人參和紅花提取物配伍對心肌缺血犬心臟血流動力學(xué)的影響*

于 震，韓淑燕，李海霞，屠鵬飛

(北京大學(xué)藥學(xué)院天然藥物及仿生藥物國家重點實驗室，北京 100191)

冠心病(冠狀動脈粥樣硬化性心臟病)也叫缺血性心臟病，是當(dāng)前國內(nèi)外最常見和危害最大的心臟病，已成為人口死亡的主要原因之一［1］。運用中藥益氣活血法治療心肌缺血具有較好的療效［2、3］。對于益氣活血配伍的臨床和實驗研究已有大量的文獻報道，但存在中藥粗提物化學(xué)成分不明確、質(zhì)量難以控制、藥理作用與化學(xué)成分的相關(guān)性研究缺乏、物質(zhì)基礎(chǔ)難以闡明等問題。本文選擇具有協(xié)同作用的益氣活血藥對人參和紅花，分別將其制備成質(zhì)量穩(wěn)定的人參總皂苷(人參提取物)和紅花總黃酮(紅花提取物)，并進行主要成分含量測定和質(zhì)量標化;以冠心病心肌缺血為切入點，建立犬冠狀動脈結(jié)扎型心肌缺血模型，觀察人參、紅花提取物及其配伍對麻醉犬心臟血流動力學(xué)的影響，從改善麻醉犬血流動力學(xué)方面初步闡釋益氣活血組方的配伍理論。

1 材料

1.1 藥材和標準品

人參炮制品紅參藥材購自吉林，紅花藥材購自新疆吉木薩爾縣紅旗農(nóng)場，人參中對照品人參皂苷Rg1、人參皂苷 Re、人參皂苷 Rg2、人參皂苷 Rh1、人參皂苷Rb1、人參皂苷 Rc、人參皂苷 Rb2、人參皂苷Rb3和人參皂苷Rd，紅花中對照品羥基紅花黃色素A、蘆丁、山萘酚-3-O蕓香糖苷和槲皮素，均由本實驗室提供(HPLC檢測純度為98.0%以上)或購自中國藥品生物制品檢定所。合心爽(鹽酸地爾硫卓片)，30mg/片，天津田邊制藥有限公司生產(chǎn)(批號0702064)。

1.2 儀器

Agilent1100高效液相色譜儀 (美國 Agilent Technologies);電子分析天平(Sartorius BP 110 S德國);MP150型16導(dǎo)生理記錄儀(美國 BIOPAC);CBI-8000型多普勒流量計(美國 CRYSTAL BIOTECH);DGD-300C-2型高頻電刀(北京貝林);ALC-V10型動物呼吸機(上海奧爾科特)。

1.3 試劑

戊巴比妥鈉(德國進口分裝)由北京化學(xué)試劑公司提供(批號060222);AB-8大孔樹脂、HPD100大孔樹脂為河北滄州寶恩化工有限公司生產(chǎn);提取用乙醇為化學(xué)純、HPLC級乙腈由 Caledon公司生產(chǎn);冰醋酸、三氯乙酸為分析純;重蒸水經(jīng)0.45μm濾膜過濾。

1.4 動物

健康成年犬42只，雌雄兼用，體重13.51kg±1.60kg，由北京市芳園緣實驗動物養(yǎng)殖廠提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 人參標準提取物的制備與標化

2.1.1 人參標準提取物的制備 人參炮制品紅參藥材，切成厚度約為2mm的飲片，以6倍量60%的乙醇加熱回流提取0.5h，濾過濾液備用，藥渣再加4倍量的60%乙醇提取3次，每次0.5h濾過，合并4次濾液，減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10(60℃)，濃縮液放置至室溫后過 HPD100大孔吸附樹脂柱(樹脂柱徑高比為1∶6，藥材與干樹脂比例為1∶3)，先用6倍量去離子水洗脫至無糖反應(yīng)，再用8倍量20%乙醇洗脫，棄去20%洗脫液，然后用60%乙醇洗脫，收集6倍量柱體積60%的洗脫液，回收乙醇并減壓濃縮至相對密度1.10～1.20(50℃)，濃縮液噴霧干燥，即得人參標準提取物，主要成分為人參總皂苷，人參標準提取物的提取率為1.11%。

