紫外分光光度法測(cè)定黃芪總皂苷口腔黏附緩釋片中總皂苷的含量

蔡 君

(廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣州 510400)

黃芪是1味重要的中藥，具有益衛(wèi)固表、利水清腫、托毒生肌、補(bǔ)中益氣等功效，民間常用于治療自汗、盜汗、血痹、浮腫、痛疽不潰或潰久不斂、內(nèi)傷帶虛、脾虛泄瀉及一切氣衰血虛之癥［1］。黃芪總皂苷為黃芪的主要活性成分之一。研究表明，黃芪總皂苷有良好的黏膜保護(hù)作用［2］。我們利用羥丙基甲基纖維素(HPMC)和丙稀酸樹脂E100作為黏附材料和骨架材料，將黃芪總皂苷制成口腔黏附緩釋片，為保證質(zhì)量我們對(duì)制劑工藝進(jìn)行考核，并建立了簡便、快捷、準(zhǔn)確的紫外分光光度法，以測(cè)定黃芪總皂苷口腔黏附緩釋片中總皂苷的含量。

1 材料與儀器

1.1 材料與試劑

黃芪總皂苷購自南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司，黃芪甲苷對(duì)照品由中國藥品生物制品檢定所提供(批號(hào) 110781—200613)，濃硫酸、香草醛、無水乙醇、甲醇均為分析純。

1.2 儀器

TU-1810紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)，AE200型電子分析天平(瑞士梅特勒公司)，電熱恒溫水溫箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)。

2 方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備［3］

精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品5.1mg置于10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻備用。

2.2 供試品溶液的制備

取黃芪總皂苷制成口腔黏附緩釋片20片，置于干燥、潔凈的研缽中充分研碎并研磨均勻，精密稱取細(xì)粉100mg置于25mL量瓶中，準(zhǔn)確加無水乙醇25mL稱重，超聲處理(53KHz，功率 100%)30min，取出放涼，用無水乙醇補(bǔ)足減失的重量濾過，收集續(xù)濾液備用。

2.3 測(cè)定波長的選擇

圖1、2顯示，精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各0.3ml，分別加入具塞試管中，加無水乙醇補(bǔ)足體積至0.5ml再分別加入8%的香草醛無水乙醇試液0.5 ml和 72%的硫酸 5.0ml，搖勻，立即放入62℃恒溫水浴中，保溫20 min后置冷水浴中冷卻至室溫，以試劑作空白對(duì)照，用紫外分光光度計(jì)在400～700 nm范圍掃描。結(jié)果對(duì)照品溶液在580 nm波長處有最大吸收，供試品溶液在580 nm波長處也有較大吸收，故確定測(cè)定波長為580 nm。

圖1 黃芪甲苷對(duì)照品吸收?qǐng)D譜

圖2 供試品溶液吸收?qǐng)D譜

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備［6］

分別精密吸取黃芪甲苷對(duì)照品溶液0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 mL 至具塞試管中，加無水乙醇補(bǔ)足體積至0.5 ml，再分別加入8%的香草醛無水乙醇試液0.5 ml和72%的硫酸5.0 ml搖勻，立即放入62℃水浴加熱20min取出，置冷水浴中冷卻至室溫，于580 nm波長處測(cè)吸光度。同時(shí)以隨行試劑作空白，以吸光度為縱坐標(biāo)，黃芪甲苷的濃度為橫坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)回歸方程為:Y=0.00159 X+0.06855(r2=0.9942)，表明黃芪甲苷濃度在51～510mg·L－1范圍，線性關(guān)系良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批供試品溶液，按“2.2.4”項(xiàng)下方法操作，分別在 0min、30min、60min、90min、120min 測(cè)定吸光度。結(jié)果RSD為1.71%，供試品溶液在2h內(nèi)吸光度基本無變化，穩(wěn)定性良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品6份，按“2.2.2和2.2.4”項(xiàng)下方法操作，分別測(cè)定吸光度并計(jì)算含量。結(jié)果6份樣品的RSD為1.57%，重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液共6份，分別加入黃芪甲苷對(duì)照品溶液0.10 mL，按“2.2.4”項(xiàng)下方法操作，結(jié)果平均回收率為99.00%，RSD為2.68%。

2.8 樣品含量測(cè)定

表1顯示，取3批不同批次的黃芪總皂苷口腔黏附緩釋片，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按“2.2.4”項(xiàng)下方法操作，分別測(cè)定吸光度并計(jì)算含量。

表1 樣品中黃芪總苷含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

黃芪總皂苷口腔黏附緩釋片的藥物為黃芪總皂苷，通過測(cè)定其皂苷成分即可有效地控制該制劑的質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用香草醛-硫酸作為顯色試劑，顯色靈敏度較高，方法重現(xiàn)性好，快速簡便，是較理想的總皂苷定量方法。

在香草醛-硫酸比色加熱顯色反應(yīng)過程中，應(yīng)嚴(yán)格控制水浴溫度、加熱時(shí)間，顯色后立刻冷卻至室溫;香草醛溶液必須在臨用前新鮮配制，否則會(huì)影響顯色靈敏度。

［1］中藥大辭典下冊(cè)［M］.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1986:2038.

［2］孫雪蓮，黃可兒，匡忠生，等.黃芪皂苷類不同有效組分對(duì)大鼠急性胃黏膜損傷的保護(hù)作用研究［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2011，26(5):1181-1185.

［3］駱蘇芳，許重遠(yuǎn)，陳英.比色法測(cè)定參芪含片中總皂苷的含量［J］.中國醫(yī)院用藥評(píng)價(jià)與分析，2010，10(5):448-449.

［4］嚴(yán)安定，高建，王培培，等.紫外分光光度法測(cè)定當(dāng)歸補(bǔ)血湯的總苷含量［J］.安徽醫(yī)學(xué)，2011，32(5):636-638.