宮頸癌中PPARγ的表達(dá)及其意義

梁少?gòu)?qiáng) 涂青松 黃榮 蔣軍 姜武忠 袁君 曾曉紅 何瀚 周菲菲

[摘要] 目的 研究宮頸癌組織中過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ的表達(dá)及其意義。 方法 采用免疫組織化學(xué)SABC法，檢測(cè)40例宮頸癌組織、10例宮頸炎組織和10例非典型增生宮頸組織切片中的PPARγ的表達(dá)，結(jié)合病理學(xué)分型、臨床分期、放療敏感性探討其意義。 結(jié)果 PPARγ在3組中均有一定程度的表達(dá)，但宮頸癌組織中PPARγ的表達(dá)明顯高于宮頸炎組織及非典型增生宮頸組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；PPARγ分別與宮頸癌臨床分期、放療敏感性和骨、肺、肝等遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和5年生存期有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論 宮頸癌組織中PPARγ的表達(dá)均顯著增高，對(duì)判斷宮頸癌預(yù)后及指導(dǎo)臨床治療有重要的參考意義。

[關(guān)鍵詞] 宮頸癌；過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ；免疫組織化學(xué)法

[中圖分類號(hào)] R34；R711.74???[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A???[文章編號(hào)] 2095-0616（2012）15-18-03

The expression and significance of PPAR γ in cervical cancer

LIANG?Shaoqiang1??TU?Qingsong2??HUANG?Rong1??JIANG?Jun1??JIANG?Wuzhong1??YUAN?Jun2ZENG?Xiaohong1??HE?Han1??ZHOU?Feifei1

1.Department of Radiotherapy, Tumor Hosipital of the First People's Hospital of Foshan,Foshan 528000 China;2.Department of Radiation Oncology,Xiangya Hospital of Central South University,Changsha 410008,China

[Abstract] Objective To investigate the expression and clinical significance of PPARγ in cervical carcinoma. Methods Expressions of PPARγ in 40 cases of formalin-fixed,paraffin-embeded cervical carcinoma tissues,0 cases of cervicitis tissues and 10 cases of cervical intraepithelial neoplasia tissues, were examined using Strept-Avidin-Biotin Complex (SABC) immunohistochemical method. Results PPARγ was mainly localized in the nucleus and cytoplasm of the tumor cell. It was expressed in each group with different levels,but the expression rate of PPARγ in cervical carcinoma was significantly higher than those in cervicitis tissues and cervical intraepithelial neoplasia tissues (P＜0.05). It was well associated with the clinic stages,radiosensitivity,5-year survival time and meta-stasis(lymph node,skeleton,liver,lung,etc) of the carcinoma (P＜0.05). Conclusion High level expressions of PPARγ may serve as meaningful indicators for prognosis and clinical therapy of the cervical carcinoma.

[Key words] Cervical carcinoma;Proxisome proliferator-activated receptor γ;Immunohistochemistry

過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferator-activated receptor γ， PPARγ）是過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體（PPAR）的一種類型，屬于配體依賴型轉(zhuǎn)錄因子，近年研究發(fā)現(xiàn)其可誘導(dǎo)細(xì)胞分化、凋亡，抑制腫瘤生長(zhǎng)[1]。筆者采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)宮頸癌組織中PPARγ表達(dá)的水平，并進(jìn)行臨床追蹤隨訪，旨在探討PPARγ在宮頸癌轉(zhuǎn)移和預(yù)后中的作用。

1?資料與方法

1.1?一般資料

收集筆者所在科室2008年1月～2012年1月經(jīng)病理確診為宮頸癌患者的瘤體活檢組織標(biāo)本40例，均為鱗癌。年齡31～74歲，平均（51.2±2.8）歲；按1994年FIGO分期：Ⅰ期4例、Ⅱ期18例、Ⅲ期14例、Ⅳ期4例；病理分級(jí)：低分化7例，中分化27例，高分化6例。宮頸炎組織標(biāo)本10例，宮頸非典型增生組織標(biāo)本10例，兩者均來(lái)自同時(shí)期的活檢宮頸組織。

1.2?方法

試劑：兔抗人PPARγ多克隆抗體（IgG）；抗原修復(fù)液Ⅰ及通用型SABC染色試劑盒和DAB顯色試劑盒均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。采用常規(guī)免疫組織化學(xué)SABC法。切片常規(guī)脫蠟脫水，3%過(guò)氧化氫乙醇溶液阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性，微波抗原修復(fù)（92-980C） 15 min，正常非免疫動(dòng)物血清，室溫下孵育10 min，滴加一抗PPARγ，工作濃度均為1︰100，40℃冰箱中過(guò)夜，滴加生物素標(biāo)記的第二抗體，置入370℃恒溫箱中孵育30 min，加入鏈酶親和素-生物素-過(guò)氧化物酶溶液，室溫下孵育10 min，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封片，設(shè)陰性對(duì)照（以PBS代替一抗）以及陽(yáng)性對(duì)照（已知的乳腺癌陽(yáng)性反應(yīng)組織）。