2.1.2 人參標準提取物的標化 人參標準提取物HPLC指紋圖譜的建立:(1)供試品溶液的制備。取人參標準提取物12.5mg，精密加入50%甲醇20ml密塞稱定重量，超聲處理30min放冷，再次稱定重量，用甲醇補足減失的重量，經(jīng)0.22μm濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液;(2)對照品溶液的配制。分別精密稱定人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rg2、人參皂苷 Rb1、人參皂苷 Rc、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rb3和人參皂苷Rd對照品適量，加甲醇制成濃度分別為 Rg1(0.488mg/mL)、Re(0.260mg/mL)、Rg2(0.163mg/mL)、Rb1(0.656mg/mL)、Rb2(0.310mg/mL)、Rc(0.454mg/mL)、Rb3(0.101mg/mL)和 Rd(0.164mg/mL)的混合對照品溶液，同法制成人參皂苷Rh1(0.406mg/mL)對照品溶液;(3)色譜條件。色譜柱:Waters symmetry C18柱;流動相:乙腈(A)-水(B)梯度洗脫:0min～32min，19%～23%A;33min～50min，23%～29%A;50min～70min，29%～30%A;70min～95min，30%～39%A;流速:1.0mL/min，柱溫:30℃。進樣量10μL，采用電霧式檢測器(CAD)進行檢測，建立了人參總皂苷的HPLC指紋圖譜，并指認了主要色譜峰(結(jié)果見圖1)。人參標準提取物HPLC的含量測定:表1顯示，在1.2.1色譜條件下，同時測定人參標準提取物中各人參皂苷類成分的含量。

3 紅花標準提取物的制備與標化［4］

3.2.1 紅花標準提取物的制備 紅花凈藥材以8倍量50%乙醇70℃溫浸提取2h濾過，濾液備用，藥渣再加6倍量50%乙醇70℃溫浸提取2次，每次1h濾過。合并3次濾液，減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10(60℃)。濃縮液放置至室溫后過AB－8大孔樹脂，藥材與樹脂比例1∶4，先用去離子水洗脫至洗脫液澄清，再用70%乙醇洗脫至洗脫液無色，收集70%乙醇洗脫液，濃縮至相對密度1.10～1.20(50℃)，噴霧干燥，即得紅花標準提取物，主要成分為紅花總黃酮，紅花標準提取物的提取率為9.08%。

圖1 人參標準提取物HPLC指紋圖譜

表1 人參總皂苷中主要成分的含量

3.2.2 紅花標準提取物的標化 紅花標準提取物HPLC指紋圖譜的建立:供試品溶液的制備。取紅花標準提取物60mg精密加入50%甲醇25ml，密塞并稱定重量，超聲處理30min后放冷，再次稱定重量，用甲醇補足減失重量，經(jīng)0.22μm濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

對照品溶液的配制:精密稱取羥基紅花黃色素A、蘆丁、山萘酚-3-O-蕓香糖苷和槲皮素對照品，分別加甲醇配制成濃度分別為羥基紅花黃色素A(1.04mg/mL)、蘆丁(1.30mg/mL)、山萘酚-3-O-蕓香糖苷(1.07mg/mL)和槲皮素(1.12mg/mL)的對照品溶液。

色譜條件:色譜柱:AichromBond-AQ C18柱;流動相:乙腈(A)-0.1%甲酸溶液(B)梯度洗脫，0min～20min，2%～19%A;20min～50min，19%～25%A;50min～65min，25%～37%A;65min～75min，37%～40%A;流速:1.0mL/min，柱溫:30℃，進樣量10ul，檢測波長:275nm。建立了紅花總黃酮的HPLC指紋圖譜，并指認了主要色譜峰(結(jié)果見圖2)。

