食管鱗狀細(xì)胞癌組織中EGFR、GST－π和癌基因C－erbB－2的表達(dá)及其意義

強(qiáng) 勇，徐艷輝，李忠東，錢建軍，景 華

（南京軍區(qū)南京總醫(yī)院心胸外科，南京210002）

食管鱗狀細(xì)胞癌組織中EGFR、GST－π和癌基因C－erbB－2的表達(dá)及其意義

強(qiáng) 勇，徐艷輝，李忠東，錢建軍，景 華

（南京軍區(qū)南京總醫(yī)院心胸外科，南京210002）

目的本研究觀察EGFR、GST－π和C－erbB－2在216例食管鱗癌中的表達(dá)及其意義。方法收集手術(shù)食管鱗癌標(biāo)本，應(yīng)用EnVision法免疫組化檢測EGFR、GST－π和C－erbB－2。并分別比較高分化與中、低分化組，局部浸潤較淺與較深組，有與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，臨床分期較早與較晚組3種基因的表達(dá)，探討3者與食管鱗癌臨床因素間的關(guān)系。結(jié)果EGFR的表達(dá)與食管鱗癌分化程度（P＝0.036）、局部浸潤（P＝0.022）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況（P＝0.037）、臨床分期（P＝0.021）有相關(guān)性，GST－π和C－erbB－2的表達(dá)與局部浸潤（P＝0.019、0.006）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況（P＝0.028、0.039）、臨床分期（P＝0.012、0.027）緊密相關(guān)，與分化程度（P＝0.162、0.722）不相關(guān)。結(jié)論EGFR、GST－π和C－erbB－2聯(lián)合檢測對判斷食管鱗癌生物學(xué)行為、預(yù)后及指導(dǎo)治療有重要意義。

腫瘤，鱗狀細(xì)胞；食管；EGFR；GST－π；C－erbB－2；免疫組織化學(xué)

食管癌是我國五大癌癥之一，發(fā)病率和病死率一直居高不下。其治療面臨早期診斷困難、易出現(xiàn)局部浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、耐藥性等問題。以往研究證實(shí)EGFR、GST－π和C－erbB－2與上皮來源腫瘤的局部浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、耐藥性等問題密切相關(guān)［1－5］。本研究應(yīng)用EnVision免疫組化法檢測食管鱗狀細(xì)胞癌組織中EGFR、GST－π和C－erbB－2的表達(dá)情況，觀察它們與食管鱗癌臨床因素的關(guān)系，以期為食管癌早期診斷、判斷其生物學(xué)行為以及預(yù)后提供重要參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 本研究收集病例，為本科2010年11月至2011年4月收治，術(shù)后病理學(xué)檢查證實(shí)為食管鱗狀細(xì)胞癌，排除術(shù)前行放療、化療及免疫治療，共216例，其中，男151例，女65例；年齡42～79歲，中位年齡58歲。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者68例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移148例。按組織學(xué)分化程度：高分化者61例，中低分化者155例。按國際抗癌聯(lián)合會（international union against cancer，UICC）2009年標(biāo)準(zhǔn)臨床病理分期：0期12例，Ⅰ期56例，Ⅱ期70例，Ⅲ期67例，Ⅳ期11例。標(biāo)本組織經(jīng)4%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋4μm厚連續(xù)切片，分別進(jìn)行蘇木精－伊紅（H－E）染色、光鏡觀察，并運(yùn)用EnVision免疫組化法染色，檢測 EGFR、GST－π和C－erbB－2的表達(dá)。所有染色結(jié)果均由兩位資深病理科醫(yī)生閱讀診斷核實(shí)。

1.2 試劑與方法 鼠抗人單克隆抗體 EGFR、GST－π、C－erbB－2分別購自Dakoky公司、novocastra公司、NeoMaikers公司，克隆號分別為：E30、LW29、Cocktail；Envision免疫組化檢測試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)有限公司，DAB顯色試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。免疫組織化學(xué)法采用En－Vision二步法，抗原修復(fù)采用EDTA緩沖液（pH 8.0）高溫高壓熱修復(fù)，染色程序按Envision試劑盒說明書進(jìn)行，采用3，3′－二氨基聯(lián)苯胺（DAB）－H2O2顯色。

1.3 結(jié)果判斷 EGFR陽性信號定位于細(xì)胞膜，GST－π陽性信號定位于細(xì)胞質(zhì)。C－erbB－2陽性信號定位于細(xì)胞膜，均為黃色或棕黃色顆粒作為陽性細(xì)胞。每張切片隨機(jī)選擇10個高倍視野（×200），按陽性細(xì)胞百分比分為4個等級，即不著色為陰性（－），＜25%為弱陽性（＋），25%～50%為中度陽性（＋＋），＞50%為強(qiáng)陽性（＋＋＋）。本文所指陽性包括弱陽性、中度陽性和強(qiáng)陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 研究結(jié)果應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。率的比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 EGFR、GST－π和 C－erbB－2在食管鱗癌中的表達(dá) EG－FR、GST－π和C－erbB－2在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)情況見表1、封2圖1。

