.899。出血組中Ki-67的表達高于潰瘍組及胃炎組的胃黏膜上皮組織,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);說明在阿司匹林相關(guān)性胃黏膜病變中,隨著胃黏膜損傷的加重,Ki-67的表達增強,細胞增殖明顯,細胞增殖可能是阿司匹林相關(guān)性胃黏膜病變的發(fā)病機制之一,與黏膜損傷程度有關(guān)。

    有關(guān)H.pylori對細胞增殖作用的報道不一,大多數(shù)體外試驗顯示H.pylori抑制細胞增殖[11-12],但多數(shù)人體內(nèi)胃黏膜細胞組織學(xué)研究顯示,H.pylori可促進細胞增殖[1-2,13-15],H.pylori感染陽性胃炎或非潰瘍性消化不良患者的胃黏膜上皮細胞增殖比對照組顯著增高,根除 H.pylori感染后會導(dǎo)致細胞增殖的降低[8]。目前研究認為,胃黏膜上皮細胞的增殖是H.pylori感染的繼發(fā)性反應(yīng)。H.pylori感染時炎癥反應(yīng)產(chǎn)生的細胞因子和氧自由基可能刺激胃黏膜上皮細胞的增殖;另一方面,由H.pylori感染直接導(dǎo)致的胃黏膜的損傷和凋亡更有可能導(dǎo)致胃上皮細胞的代償性增生[16]。本研究發(fā)現(xiàn),在阿司匹林相關(guān)性胃黏膜病變中,H.pylori的感染率為75.00%,其中出血組為83.33%,潰瘍組為78.26%,胃炎組為69.70%,H.pylori感染率在出血組、潰瘍組及胃炎組相比較無明顯差異(P>0.05),但在出血組,H.pylori感染率仍然高于潰瘍組及胃炎組,說明H.pylori感染和阿司匹林均增加了上消化道出血的危險性,兩者在導(dǎo)致上消化道出血病變中可能起協(xié)同作用。此外,在阿司匹林相關(guān)性胃黏膜病變中,H.pylori感染陽性組的胃黏膜上皮組織Ki-67染色積分為2.275±1.511,陰性組胃黏膜上皮組織Ki-67染色積分為1.588±1.698,統(tǒng)計學(xué)有顯著性差異(P<0.05)。說明阿司匹林相關(guān)性胃黏膜病變組織中,胃黏膜上皮細胞增殖不僅與阿司匹林導(dǎo)致胃黏膜損傷有關(guān),與H.pylori感染亦有一定關(guān)系,阿司匹林和H.pylori均參與了胃黏膜的損傷,導(dǎo)致了胃黏膜增殖。在臨床工作中,若H.pylori感染陽性患者,服用阿司匹林治療時,需根除H.pylori治療,以減少胃黏膜的損傷。

    [1]El-Zimaity HM,Graham DY,Genta RM,et al.Sustained increase in gastric antral epithelial cell proliferation despite cure of Helicobacter pylori infection[J].Am J Gastroenterol,2000,95(4):930-935.

    [2]Ohkura Y,F(xiàn)urihata T,Kawamata H,et al.Evaluation of cell proliferation and apoptosis in Helicobacter pylori gastritis using an image analysis processor[J].Gastric Cancer,2003,6(1):49-54.

    [3]Yonemura Y,Ooyama S,Sugiyama K,et al.Growth fraction in gastric carcinomas determined with monoclonal antibody Ki67 [J].Cancer,1990,65(5):1130-1134.

    [4]Pollack A,DeSilvio M,Khor LY,et al.Ki-67 staining is a strong predictor of distant metastasis and mortality for men with prostate cancer treated with radiotherapy plus androgen deprivation:Radiation Therapy Oncology Group Trial 92-02[J].J Clin Oncol,2004,22(11):2133-2144.