圖2 紅花標準提取物HPLC指紋圖譜

表2顯示，紅花標準提取物HPLC含量測定:在2.2.1色譜條件下，同時測定紅花標準提取物中各羥基紅花黃色素A和山萘酚-3-O-蕓香糖苷的含量。

表2 紅花總黃酮中主要成分的含量

4 人參、紅花提取物配伍對麻醉犬心臟血流動力學(xué)的影響

4.1 造模與給藥［5、6］

實驗動物用戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈麻醉，股靜脈建立靜脈通道，氣管插管連接動物呼吸機，左側(cè)第4肋間開胸暴露心臟，剪開心包做心包床，分離主動脈和冠狀動脈左旋支近主動脈部，放置超聲多普勒血流探頭，分離冠狀動脈左前降支，穿線以備結(jié)扎造模，心尖插管至左心室連接壓力換能器，以肢體導(dǎo)聯(lián)觀測標準Ⅱ?qū)?lián)心電圖，將各項指標同步記錄于16導(dǎo)多功能生理記錄儀，分離十二指腸并插管準備給藥，人參和紅花分別為前期提取制備的標準提取物。手術(shù)完畢待所觀察指標穩(wěn)定后，測缺血前、結(jié)扎冠狀動脈左前降支致缺血15 min(藥前)、藥后30min、60min、90min、120min、180min 時的血流動力學(xué)指標。

4.2 分組

①生理鹽水組3ml/kg，n=6;②合心爽組5mg/kg，n=6;③人參組 60mg/kg，n=6;④紅花組 60mg/kg，n=6;⑤人參 +紅花低劑量組15+15mg/kg，n=6;⑥人參+紅花中劑量組30+30mg/kg，n=6;⑦人參+紅花高劑量組60+60mg/kg，n=6。

4.3 檢測指標

冠脈血流量、心輸出量、左室內(nèi)壓最大上升速率、左室舒張末壓、冠脈阻力、總外周阻力等試驗數(shù)據(jù)。

4.4 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計分析軟件整理、分析數(shù)據(jù)，計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示，正態(tài)性檢驗采用 One-Sample K-S檢驗，方差齊性檢驗采用Levene檢驗。若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，方差齊則應(yīng)用One-Way ANOVA判斷其顯著性，反之則采用 Two-Independent-Samples Tests判斷其顯著性。

4.5 人參與紅花配伍對心肌缺血犬冠脈血流量、心輸出量的影響

表3、4顯示，結(jié)扎麻醉犬冠狀動脈形成心肌缺血后，人參在藥后30min可明顯增加犬冠脈血流量，紅花在藥后180min可明顯增加心搏出量，在藥后30min和180min可明顯增加心輸出量，與對照組比較均有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。人參和紅花配伍具有一定的協(xié)同作用，人參+紅花低劑量在藥后30min和60min可明顯增加模型動物的冠脈血流量，在藥后180min可明顯增加心輸出量，中劑量在藥后180min可增加模型動物的心輸出量，與對照組比較均有顯著性差異(P＜0.05)。人參+紅花低劑量組模型動物的冠脈血流量在藥后120min比人參組明顯增加，有顯著性差異(P＜0.05)。合心爽在藥后30min、60min和90min能明顯增加冠脈血流量，在藥后30min、120min和180min還能明顯增加心輸出量，與對照組比較均有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。

表3 各給藥組對心肌缺血犬冠脈血流量(ml/100g·min－1)的影響(n=6，±s)

表3 各給藥組對心肌缺血犬冠脈血流量(ml/100g·min－1)的影響(n=6，±s)

