紅細(xì)胞懸液輻照前后在不同貯存期游離血紅蛋白含量的比較

王九兵 王永維 重慶市精神衛(wèi)生中心檢驗(yàn)科 4047； 重慶市涪陵區(qū)中心血站

血站的血液制品主要是紅細(xì)胞懸液，近來一些血站開展了對(duì)血液制品的輻照，以降低輸血相關(guān)性移植物抗宿主病（TA－GVHD）。其制備、輻照、保存等過程中可能影響紅細(xì)胞的生存質(zhì)量，導(dǎo)致其中的游離血紅蛋白含量比正常全血的高，必須控制好各環(huán)節(jié)，保證臨床的輸注質(zhì)量與安全。

1 儀器設(shè)備

1.1 輻照設(shè)備 GC－3000－Ⅰ血液輻照儀（Cs137，中心劑量5Gy／min），加拿大諾迪安公司。

1.2 離心設(shè)備 80－2型離心沉淀器，上海手術(shù)器械廠。

1.3 加樣設(shè)備 移液器100～1 000μl，德國(guó)eppendorf公司。

1.4 孵育設(shè)備 HH W 21 600型電子恒溫水箱，上?？莆鲈囼?yàn)儀器廠。

1.5 檢測(cè)設(shè)備 eppendorf 6124型半自動(dòng)生化分析儀，德國(guó)eppendorf公司。

2 試劑

成品血漿游離血紅蛋白測(cè)定試劑，北京瑞爾達(dá)生物科技有限公司，批號(hào)：C1001003。

3 檢測(cè)方法與結(jié)果

3.1 操作步驟

3.1.1 紅細(xì)胞懸液的準(zhǔn)備：將采集的全血在全程冷鏈控制的情況下，于采后6h內(nèi)制備成紅細(xì)胞懸液，并分為兩組，一組將紅細(xì)胞懸液置于輻照儀中，通過γ射線中心靶計(jì)量≥25Gy輻照［1］；另一組不輻照。

3.1.2 將輻照前、后的紅細(xì)胞懸液，均置于（4±2）℃下保存。

3.1.3 在無菌條件下，從血袋中取出紅細(xì)胞懸液約5ml，3 000r／min離心5min〔在（4±2）℃下保存原袋紅細(xì)胞懸液，供下次不同時(shí)期取樣使用〕。

3.1.4 取離心后的上清液，按以下步驟操作，見表1。

表1 操作步驟（ml）

3.2 結(jié)果 分別取已制備保存的當(dāng)天、1周、2周、3周、4周后的紅細(xì)胞懸液進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如表2。將輻照前后不同儲(chǔ)存時(shí)期的游離血紅蛋白含量進(jìn)行比較（實(shí)驗(yàn)組不包含第17號(hào)標(biāo)本結(jié)果），對(duì)檢測(cè)結(jié)果作t檢驗(yàn)，其中當(dāng)天、第1周、第2周P＞0.05，說明輻照前、后含量無顯著差異；第3周與第4周P＜0.05，說明輻照前、后含量有顯著差異。

混勻，恒溫水箱37℃反應(yīng)20min，于生化分析儀上測(cè)定，光徑10mm，波長(zhǎng)505nm，空白管調(diào)零比色。

表2 輻照前、后不同貯存期紅細(xì)胞懸液中游離血紅蛋白含量（mg／L）

4 討論

由于紅細(xì)胞懸液的制備過程、輻照、保存對(duì)紅細(xì)胞本身有影響，所以游離血紅蛋白的含量比正常全血高。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《全血及成分血質(zhì)量要求》GB－18469［2］，沒有對(duì)輻照后紅細(xì)胞懸液中游離血紅蛋白的含量作出明確的要求。但制備人員也應(yīng)通過控制制備過程的操作等方式來延長(zhǎng)紅細(xì)胞的壽命，控制其中的游離血紅蛋白的含量。

4.1 從檢測(cè)結(jié)果比較，在未輻照紅細(xì)胞懸液的保存期（CPDA保存液，35d）內(nèi)和輻照后紅細(xì)胞懸液的保存期（參照FDA推薦輻照后紅細(xì)胞保存期不能超過28d）［3］內(nèi)，前3周內(nèi)輻照前、后的紅細(xì)胞懸液中游離血紅蛋白的含量沒有明顯的變化；但從第3周到第4周變化明顯，雖然都在正常范圍內(nèi)，但筆者仍建議每天根據(jù)臨床用血計(jì)劃對(duì)庫(kù)存血液進(jìn)行輻照，盡量縮短輻照后的保存時(shí)間，控制在21d以內(nèi)更為安全。

4.2 隨著保存期的延長(zhǎng)，游離血紅蛋白含量逐漸增加，但直到末期也能達(dá)到臨床輸注要求范圍（按《全血及成分血質(zhì)量要求》GB－18469中冰凍紅細(xì)胞洗滌后的游離血紅蛋白含量≤1g／L要求推算）［4］。本次實(shí)驗(yàn)中1例超出范圍，屬于檢測(cè)取樣的操作不當(dāng)所致（第3次取樣后血辮熱合不全，血液已污染），在統(tǒng)計(jì)分析時(shí)已舍該值。

4.3 導(dǎo)致游離血紅蛋白檢測(cè)含量增高的因素有：（1）輻照后儲(chǔ)存對(duì)紅細(xì)胞代謝、功能等造成不同程度的影響，隨保存期的延長(zhǎng)，紅細(xì)胞代謝廢物的產(chǎn)生，血袋中紅細(xì)胞的生存條件變化，部分紅細(xì)胞壽命縮短，損傷增加。（2）每次從原血袋中取樣，都會(huì)對(duì)每袋懸液中的紅細(xì)胞造成影響，所以控制取樣的環(huán)境條件（特別控制污染）和輕拿輕放等。（3）檢測(cè)過程中，標(biāo)本的處理也會(huì)影響紅細(xì)胞的質(zhì)量，導(dǎo)致游離血紅蛋白含量增高。

4.4 要求制備紅細(xì)胞懸液時(shí)，嚴(yán)格執(zhí)行好各項(xiàng)操作規(guī)程，控制制備環(huán)境條件和存儲(chǔ)條件；在對(duì)紅細(xì)胞懸液進(jìn)行輻照的過程中，注意一次照射的血量，防止在放入和取出容器時(shí)的擠壓，最大程度保證紅細(xì)胞懸液中的細(xì)胞質(zhì)量，保證輸注有效及降低危害。

［1］梁華欽，鄧晶，田兆嵩，等.γ射線輻照對(duì)血液質(zhì)量的影響〔J〕.中國(guó)輸血雜志，2002，15（3）：177－178.

［2］中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.GB18469－2001全血及成分血質(zhì)量要求〔S〕.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2004.

［3］呂秋霜，任芙蓉，李慧，等.不同保存期全血輻照后紅細(xì)胞保存損傷的研究〔J〕.中國(guó)輸血雜志，2003：16（3）：170－172.

［4］劉菲，劉春蓮.不同貯存期紅細(xì)胞懸液中游離血紅蛋白量的變化〔J〕.貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，30（6）：564.