    [5]Sun M,Zhang XY,Zou HJ,et al.The relationship of Cyclin D1,Ki67 and Bcl-2 expression with prognosis in gastrointestinal stromal tumors[J].Chin J Gastrointest Surg,2005,8(6):542-543.孫梅,張興義,鄒洪杰,等.Cyclin D1、Ki67和Bcl-2在胃腸道間質(zhì)瘤的表達及與其預(yù)后的關(guān)系[J].中華胃腸外科雜志,2005,8(6):542-543.

    [6]Krajewska M,,Krajewski S,Epstein JL,et al.Immunohistochemical analysis of bcl-2,bax,bcl-X,and mcl-1 expression in prostate cancers[J].Am J Pathol,1996,148(5):1567-1576.

    [7]Gerdes J,Li L,Schlueter C,et al.Immunobiochemical and molecular biologic characterization of the cell proliferation associated nuclear antigen that is defined by monoclonal antibody Ki-67 [J].Am J Pathol,1991,138(4):867-873.

    [8]Preusser M,Heinzl H,Gelpi E,et al.Ki-67 index in intracranial ependymoma:a promising histopathological candidate biomarker[J].Histopathology,2008,53(1):39-47.

    [9]Vernillo R,Lorenzi B,Banducci T,et al.Immunohistochemical expression of p53 and Ki-67 in colorectal adenomas and prediction of malignancy and development of new polyps [J].Int J Biol Markers,2008,23(2):89-95.

    [10]Fornai M,Colucci R,Antonioli L,et al.Effects of esomeprazole on healing of nonsteroidal anti-inflammatory drug(NSAID)-induced gastric ulcers in the presence of a continued NSAID treatment:characterization of molecular mechanisms[J].Pharmacol Res,2011,63(1):59-67.

    [11]Smoot DT,Wynn Z,Elliott TB,et al.Effects of Helicobacter pylori on proliferation of gastric epithelial cells in vitro[J].Am J Gastroenterol,1999,94(6):1508-1511.

    [12]Kurosawa A,Miwa H,Hirose M,et al.Inhibition of cell proliferation and induction of apoptosis by Helicobacter pylori through increased phosphorylated p53,p21 and Bax expression in endothelial cells[J].J Med Microbiol,2002,51(5):385-391.

    [13]Ohkura Y,F(xiàn)urihata T,Kawamata H,et al.Evaluation of cell proliferation and apoptos is in Helicobacter pylori gastritis using an image analysis processor[J].Gastric Cancer,2003,6(1):49-54.

    [14]Ma F,Misumi J,ZhaoW,et al.Long-term treatment with sterigmatocystin,a fungus toxin,enhances the development of intestinal metaplasia of gastric mucosa in Helicobacter pylori-infected Mongolian gerbils[J].Scand J Gastroenterol,2003,38(4):360-369.

    [15]Petersson F,Borch K,F(xiàn)ranzen LE.Gastric epithelial proliferation and p53 and p21 expression in a general population sample:relations to age,sex,and mucosal changes associated with H.pyloriylori in fection[J].Dig Dis Sci,2002,47(7):1558-1566.

    [16]Peek RM Jr,Wirth HP,Moss SF,et al.Helicobacter pylori alters gastric epithelial cell cycle events and gastrin secretion in Mongolian gerbils[J].Gastroenterology,2000,118(1):48-59.