注:與生理鹽水組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與人參組比較:#P＜0.05

組 別 劑量(/kg)藥后(min)30 60 90 120 180生理鹽水 3ml 73.04±45.97 73.00±45.23 69.99±51.62 68.07±46.99 64.90±49.10 67.15±51.66 70.50±54.缺血前(正常值)藥前值變化率(100%)45 92.55±26.24 85.02±13.69 84.74±16.28 79.90±23.55 85.40±35.02 90.44±46.42合 心 爽 5mg 71.20±55.38 71.64±57.23 83.78±49.80 83.98±45.97 79.22±49.07 76.97±47.16 74.80±50.38 101.18±19.43 128.96±23.27＊＊ 136.68±14.27＊＊ 123.35±35.54* 116.11±44.05 105.44±30.92紅 花 60mg 70.49±29.32 71.42±35.41 62.07±38.10 61.35±30.57 61.61±28.88 60.14±36.28 61.70±36.50 106.26±25.48 90.28±37.70 97.43±40.54 95.96±32.39 92.27±43.01 85.84±40.85人 參 60mg 83.06±41.91 98.61±75.00 96.37±52.66 84.35±46.92 78.20±44.62 66.65±40.04 71.47±41.54 97.43±27.58 123.31±39.64* 107.88±36.19 99.47±43.72 74.09±19.14 78.98±23.38人 + 紅 低 15+15mg 68.31±54.03 71.53±53.37 69.28±41.37 67.77±40.44 67.40±42.77 66.41±41.11 71.02±45.55 103.30±12.12 107.77±15.15* 109.65±21.31* 109.05±25.00 107.75±25.89# 113.81±32.97人 + 紅 中 30+30mg 73.18±44.82 79.06±49.08 75.43±46.17 70.10±43.79 69.80±43.23 65.49±40.72 70.53±37.21 102.85±15.92 102.15±17.00 92.05±11.57 93.17±14.70 86.43±19.48 96.41±20.43人 + 紅 高 60+60mg 93.02±36.59 98.77±42.96 76.21±42.57 83.03±37.31 89.02±35.42 96.89±32.11 106.45±39.18 101.07±19.96 73.03±19.42 82.55±24.35 88.48±22.14 99.75±36.55 110.10±44.76

表4 各給藥組對心肌缺血犬心輸出量(L/min)的影響(n=6，±s)

表4 各給藥組對心肌缺血犬心輸出量(L/min)的影響(n=6，±s)

注:與生理鹽水組比較:*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01

組 別 劑量(/kg)藥后(min)30 60 90 120 180生 理 鹽 水 3ml 1.64±0.34 1.58±0.70 1.27±0.37 1.26±0.38缺血前(正常值)藥前值變化率(100%)1.19± 0.40 1.13± 0.43 0.98± 0.48 94.65±27.25 84.36±14.77 83.31±10.55 77.99±11.44 73.18± 7.51 61.26± 9.12合 心 爽 5mg 1.52±0.34 1.37±0.48 1.67±0.69 1.50±1.04 1.24±0.80 1.48±0.97 1.43±1.00 91.36±25.55 122.98±29.27* 102.67±31.85 84.49±23.53 100.54±27.55* 97.39±34.36*紅花 60mg 1.48±0.17 1.39±0.30 1.42±0.28 1.39±0.46 1.27±0.39 1.20±0.44 1.32±0.41 93.24±12.99 103.74±13.10* 100.51±22.83 91.38±18.62 86.06±21.74 95.42±24.73＊＊人參 60mg 1.55±0.31 1.28±0.39 1.23±0.30 1.09±0.28 1.07±0.22 1.04±0.22 0.95±0.24 81.01±11.71 98.85±15.76 89.02±22.91 89.50±30.98 85.73±28.58 77.81±22.30人 + 紅 低15+15mg 1.64±0.16 1.64±0.51 1.58±0.44 1.45±0.40 1.41±0.44 1.34±0.51 1.36±0.52 98.92±24.55 97.81±13.92 90.67±18.01 87.69±18.77 81.66±18.09 83.73±23.28*人 + 紅 中30+30mg 1.45±0.12 1.17±0.23 1.17±0.20 1.11±0.16 1.04±0.12 1.13±0.28 1.10±0.32 80.63±14.26 101.91±17.86 98.87±32.28 91.94±21.01 113.11±62.88 95.72±29.06*人 + 紅 高60+60mg 1.53±0.20 1.39±0.40 1.42±0.72 1.26±0.55 1.36±0.77 1.22±0.48 1.16±0.54 89.68±15.04 98.90±19.83 90.30±23.71 95.56±37.98 89.62±37.31 85.32±41.53