1.3?結(jié)果判斷

免疫組化染色的結(jié)果參考Krajewska等標(biāo)準(zhǔn)判斷，采用雙盲法在顯微鏡下進(jìn)行評(píng)分。先按陽(yáng)性細(xì)胞比例將無(wú)、1%～25%、26%～50%、51%～75%及76%～100%依次計(jì)為0～4分；再按染色強(qiáng)度將無(wú)、弱、中、強(qiáng)分別計(jì)為0～3分，最后綜合兩部分得分。如某片有25%弱陽(yáng)性（1×1）、50%中等陽(yáng)性（2×2）及25%強(qiáng)陽(yáng)性（1×3），則總分為1+4+3=8。HIF-1α陽(yáng)性染色主要為細(xì)胞胞漿染成棕黃著色，胞漿也可有少許染色，單純細(xì)胞核著色而漿無(wú)著色或細(xì)胞核、漿均無(wú)著色為陰性，評(píng)分方法同上。

1.4?統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用（）表示，使用t檢驗(yàn)、單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2?結(jié)果

2.1?宮頸癌組織PPARγ的表達(dá)

PPARγ在宮頸鱗癌組織、宮頸炎組織和宮頸非典型增生組織中的表達(dá)分別為（8.18±1.70）、（6.60±0.70）和（4.90±1.37），其中以宮頸癌組的平均得分最高，宮頸炎組的平均得分最低，3組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。宮頸癌組PPARγ表達(dá)與其他各組間差異有顯著性差異，宮頸炎組與宮頸癌組及宮頸非典型增生組之間差異也有顯著性差異， 宮頸炎組和宮頸非典型增生組之間差異亦有顯著性差異。

2.2?宮頸癌組織PPARγ的表達(dá)與臨床的關(guān)系

PPARγ分別與宮頸癌臨床分期、放療敏感性和骨、肺、肝等遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和5年生存期有關(guān)（P＜0.05）。見表1。

3?討論

過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體是一類配體依賴型轉(zhuǎn)錄因子，屬于核受體大家族[2-3]。近年研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌、食管癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、腦瘤等惡性腫瘤中，PPARγ的表達(dá)增高，其被激活后還具有能抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用，其機(jī)制可能是：PPARγ激活后可抑制cyclinD1、cyclinB、cyclinE、CDK4和CDK2表達(dá)，并上調(diào)CDKIP21和P27蛋白表達(dá)，阻滯細(xì)胞分裂增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)[4-5]。

本研究結(jié)果顯示：宮頸癌組中PPARγ的表達(dá)明顯高于宮頸非典型增生組和宮頸炎組（P＜0.05），且隨著宮頸組織異型程度的增高PPARγ表達(dá)有上升趨勢(shì)，PPARγ的表達(dá)可能是宮頸炎發(fā)展到宮頸非典型增生乃至宮頸癌的分子標(biāo)志，其過(guò)表達(dá)可能是宮頸癌發(fā)生過(guò)程的早期事件之一[6-7]。

宮頸癌組PPARγ陽(yáng)性染色主要定位在腫瘤細(xì)胞胞核，胞漿也有少許染色，在3組中平均評(píng)分最高（8.18±1.70）。Panigraphy D等[8]報(bào)道，高水平的PPARγ蛋白表達(dá)可能是乳腺癌細(xì)胞區(qū)別正常乳腺細(xì)胞的標(biāo)志之一，本研究結(jié)果與上述報(bào)道一致。隨著FIGO分期的升高，PPARγ的表達(dá)均降低，且Ⅳ期患者PPARγ表達(dá)的平均得分最低（6.75±0.96），表明PPARγ在晚期病例中的表達(dá)與腫瘤的浸潤(rùn)、發(fā)展有密切關(guān)系[9]。

經(jīng)長(zhǎng)期隨訪證實(shí)：有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者宮頸癌組織中PPARγ表達(dá)顯著低于無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移宮頸癌組織的平均得分（8.78±1.76），且生存期小于5年者PPARγ表達(dá)的平均得分（7.43±1.28）也同樣低于生存期大于5年者的平均得分（8.58±1.77），表明PPARγ具有抑制腫瘤浸潤(rùn)發(fā)展及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的作用，是臨床判斷宮頸癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的重要生物學(xué)指標(biāo)。40例宮頸癌患者接受放射治療后，21例完全緩解和19例部分緩解，完全緩解者標(biāo)本中PPARγ表達(dá)的平均得分（8.86±1.62）高于部分緩解的平均得分（7.42±1.47），提示PPARγ可能通過(guò)調(diào)節(jié)一系列的下游基因降低凋亡閾值及抑制細(xì)胞增殖，促進(jìn)放療所致宮頸癌細(xì)胞凋亡，提高放療的敏感性，對(duì)臨床如何提高放療的敏感性有實(shí)際的指導(dǎo)意義[10]。

綜上，通過(guò)研究宮頸癌患者活檢標(biāo)本中PPARγ的表達(dá)情況，對(duì)于早期診斷、預(yù)測(cè)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)趨勢(shì)及放療敏感性、臨床預(yù)后的評(píng)估都將有指導(dǎo)作用和實(shí)用意義。

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（收稿日期：2012-07-16）