    猜你喜歡
    胞質(zhì)細胞周期阿司匹林
    阿司匹林,天天在吃,但你可能從一開始就沒吃對
    祝您健康(2023年9期)2023-09-05 02:06:28
    Me & Miss Bee
    餐前還是飯后?阿司匹林到底怎么吃
    餐前還是飯后?阿司匹林到底怎么吃
    紅霉素聯(lián)合順鉑對A549細胞的細胞周期和凋亡的影響
    Vav1在胃癌中的表達及其與預(yù)后的相關(guān)性
    NSCLC survivin表達特點及其與細胞周期的關(guān)系研究
    X線照射劑量率對A549肺癌細胞周期的影響
    癌癥進展(2016年10期)2016-03-20 13:15:43
    熊果酸對肺癌細胞株A549及SPCA1細胞周期的抑制作用
    survivin胞內(nèi)定位表達在胸部腫瘤鑒別診斷中的意義
    一级片'在线观看视频| 男人爽女人下面视频在线观看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲精品国产av蜜桃| 精品一区二区三卡| av视频免费观看在线观看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 欧美日韩视频精品一区| 久久影院123| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 亚洲专区国产一区二区| 午夜福利视频在线观看免费| 性高湖久久久久久久久免费观看| 美女主播在线视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久人人爽人人片av| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产免费现黄频在线看| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲欧洲日产国产| 女性被躁到高潮视频| 黄色 视频免费看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 91成年电影在线观看| 成人国产一区最新在线观看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 少妇的丰满在线观看| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 啦啦啦免费观看视频1| 久久精品人人爽人人爽视色| 欧美日韩一级在线毛片| 高潮久久久久久久久久久不卡| 欧美日韩av久久| 亚洲成人免费av在线播放| 一二三四社区在线视频社区8| 最近最新中文字幕大全免费视频| 狂野欧美激情性xxxx| 脱女人内裤的视频| 欧美日韩黄片免| 成年动漫av网址| 最近中文字幕2019免费版| 大香蕉久久成人网| 亚洲国产精品一区三区| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 日韩欧美一区视频在线观看| 69av精品久久久久久 | 色播在线永久视频| 国产在线一区二区三区精| 在线精品无人区一区二区三| 两性夫妻黄色片| 国产激情久久老熟女| 午夜福利影视在线免费观看| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲中文av在线| 国产色视频综合| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 午夜日韩欧美国产| videos熟女内射| 五月开心婷婷网| 男人操女人黄网站| 久久 成人 亚洲| 999久久久精品免费观看国产| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产一区二区激情短视频 | 性色av乱码一区二区三区2| 国产欧美日韩一区二区三 | 91成人精品电影| 超碰成人久久| 午夜久久久在线观看| 永久免费av网站大全| 精品一品国产午夜福利视频| 水蜜桃什么品种好| 亚洲色图综合在线观看| 精品久久久久久电影网| 高清黄色对白视频在线免费看| 欧美午夜高清在线| 男女之事视频高清在线观看| 高清av免费在线| 老司机影院成人| 国产成人系列免费观看| 电影成人av| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 夜夜骑夜夜射夜夜干| 久久久精品区二区三区| 国产一区二区激情短视频 | 精品人妻1区二区| 国产在线视频一区二区| 国产国语露脸激情在线看| 真人做人爱边吃奶动态| 丁香六月天网| cao死你这个sao货| 久久这里只有精品19| 18禁黄网站禁片午夜丰满| av一本久久久久| 国产精品免费视频内射| 亚洲,欧美精品.| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 日韩视频一区二区在线观看| 亚洲人成电影免费在线| www.熟女人妻精品国产| 妹子高潮喷水视频| 91精品三级在线观看| 男人操女人黄网站| 精品国产国语对白av| 乱人伦中国视频| 色94色欧美一区二区| 久久九九热精品免费| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲中文字幕日韩| 成人免费观看视频高清| 成人国语在线视频| 午夜激情av网站| 国产免费av片在线观看野外av| 99国产精品一区二区蜜桃av | 一区在线观看完整版| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 精品人妻1区二区| 性色av乱码一区二区三区2| 国产男女内射视频| 悠悠久久av| 国产精品.