4.6 人參與紅花配伍對心肌缺血犬左室內(nèi)壓最大上升速率及左室舒張末壓的影響

表5、6顯示，麻醉犬冠狀動脈結(jié)扎形成心肌缺血后，人參在藥后90min可增加左室內(nèi)壓最大上升速率，紅花在藥后30min和60min可增加左室內(nèi)壓最大上升速率，與對照組比較均有顯著性差異(P＜0.05)。人參與紅花配伍低劑量在藥后60min和180min可明顯降低左室舒張末壓，中劑量在藥后90min可明顯增加左室內(nèi)壓最大上升速率，180min可明顯降低左室舒張末壓，高劑量在藥后90min和180min可明顯增加左室內(nèi)壓最大上升速率，與對照組比較均有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。人參+紅花高劑量組模型動物的左室內(nèi)壓最大上升速率在藥后180min比人參組明顯增加，有顯著性差異(P＜0.05)。合心爽在藥后30min、90min和120min可明顯增加左室內(nèi)壓最大上升速率，180min可明顯降低左室舒張末壓，與對照組比較均有顯著性差異(P ＜0.05)。

4.7 人參與紅花配伍對心肌缺血犬冠脈阻力、總外周阻力的影響

表7、8顯示，麻醉犬冠狀動脈結(jié)扎形成心肌缺血后，人參在藥后30min能明顯降低冠脈阻力，與對照組比較均有顯著性差異(P＜0.05)。單用人參和紅花對犬心肌缺血總外周阻力無明顯影響。人參與紅花配伍具有一定的協(xié)同作用，人參+紅花低劑量在藥后30min、60min、90min和 120min能明顯降低冠脈阻力，中劑量在藥后180min還能明顯降低總外周阻力，與對照組比較均有顯著性差異(P＜0.05)。其中人參+紅花低劑量組模型動物的冠脈阻力在藥后120min和180min比人參組明顯降低，均有顯著性差異(P＜0.05)。合心爽在藥后30min、60min和90min能明顯降低冠脈阻力，在藥后30min、60min、120min和180min還能明顯降低總外周阻力，與對照組比較均有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。

表5 各給藥組對心肌缺血犬左室內(nèi)壓最大上升速率(+dp/dtmax)的影響(n=6，±s)

表5 各給藥組對心肌缺血犬左室內(nèi)壓最大上升速率(+dp/dtmax)的影響(n=6，±s)

注:與生理鹽水組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與人參組比較:#P＜0.05

組 別 劑量(/kg)藥后(min)30 60 90 120 180生理鹽水 3ml 3435.0 ± 1572.6 3399.50±1768.80 3027.50±1998.20 2998.3 ±1796.10 2633.70±1523.60 275缺血前(正常值)藥前值變化率(100%)8.80±1553.90 2600.30 ±1501.30 97.06± 7.24 86.99± 14.71 87.61± 10.94 77.62± 9.78 80.15± 8.23 76.78± 15.26合 心 爽 5mg 4239.7 ±1705.6 3753.30±1129.70 4073.20±1469.40 3815.00±1134.40 4177.80±1411.60 3970.30±1721.20 3581.20 ±1366.10 92.17± 17.89 108.12± 17.48* 104.18± 22.78 113.83± 28.33* 104.53± 22.11* 95.92 ± 20.79紅 花 60mg 3168.3± 551.1 2919.70±434.403495.80±603.50 3346.70± 733.503177.80±945.703191.70±1100.80 3503.20±1323.60 93.43± 13.69 121.25± 25.15* 114.63± 20.05* 109.73± 33.98 108.99± 33.51 120.07 ± 45.60人 參 60mg 3501.5 ± 1282.5 3799.50±1199.10 4227.20±1937.70 3986.50±1724.10 4231.20±2088.60 3623.70±1445.70 3220.50 ± 967.40 109.56± 13.37 108.39± 19.01 102.69± 16.33 108.16± 21.75* 94.83± 15.18 85.51± 7.11人+紅低15+15mg 4063.0 ± 706.5 3814.50±1017.00 3997.70± 685.60 3861.20± 977.50 3379.50±1102.60 3125.50±1009.10 3091.00 ± 805.90 94.70± 23.50 108.01± 18.86 105.08± 30.01 89.72± 21.95 82.25± 16.53 82.87 ± 18.03人+紅中30+30mg4839.0±1082.3 4180.80± 821.90 4080.00± 511.60 3915.20± 511.30 4177.20± 952.40 3322.80± 777.80 3454.30 ± 685.50 87.96 ± 16.33 99.22 ± 12.56 95.57± 15.33 99.77 ± 8.25＊＊ 79.87 ± 13.05 83.55 ± 12.95人+紅高60+60mg3367.8± 733.4 2939.70± 614.90 2505.50± 209.30 2746.50± 366.40 2843.00± 466.00 2774.70± 476.50 3359.00 ± 955.00 90.52 ± 29.43 87.92 ± 16.63 95.34± 13.72 98.60 ± 18.44* 96.39 ± 18.76 113.88 ± 21.99＊＊#

