寄生柑橘的根腐線蟲種類鑒定

高小倩，劉國坤，肖 順，張紹升

(福建農(nóng)林大學植物保護學院，福建 福州 350002)

2010年7月至2012年1月，本研究對福建省柑橘線蟲種類進行調(diào)查發(fā)現(xiàn)，一些生長衰退的柑橘根部受根腐線蟲(Pratylenchus spp.)的侵染。據(jù)報道根腐線蟲侵染柑橘能引起柑橘暴衰病[1－4]，因此，本研究對采自柑橘的根腐線蟲種類進行鑒定，了解其對柑橘的危害性，為柑橘線蟲病害診斷提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣本采集

采集地為福建省南平市順昌縣洋墩鄉(xiāng)洋墩村及漳州市長泰縣五四果場的生長衰退的柑橘園，選擇癥狀明顯的病樹采集病根及其根際土壤。

1.2 癥狀觀察

肉眼觀察發(fā)病樹的地上部與根部癥狀，結(jié)合根組織染色進行觀察和描述。

1.3 線蟲分離與鑒定

利用改良貝曼漏斗法分離線蟲，將其緩慢加熱殺死后用TAF固定液固定，并制成臨時玻片放在倒置顯微鏡下進行形態(tài)特征的觀察及攝影、測量。線蟲體表的細微結(jié)構(gòu)特征采用掃描電鏡進行觀察。根據(jù)文獻[4]－[7]進行線蟲種類鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 癥狀

調(diào)查表明，病樹樹勢衰弱，葉片小、稀少，并出現(xiàn)僵硬和黃化。重病樹的樹冠枝葉稀少，多枯枝，最后整株果樹枯死(圖1A、1B)。病樹抗寒、抗旱能力差，冬季大量落葉，春季花期提早，花多易落，坐果率低，落果嚴重，果實小，產(chǎn)量低。根腐線蟲主要侵染幼根的皮層薄壁組織，通過在根組織內(nèi)迅速繁殖大量破壞淺層根系。病樹根系萎縮，極少甚至無營養(yǎng)根，細根表皮產(chǎn)生褐色傷痕，皮層腐爛，易剝落(圖1C、1D)，病根組織內(nèi)可解剖到病原線蟲(圖1E、1F)。

圖1 根腐線蟲對柑橘的為害癥狀Fig.1 Harm symptoms of root-lesion nematodes to citrus

2.2 病原線蟲鑒定

經(jīng)鑒定侵染柑橘的根腐線蟲有2個種:咖啡根腐線蟲[P.coffeae(Zimmermann，1898)Filipjev＆Schuurmans Stekhoven，1941]和玉米根腐線蟲(P.zeae Graham，1951)。

2.2.1 咖啡根腐線蟲 (1)測量值。♀♀(n=20):L=652(543 －748)μm，a=20.5(17.0 －25.3)，b=6.31(5.81 －7.20)，b'=4.50(4.37 －4.94)，c=20.80(18.74 －22.93)，c'=1.93(1.70 －2.08)，V=80.3(78.1 －81.9)，口針長 =17.4(17.1 －17.8)μm，背食道腺開口距口針基部球 =2.91(2.64 －3.27)μm，尾長度 =31.55(29.75 －36.29)μm，口針基部球高 =2.68(2.64 －2.70)μm，口針基部球?qū)?=3.82(3.75 －3.88)μm，食道腺覆蓋腸的長度 =42.3(32.1 －47.5)μm。

♂♂(n=20):L=580(556 － 637)μm，a=22.7(19.9 －27.3)，b=6.33(5.34 － 7.69)，b'=4.48(3.69 －5.41)，c=19.4(16.8 －21.9)，c'=1.73(1.40 －2.01)，口針長 =17.4(16.1 －19.7)μm，背食道腺開口距口針基部球 =3.01(2.96 － 3.03)μm，尾長度 =30.1(27.6 － 33.1)μm，口針基部球高 =1.86(1.69 －2.29)μm，口針基部球?qū)?=2.86(2.64 －3.38)μm，食道腺覆蓋腸的長度 =38.4(28.0 －52.6)μm。

(2)形態(tài)描述。雌蟲蟲體緩慢加熱殺死后直伸或稍向腹面彎曲(圖2A)。蟲體環(huán)紋清晰，側(cè)區(qū)具4條側(cè)線。唇區(qū)稍縊縮，2個唇環(huán)，唇角鈍圓(圖2F)。頭架中等發(fā)達，外緣向體后延伸至第1條體環(huán)處?？卺槾侄?、發(fā)達，口針基部球圓形。背食道腺開口明顯，距口針基部球約2.91 μm。中食道球卵圓形，輪廓清晰，有明顯的瓣膜。食道腺覆蓋于腸前端的腹面和側(cè)面，覆蓋長度約42.3 μm(圖2B)。排泄孔位于食道—腸瓣門的前方，半月體緊靠排泄孔的前部，約占2個體環(huán)的寬度。單卵巢前伸，卵母細胞單行排列，受精囊明顯，卵呈圓形，其內(nèi)充滿精子。后陰子宮囊長度約62.7 μm，約為體寬的2倍，末端有明顯的細胞分化(圖2C)。陰道短直，長約陰門處體寬的1/4(圖2G)。尾部近似圓柱形，末端鈍圓或平截，光滑，偶有缺刻，尾部環(huán)紋明顯，寬約1.44 μm(圖2J－2N)。側(cè)尾腺口較小，位于尾的中后部。