久久久| 极品人妻少妇av视频| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲成人国产一区在线观看| 久久香蕉激情| 老司机影院成人| 他把我摸到了高潮在线观看 | 黄片播放在线免费| 国产亚洲精品第一综合不卡| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 黄片播放在线免费| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲中文日韩欧美视频| 精品一品国产午夜福利视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 99国产精品一区二区三区| 精品视频人人做人人爽| 青草久久国产| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 国产在线观看jvid| 一区二区三区精品91| 黄色毛片三级朝国网站| 欧美97在线视频| 一级,二级,三级黄色视频| 精品第一国产精品| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 交换朋友夫妻互换小说| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久久久久久人人人人人| 国产伦人伦偷精品视频| 久久ye,这里只有精品| 少妇粗大呻吟视频| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 中文字幕色久视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产成人免费观看mmmm| 久久人人爽人人片av| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产精品1区2区在线观看. | 国产高清视频在线播放一区 | 欧美精品亚洲一区二区| 90打野战视频偷拍视频| www.熟女人妻精品国产| 精品人妻1区二区| 啪啪无遮挡十八禁网站| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 无遮挡黄片免费观看| 精品福利永久在线观看| 国产成人免费无遮挡视频| 无遮挡黄片免费观看| 国产成人精品无人区| 亚洲情色 制服丝袜| 欧美+亚洲+日韩+国产| 日本a在线网址| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 欧美日韩亚洲高清精品| 大型av网站在线播放| 亚洲综合色网址| 五月天丁香电影| 两个人免费观看高清视频| 中国美女看黄片| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 精品少妇内射三级| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 黄色 视频免费看| avwww免费| 十八禁网站网址无遮挡| 狠狠狠狠99中文字幕| av网站免费在线观看视频| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产精品久久久久久精品电影小说| 国产精品影院久久| 午夜福利在线观看吧| 国产av国产精品国产| 欧美av亚洲av综合av国产av| 久9热在线精品视频| 国产在视频线精品| 欧美日本中文国产一区发布| 欧美黄色淫秽网站| 国产一级毛片在线| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产亚洲精品一区二区www | 80岁老熟妇乱子伦牲交| 一本色道久久久久久精品综合| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 曰老女人黄片| 亚洲第一青青草原| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| tocl精华| 两个人看的免费小视频| 又黄又粗又硬又大视频| 老司机靠b影院| 午夜福利乱码中文字幕| 国产一区二区三区综合在线观看| 大陆偷拍与自拍| 国产男人的电影天堂91| 成年人午夜在线观看视频| 热99久久久久精品小说推荐| 五月开心婷婷网| 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲成人免费av在线播放| 69av精品久久久久久 | 国产极品粉嫩免费观看在线| 脱女人内裤的视频| 成年av动漫网址| 午夜福利免费观看在线| 操美女的视频在线观看| 亚洲专区字幕在线| 日本91视频免费播放| cao死你这个sao货| 国产成人欧美在线观看 | 亚洲av日韩在线播放| 亚洲avbb在线观看| 亚洲精品第二区| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 精品熟女少妇八av免费久了| 99九九在线精品视频| av欧美777| 国产色视频综合| 久久国产亚洲av麻豆专区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲精华国产精华精| 精品一区二区三区av网在线观看 | 一区二区三区乱码不卡18| 啦啦啦免费观看视频1| 桃红色精品国产亚洲av| 一区二区三区四区激情视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 老熟妇仑乱视频hdxx| 欧美黑人欧美精品刺激| 成人黄色视频免费在线看| 一区二区三区激情视频| 满18在线观看网站| 亚洲天堂av无毛| 美国免费a级毛片| 欧美成人午夜精品| 一区二区日韩欧美中文字幕| 51午夜福利影视在线观看| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲一区中文字幕在线| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| av网站免费在线观看视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 乱人伦中国视频| 少妇 在线观看| 国产91精品成人一区二区三区 | 国产一区二区激情短视频 | 91字幕亚洲| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 99久久精品国产亚洲精品| 美国免费a级毛片| 国产在线观看jvid| 天堂中文最新版在线下载| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产91精品成人一区二区三区 | 亚洲中文av在线| 久9热在线精品视频| 亚洲国产欧美网| 欧美av亚洲av综合av国产av| 欧美精品一区二区免费开放| 91精品国产国语对白视频| 日本91视频免费播放| 久久免费观看电影| 777米奇影视久久| 99热全是精品| 久久久国产精品麻豆| 午夜激情久久久久久久| 超碰97精品在线观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 99热网站在线观看| 亚洲国产精品一区三区| 亚洲伊人色综图| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 91大片在线观看| 天堂俺去俺来也www色官网| 在线永久观看黄色视频| 国产精品 