表6 各給藥組對心肌缺血犬左室舒張末壓(mmHg)的影響(n=6，±s)

表6 各給藥組對心肌缺血犬左室舒張末壓(mmHg)的影響(n=6，±s)

注:與生理鹽水組比較:*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01

組 別 劑量(/kg)藥后(min)30 60 90 120 180生 理 鹽 水 3ml 13.00±7.16 18.83± 9.95 16.83± 8.80 17.50±缺血前(正常值)藥前值變化率(100%)7.12 15.17± 6.11 14.33± 5.96 19.00± 6.03 153.26±30.54 88.42±30.11 97.12±16.69 83.05±17.38 82.54±24.77 110.71±26.72合 心 爽 5mg 11.83±2.04 23.00±5.62 17.67±6.62 18.67±6.68 18.83±4.54 16.83±4.12 17.50±4.42 199.31±59.09 77.89±24.15 82.65±25.45 83.39±13.45 73.38± 8.14 77.53±14.82*紅花 60mg 10.67±1.37 17.67±4.63 16.83±2.23 18.33±3.56 16.50±3.62 16.00±6.32 14.33±2.34 165.97±39.10 99.93±24.35 107.76±27.11 99.45±33.76 92.84±32.35 85.39±23.57人參 60mg 11.67±4.59 17.83±4.12 15.50±7.23 15.67±6.25 15.33±5.75 14.00±5.02 14.17±5.04 163.72±44.49 86.40±32.96 86.02±20.46 86.25±25.71 79.61±26.41 79.96±23.83人 + 紅 低15+15mg 13.67±4.41 19.33±2.66 16.50±2.59 13.83±3.19 13.50±1.87 13.17±1.72 13.83±1.17 148.16±27.36 85.76±10.52 71.77±14.28* 70.43± 9.53 68.67± 9.29 72.36± 8.50＊＊人 + 紅 中30+30mg 10.17±3.71 16.67±4.13 16.00±5.29 14.33±4.50 14.17±4.40 14.50±4.51 13.67±3.88 170.73±30.42 95.19±16.43 85.84±16.55 84.92±15.43 87.40±20.49 81.68± 8.05*人 + 紅 高60+60mg 11.50±1.87 19.00±3.69 18.67±4.41 18.83±4.26 18.17±4.07 16.83±2.23 16.33±3.88 175.05±75.36 98.21±16.50 101.55±30.28 99.12±33.20 90.01±12.94 87.80±22.90

表7 各給藥組對心肌缺血犬冠脈阻力(mmHg/ml·100g－1·min－1)的影響(n=6，±s)

表7 各給藥組對心肌缺血犬冠脈阻力(mmHg/ml·100g－1·min－1)的影響(n=6，±s)