2.2 EGFR、GST－π和 C－erbB－2表達(dá)與臨床因素間的關(guān)系局部浸潤較深者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性者，臨床分期較晚者，EGFR、GST－π和 C－erbB－2的陽性表達(dá)率均更高；分化程度較低者，EGFR的陽性表達(dá)率更高。即 EGFR、GST－π和 C－erbB－2的陽性表達(dá)率與局部浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期呈正相關(guān)，而與患者性別、年齡、腫瘤直徑比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表1 EGFR、GST－π和C－erbB－2在食管鱗癌中的表達(dá)（%）

表2 食管鱗癌中EGFR的表達(dá)與臨床因素間的關(guān)系（n）

2.3 EGFR、GST－π和 C－erbB－2基因表達(dá)情況與預(yù)后相關(guān)因素間的關(guān)系 眾多研究顯示［6－7］，局部浸潤程度、腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況與食管鱗癌預(yù)后緊密相關(guān)，是判斷其預(yù)后的主要因素。EGFR、GST－π和C－erbB－2基因在食管鱗狀細(xì)胞癌中，2個或2個以上基因陽性表達(dá)者113例（52.3%），無基因或1種基因陽性表達(dá)者103例（47.7%），基因陽性表達(dá)情況與食管鱗癌預(yù)后相關(guān)因素的關(guān)系見表3。

表3 3種基因表達(dá)情況與預(yù)后相關(guān)因素間的關(guān)系［n（%）］

3 討 論

表皮生長因子受體（EGFR）是腫瘤細(xì)胞增殖、分化和抗凋亡過程中的重要調(diào)節(jié)因子，其高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、黏附、侵襲和轉(zhuǎn)移，誘導(dǎo)腫瘤新生血管形成［1］。這一結(jié)論得到本研究結(jié)果驗(yàn)證，即EGFR高表達(dá)與食管鱗癌分化程度、局部浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分期有密切的關(guān)系。關(guān)于EGFR及針對EGFR的靶向藥物的研究，已成為近年來抗腫瘤治療的主要熱點(diǎn)［4，8］。

GST－π，即胎盤型谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶，具有結(jié)合、解毒等功能［9－10］，Kodate等在1986年首次證明在人結(jié)腸癌中 GST－π高表達(dá)，以后相繼在多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)GST－π陽性表達(dá)或含量顯著增高［11］。這與本研究結(jié)果基本一致，即在食管鱗癌中GST－π陽性表達(dá)率高達(dá)80.1%。本研究還顯示，GST－π的表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌局部浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分期密切相關(guān)。大量研究表明，GST－π與腫瘤預(yù)后和耐藥關(guān)系密切，是腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥的一種標(biāo)志，已成為癌癥化療方案選擇的重要參考［2－3，12－13］。

C－erbB－2基因，又稱 HER－2基因，位于17號染色體長臂上（17q21），cDNA的長度為4.5kb，編碼的C－erbB－2蛋白是一種相對分子質(zhì)量為185×103的跨膜糖蛋白，其胞內(nèi)區(qū)的羧基端含有多個酪氨酸，可以通過磷酸化而被激活，再與含有SH2結(jié)構(gòu)域的蛋白結(jié)合。將胞外信號傳到核內(nèi)，最終在核內(nèi)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄，從而發(fā)揮對細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)作用。C－erbB－2的表達(dá)與食管癌預(yù)后關(guān)系的報道尚不多。已有不少學(xué)者正致力于C－erbB－2腫瘤靶向治療的研究［14］。

本研究顯示，2個或2個以上基因陽性表達(dá)與主要預(yù)后相關(guān)因素，即局部浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分期，均密切相關(guān)。提示聯(lián)合檢測EGFR、GST－π和C－erbB－2對判斷食管鱗癌生物學(xué)行為、預(yù)后及指導(dǎo)治療有重要意義。

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Expression of EGFR，GST－πand C－erbB－2 in esophageal squamous cell carcinoma and their clinical significance

Qiang Yong，Xu Yanhui，Li Zhongdong，Qian Jianjun，Jing Hua
（Department of Cardiothoracic Surgery，Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command，Nanjing，Jiangsu210002，China）

ObjectiveTo observe the expression of EGFR，GST－πand C－erbB－2in 216esophageal squamous cell carcinoma（ESCC）patients.MethodsWe collected surgical specimens of ESCC，and applied EnVision immunohistochemical method to detect the expression of EGFR，GST－πand C－erbB－2，compared well－differentiated group and poorly differentiated group，shallow local infiltration group and deep group，with and without lymph node metastasis group，earlier clinical stage group and later group，then researched the relationship between the three biochemical substances and clinical factors.ResultsThe data indicates that the expression of EGFR was closely related to differentiation degree（P＝0.036），the depth of local infiltration（P＝0.022），lymph node metastasis（P＝0.037）and the clinical stage（P＝0.021）；and the expression of GST－πand C－erbB－2were associated with depth of local infiltration（P＝0.019，0.006），lymph node metastasis（P＝0.028，0.039）and the clinical stage（P＝0.012，0.027），but not associated with the differentiation degree（P＝0.162，0.722）.ConclusionCombined detection of EGFR，GST－πand C－erbB－2can play an important role to predict the biological behaviour，prognosis and guide therapy.

neoplasms，squamous cell；esophagus；EGFR；GST－π；C－erbB－2；immunohistochemistry

10.3969／j.issn.1671－8348.2012.32.009

A

1671－8348（2012）32－3377－03

2012－02－20

2012－07－08）

·臨床研究·