国内视频| 黄片播放在线免费| 新久久久久国产一级毛片| 日韩欧美免费精品| 国产精品 欧美亚洲| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 一进一出抽搐动态| 午夜激情av网站| 国产三级黄色录像| 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲三区欧美一区| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 免费一级毛片在线播放高清视频 | 国产免费视频播放在线视频| 国产高清视频在线播放一区 | 99久久综合免费| 亚洲三区欧美一区| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 真人做人爱边吃奶动态| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 99热网站在线观看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 女性生殖器流出的白浆| 成人国语在线视频| 亚洲欧美激情在线| 久久中文字幕一级| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产xxxxx性猛交| 满18在线观看网站| xxxhd国产人妻xxx| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 午夜福利乱码中文字幕| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲专区字幕在线| 亚洲第一青青草原| 桃花免费在线播放| 女性被躁到高潮视频| 成年人免费黄色播放视频| 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 日本欧美视频一区| 老司机影院毛片| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 亚洲少妇的诱惑av| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 久久国产精品人妻蜜桃| 悠悠久久av| 五月开心婷婷网| 午夜激情久久久久久久| 妹子高潮喷水视频| 国产精品av久久久久免费| 高清在线国产一区| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 国产有黄有色有爽视频| 久久久精品94久久精品| 欧美日韩亚洲高清精品| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产片内射在线| 男女午夜视频在线观看| 久久性视频一级片| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久 | 亚洲欧美一区二区三区久久| 日韩欧美免费精品| 男人爽女人下面视频在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av | 丝袜美足系列| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 黑人操中国人逼视频| 日韩视频一区二区在线观看| 日韩免费高清中文字幕av| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲欧美一区二区三区久久| 天堂中文最新版在线下载| 免费日韩欧美在线观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 久久久国产成人免费| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 国产精品免费视频内射| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 人妻久久中文字幕网| 国产亚洲一区二区精品| 国产精品av久久久久免费| av天堂久久9| av线在线观看网站| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 美女午夜性视频免费| 一区二区三区精品91| 日韩免费高清中文字幕av| 日本精品一区二区三区蜜桃| 日韩中文字幕视频在线看片| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲黑人精品在线| av天堂久久9| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 精品久久久久久电影网| 亚洲欧美色中文字幕在线| 一级片'在线观看视频| 国产av一区二区精品久久| 中国国产av一级| 99re6热这里在线精品视频| 日本av手机在线免费观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产片内射在线| 国产日韩欧美在线精品| 欧美日韩一级在线毛片| 高清欧美精品videossex| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 久久久国产成人免费| 亚洲欧美激情在线| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 一级毛片电影观看| 少妇粗大呻吟视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| av国产精品久久久久影院| 在线观看免费视频网站a站| tocl精华| 水蜜桃什么品种好| 美女脱内裤让男人舔精品视频| www.