注:與生理鹽水組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與人參組比較:##P＜0.01

組 別 劑量(/kg)藥后(min)30 60 90 120 180生 理 鹽 水 3ml 2.16±0.45 2.43±0.54 3.08±1.34 3.08±1.39缺血前(正常值)藥前值變化率(100%)3.36± 1.28 3.29± 1.34 3.56± 1.83 115.20±31.77 123.18±32.05 122.24±33.35 134.36±33.62 130.86±39.08 140.79±66.13合 心 爽 5mg 2.56±0.90 2.76±1.22 1.89±1.08 1.55±0.43 1.79±0.58 2.19±1.10 2.52±1.45 106.81±23.43 66.75±12.98＊＊ 60.10±14.91＊＊ 71.70±30.30＊＊ 87.47±45.23 97.23±49.74紅花 60mg 1.99±0.81 1.92±0.55 2.09±0.63 1.96±0.72 1.81±0.56 2.16±0.97 2.24±0.87 103.58±33.11 115.44±46.50 108.02±47.01 99.59±39.38 118.03±57.97 119.61±38.17人 參 60mg 2.19±1.04 2.46±1.55 1.90±1.18 2.19±1.13 2.51±1.51 3.53±2.72 3.48±2.69 105.46±27.77 84.43±27.11* 104.47±38.87 121.29±50.48 149.06±40.17 143.67±36.04人 + 紅 低15+15mg 2.77±0.94 2.82±1.05 2.24±0.71 2.12±0.65 2.26±1.02 2.39±0.89 2.36±0.89 101.07±19.11 81.30± 9.17* 77.98±14.32* 80.85±18.73＊＊ 88.14±21.94*## 87.11±25.23人 + 紅 中30+30mg 2.39±0.87 2.45±1.11 2.31±0.89 2.48±0.93 2.41±0.75 2.59±0.80 2.29±0.62 100.63±21.20 98.30±16.47 105.36±14.49 105.94±23.14 115.49±30.16 103.97±30.46人 + 紅 高60+60mg 1.36±0.40 1.42±0.62 1.92±0.76 1.77±0.69 1.66±0.78 1.53±0.79 1.58±0.86 101.06±21.05 147.87±63.02 135.36±49.61 123.37±39.60 116.06±44.11 119.77±53.73

5 討論

5.1 益氣活血中藥的質(zhì)控和標化

中藥具有多成分、多途徑、多靶點的作用特點。而對于目前益氣活血配伍的臨床和實驗研究已有大量的文獻報道，分析發(fā)現(xiàn)多采用中藥粗提物進行研究，化學(xué)成分不明確，質(zhì)量難以控制，結(jié)果重現(xiàn)性差，藥理作用與化學(xué)成分的相關(guān)性研究缺乏，物質(zhì)基礎(chǔ)難以闡明等。本文首先對人參、紅花2味藥進行提取、精制，將其制成有效部位人參總皂苷和紅花總黃酮，再采用多成分含量測定結(jié)合指紋圖譜整體成分控制的方法，對化學(xué)成分進行控制和標化，不僅確保試驗樣品的重現(xiàn)性，同時也為物質(zhì)基礎(chǔ)與藥效的相關(guān)性分析提供依據(jù)。

表8 各給藥組對心肌缺血犬總外周阻力(mmHg/L·min－1)的影響(n=6，±s)

表8 各給藥組對心肌缺血犬總外周阻力(mmHg/L·min－1)的影響(n=6，±s)

注:與生理鹽水組比較:*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01

組 別 劑量(/kg)藥后(min)30 60 90 120 180生理鹽水 3ml 8386.7 ± 1810.6 9733.80±3231.2011406.70±3607.8011225.20±3327.8011948.70±4018.4缺血前(正常值)藥前值變化率(100%)0 12620.2±4549.50 15132.50±6068.70 114.62 ± 28.90 120.91± 26.55 118.00± 15.56 124.30± 16.67 129.87± 12.10 154.12 ± 27.87合 心 爽 5mg 9365.7 ± 2693.111165.10±3130.00 8705.30±2664.5010680.70±4368.6012939.30±5329.30 11139.10±4860.10 11751.90±5417.90 124.40 ± 43.57 79.35± 17.62＊＊ 92.58± 20.42* 111.86± 23.91 95.68± 19.58＊＊ 103.16 ± 37.15*紅 花 60mg 7592.3 ± 779.6 8459.90±1600.70 7861.60±800.30 8309.50±1538.80 8678.30±1628.70 9444.00±2492.80 9116.80±3232.90 112.67 ± 25.35 94.77± 14.05 100.93± 27.25 104.39± 21.99 112.06± 24.33 110.14 ± 40.64人 參 60mg 8696.6 ± 3157.312365.50±6378.6011168.50±4811.1012958.50±5814.5012764.90±5277.80 13143.90±6195.50 14445.80±7406.60 139.79 ± 47.14 96.79± 22.13 114.78± 37.59 115.47± 40.17 118.80± 41.82 128.42 ± 46.35人+紅低15+15mg 8047.6 ± 1092.4 8562.60 ±2346.90 8020.20±1364.50 8517.80±1752.00 8923.10±2120.40 9644.90±2770.90 9710.30 ±3090.50 106.50 ± 27.21 97.22± 19.69 104.61± 30.71 110.27± 39.49 117.90± 44.33 118.67 ± 46.99人+紅中30+30mg 9081.1 ± 556.8 11799.40 ±2859.90 11356.60±1960.20 11550.70±1749.80 12041.10±1052.40 11160.70±2679.10 11963.30 ±3628.40 130.49 ± 33.26 98.18± 13.92 102.11± 23.41 105.79± 19.50 99.21± 33.38 106.51 ± 41.92*人+紅高60+60mg 7928.5 ± 1672.6 9059.20 ±2257.40 9311.50±3436.00 10701.30±4123.90 10658.30±5050.00 11156.80±5035.10 12707.70 ±5563.40 114.56± 20.71 100.08± 21.92 116.22± 28.90 114.51± 38.57 123.15± 41.25 139.12 ± 45.65