雄蟲常見，雌雄比例相近。雄蟲體長略短于雌蟲，前部較窄，口針基部球偏小，頭部形態(tài)特征及唇環(huán)數(shù)目與雌蟲相似(圖2D、2H)。交合刺纖細，長度約為16.4(14.3 －19.8)μm，引帶長約4.53 μm(圖2E、2I)。

圖2 咖啡根腐線蟲的形態(tài)特征Fig.2 Morphological characters of P.coffeae

2.2.2 玉米根腐線蟲 (1)測量值?！狻?n=15):L=410(389 －457)μm，a=20.7(17.5 －24.1)，b=5.08(4.62 －6.02)，b'=3.61(3.34 － 4.02)，c=14.8(10.8 － 16.9)，c'=2.44(2.14 － 3.42)，V=71.8(68.5 －73.8)，口針長 =15.7(14.8 －16.5)μm，背食道腺開口距口針基部球 =2.64(2.18 －2.90)μm，尾長度 =28.4(24.6 －36.7)μm，口針基部球高 =2.73(2.44 －2.99)μm，口針基部球?qū)?=5.06(4.47 －5.71)μm，食道腺覆蓋腸的長度 =33.6(26.7 －44.4)μm。

♂♂(n=1):L=352 μm，a=19.9，b=4.53，b'=3.30，c=16.0，c'=2.17，口針長 =13.9 μm，背食道腺開口距口針基部球 =2.53 μm，尾長度 =21.9 μm，口針基部球高 =1.61 μm，口針基部球?qū)?=3.39 μm，食道腺覆蓋腸的長度 =29.1 μm。

(2)形態(tài)描述。雌蟲蟲體粗短，溫熱殺死后身體僵直或略向腹面彎曲(圖3A)。蟲體環(huán)紋較細，側(cè)區(qū)具4條側(cè)線。唇區(qū)較高，無明顯縊縮，有3條唇環(huán)，第1條唇環(huán)明顯比后2條唇環(huán)窄，唇拐角鈍圓(圖3B、F)。頭架中等骨化，口針發(fā)達，口針基部球錨狀，高2.73 μm，寬5.06 μm。中食道球卵圓形，輪廓較為清晰，有明顯的瓣膜。排泄孔位于食道—腸瓣門的前方，半月體緊靠排泄孔的前部，食道腺從腹面及側(cè)面覆蓋于腸的前端，覆蓋長度稍短，約33.6 μm。前生單卵巢，卵母細胞單行排列，受精囊不清楚，不縊縮，陰道直而短，約為陰門處體寬的1/3(圖3G)。后陰子宮囊無細胞分化，長度約27.5 μm。尾端窄，錐圓，末端鈍尖，光滑無紋，側(cè)尾腺口位于尾的中后部(圖3C、3H)。雄蟲稀少，蟲體纖細，前部較窄，口針基部球明顯小于雌蟲(圖3D)，其他形態(tài)特征與雌蟲相似。交合刺明顯，長15.5 μm，引帶長4.55 μm，側(cè)尾腺口位于尾的中后部(圖3E)。

圖3 玉米根腐線蟲的形態(tài)特征Fig.3 Morphological characters of P.zeae

3 討論

據(jù)報道，柑橘可以遭受咖啡根腐線蟲、短尾根腐線蟲(P.brachyurus)和傷殘根腐線蟲(P.vulnus)等多種根腐線蟲侵染而引起柑橘暴衰病，咖啡根腐線蟲為優(yōu)勢種[8]，本研究從福建省生長衰退的柑橘根部分離和鑒定了咖啡根腐線蟲和玉米根腐線蟲，咖啡根腐線蟲為優(yōu)勢種。本研究表明，根腐線蟲侵染的柑橘園柑橘樹表現(xiàn)黃化和衰退，為了證實該線蟲對柑橘的危害性，目前正在進一步開展根腐線蟲對柑橘的致病性研究。

[1]張紹升.植物線蟲病害診斷與治理[M].福州:福建科學技術(shù)出版社，1999:129－131.

[2]張紹升，劉國坤，肖順，等.果樹疑難病害診治圖譜[M].福州:福建科學技術(shù)出版社，2006:11－20.

[3]張紹升.果樹線蟲病害和防治研究[J].果樹科學，1996，13(1):10 －13.

[4]HANDOO Z A，GOLDEN A M.A key and diagnostic compendium to the species of the genus Pratylenchus filipjev，1936[J].Journal of Nematology，1989，21(2):202 －218.

[5]ROMAN J，HIRSCHMANN H.Morphology and morphomertrics of six species of Patylenchus[J].Journal of Nematogy，1969，1(4):363－386.

[6]SIDDIQI M R.C.I.H.Description of Plant-parasitic Nematodes Set 1，No.6:Pratylenchus coffeae[S].England:CAB International Institute of Parasitology，1972.

[7]FORTUNER R.C.I.H.Description of Plant-parasitic Nematodes Set 6，No.77:Pratylenchus zeae[S].England:Commonwealth Institute of Helminthology，1976.

[8]LUC M，SIKORA R A，BRIDGE J.Plant-parasitic Nematodes in Subtropical and Tropical Agriculture[M].CAB Internathionl，UK，1990:452 －454.