精华液| 久久久久久久大尺度免费视频| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 多毛熟女@视频| 美女视频免费永久观看网站| 高清黄色对白视频在线免费看| 欧美精品av麻豆av| 亚洲精品国产av蜜桃| 99国产精品一区二区蜜桃av | 精品国内亚洲2022精品成人 | 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 老熟妇仑乱视频hdxx| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 性少妇av在线| 亚洲综合色网址| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 欧美中文综合在线视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 永久免费av网站大全| 亚洲国产欧美网| 亚洲精品成人av观看孕妇| 无遮挡黄片免费观看| 大香蕉久久成人网| 欧美性长视频在线观看| 啦啦啦 在线观看视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 午夜福利视频在线观看免费| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 热re99久久精品国产66热6| a级毛片在线看网站| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 一进一出抽搐动态| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲伊人色综图| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 脱女人内裤的视频| av欧美777| 一区二区av电影网| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产成人a∨麻豆精品| 免费在线观看完整版高清| 日本vs欧美在线观看视频| 欧美激情久久久久久爽电影 | 精品一区在线观看国产| videos熟女内射| 成人手机av| 欧美激情久久久久久爽电影 | 桃花免费在线播放| 性色av一级| 麻豆av在线久日| 午夜激情av网站| 亚洲精华国产精华精| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 亚洲情色 制服丝袜| 午夜福利,免费看| 久久久久久久久免费视频了| 久久毛片免费看一区二区三区| 国产男女内射视频| 欧美在线黄色| 女人精品久久久久毛片| 欧美+亚洲+日韩+国产| bbb黄色大片| 亚洲全国av大片| 日本一区二区免费在线视频| 中文字幕制服av| 99精品久久久久人妻精品| 欧美 日韩 精品 国产| 成人黄色视频免费在线看| 美女视频免费永久观看网站| 国产一区二区三区av在线| 日韩一区二区三区影片| 黄片大片在线免费观看| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 免费高清在线观看视频在线观看| 一级黄色大片毛片| 最新的欧美精品一区二区| 一边摸一边做爽爽视频免费| 欧美日韩成人在线一区二区| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 欧美日韩成人在线一区二区| 97精品久久久久久久久久精品| 高清黄色对白视频在线免费看| 99久久99久久久精品蜜桃| 一二三四社区在线视频社区8| 夫妻午夜视频| tube8黄色片| 亚洲国产欧美在线一区| 国产淫语在线视频| 国产精品 欧美亚洲| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 黄色视频,在线免费观看| 日韩免费高清中文字幕av| 精品免费久久久久久久清纯 | 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 久久香蕉激情| 午夜精品国产一区二区电影| 精品国产乱码久久久久久小说| 男人舔女人的私密视频| 日本wwww免费看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 老司机福利观看| 国产在线视频一区二区| 男人爽女人下面视频在线观看| 久久香蕉激情| 在线观看免费视频网站a站| 久久 成人 亚洲| 电影成人av| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 高清在线国产一区| 大陆偷拍与自拍| 亚洲中文字幕日韩| 爱豆传媒免费全集在线观看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 亚洲五月色婷婷综合| 少妇人妻久久综合中文| 黄片小视频在线播放| netflix在线观看网站| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 精品亚洲成a人片在线观看| 欧美久久黑人一区二区| 免费观看人在逋| 动漫黄色视频在线观看| 精品久久蜜臀av无| 黄色视频不卡| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产欧美日韩一区二区三 | 大香蕉久久网| 欧美日韩精品网址| 国产一区二区在线观看av| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 中文字幕人妻熟女乱码| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 日日夜夜操网爽| 国产精品 国内视频| 十八禁高潮呻吟视频| 青青草视频在线视频观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产高清国产精品国产三级| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 女性生殖器流出的白浆| 国产日韩欧美视频二区| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产精品熟女久久久久浪| 免费在线观看黄色视频的| 久久毛片免费看一区二区三区| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲天堂av无毛| 久热这里只有精品99| 丝袜美足系列| 久久九九热精品免费| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲av片天天在线观看| 青草久久国产| 成年动漫av网址| 午夜91福利影院| 香蕉国产在线看| 午夜免费观看性视频| 国产亚洲精品一区二区www | 国产成人影院久久av| 国产精品久久久av美女十八| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 无遮挡黄片免费观看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 18在线观看网站| 国产成人系列免费观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 一区二区三区精品91| 国产真人三级小视频在线观看| 亚洲成人手机| 如日韩欧美国产精品一区二区三区|