5.2 益氣活血中藥配伍對心肌缺血犬心功能的影響

心肌缺血引起心肌收縮力減弱，射血功能下降，每搏搏出量減少，收縮終末期殘存血量增加，射血分數(shù)下降，心臟泵功能失常［7］。心肌缺血時只能通過增加冠脈血流量來滿足心肌耗氧量的需求［8、9］。

結(jié)扎犬冠狀動脈造成急性心肌缺血后，人參可明顯增加犬冠脈血流量，增加左室內(nèi)壓最大上升速率，降低冠脈阻力，提示人參可明顯改善模型動物的冠脈循環(huán)，增加心肌血液供給和左室收縮力，而不增加心肌耗氧量，改善心功能，發(fā)揮抗心肌缺血作用。

紅花可明顯增加模型動物的心輸出量，增加左室內(nèi)壓最大上升速率，說明紅花可降低后負荷及室壁張力，增加左室收縮力和左室作功，不增加心肌耗氧量，改善心功能，發(fā)揮抗心肌缺血作用。

人參與紅花配伍可明顯增加模型動物的冠脈血流量和心輸出量，增加左室內(nèi)壓最大上升速率，降低左室舒張末壓，降低冠脈阻力和總外周阻力，說明人參與紅花配伍通過增加心輸出量，從而增加心肌血流量，改善左心的收縮和舒張功能，降低心臟的前后負荷，改善心功能，發(fā)揮抗心肌缺血作用。

犬冠狀動脈結(jié)扎造成急性心肌缺血后，給予益氣活血藥物，原來單味藥的某些藥理作用不太明顯，通過人參與紅花配伍，產(chǎn)生協(xié)同增效作用，可以增加冠脈血流量，降低左室舒張末壓和總外周阻力。人參與紅花配伍應(yīng)用尤其在增加冠脈血流量、左室內(nèi)壓最大上升速率，降低冠脈阻力上作用明顯優(yōu)于單味藥的藥理作用。

5.3 問題與展望

實驗結(jié)果顯示，益氣藥和活血藥配對應(yīng)用具有一定的協(xié)同增效作用，但同時對于某些指標協(xié)同作用不明顯，有時藥物作用的時間點上沒有一定的規(guī)律性。分析原因可能系中藥作用具有多成分、多途徑、多靶點等特點，多個中藥之間發(fā)生作用的機理更是復(fù)雜而多樣，可能與中藥之間影響吸收速率，促使吸收加快或減慢、排出迅速或延緩、干擾體內(nèi)降解過程和在體內(nèi)的代謝動力學(xué)過程的改變等有關(guān)。同時與動物的個體差異、動物的樣本量、造模手術(shù)的刺激以及益氣活血中藥配伍使用的劑量均有一定關(guān)系，因此有必要開展進一步的深入研究，如動物和藥物的選擇、劑量的摸索、實驗方法的優(yōu)化等，還有大量的工作要做。

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