北京地區(qū)規(guī)?；膛鋈N病毒性腹瀉病的血清學調查

傅彩霞，靳興軍，鄭瑞峰，郭 峰，韓 磊，李 佳，吳惠明，王玉田，張 躍，杜 鵑

（北京市獸醫(yī)實驗診斷所，北京100101）

牛腹瀉性疾病是由細菌、病毒、寄生蟲等病原微生物感染或營養(yǎng)、環(huán)境、管理等因素造成的，在諸多因素中病原微生物感染是造成牛腹瀉的重要因素。引起牛腹瀉常見的病原有牛病毒性腹瀉病毒（Bovine viral idiarrhea virus，BVDV）、牛冠狀病毒（Bovine coronavirus，BCV）、牛輪狀病毒（Bovine rotavirus，BRV）等。BVDV主要侵害幼齡牛，表現(xiàn)為腹瀉或黏膜病，成年牛多呈亞臨床感染，但懷孕母牛感染后，可引起死胎、流產、產弱犢、先天性畸形犢等。無論顯性感染或者隱性感染均可引起免疫抑制，導致感染牛的抵抗力下降，進而對其他疫病的易感性增強，BVDV感染在歐美及世界各養(yǎng)牛發(fā)達國家非常廣泛。BCV是引起新生犢牛腹瀉和成年牛冬痢最主要的病原之一，臨床上主要表現(xiàn)為新生犢牛出血性腹瀉，成年牛冬季嚴重水樣腹瀉（有時伴有血液和黏液）等特征，BCV感染呈世界性分布。BRV感染多發(fā)生在15日齡～45日齡的犢牛，其臨床表現(xiàn)為水樣腹瀉、嚴重脫水和酸中毒，具有很高的死亡率，成年牛大多呈隱性感染。BRV流行廣、發(fā)病率高且對動物有較大危害，也己成為一種世界性疾?。?］。近年來，隨著奶牛養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大，奶牛特別是犢牛腹瀉的發(fā)病率呈上升趨勢，多種病原混合感染嚴重，死亡率較高，嚴重影響了奶牛早期的生長發(fā)育和后期生產性能的發(fā)揮。為進一步了解目前北京地區(qū)奶牛腹瀉中BVDV、BCV、BRV感染流行情況，為本地區(qū)奶牛腹瀉性疾病的有效防治提供技術指導，本項目對2010年－2011年北京部分地區(qū)規(guī)模化奶牛場的BVDV、BCV、BRV感染情況進行了血清學調查，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 奶牛血清樣品 2010年－2011年從密云、懷柔、昌平等3個區(qū)縣的31個規(guī)?；膛觯杉?歲～3歲腹瀉奶牛的血液樣品，共計1 650份，按常規(guī)方法分離血清。所選牛群均未免疫接種各種類型的BVDV、BCV、BRV疫苗。

1.1.2 主要試劑 牛病毒性腹瀉抗體ELISA試劑盒為美國IDEXX公司產品；牛冠狀病毒抗體ELISA試劑盒（阻斷法）為BIOX公司產品；牛輪狀病毒抗體ELISA試劑盒（阻斷法）為BIOX公司產品。

1.2 方法

按照試劑盒說明書進行檢測。

2 結果

2.1 牛病毒性腹瀉抗體檢測結果

結果顯示，從1 650份血清中共檢出BVDV抗體陽性血清795份，平均陽性率為48.2%，795份陽性血清分布在3個區(qū)縣的22個牛群。其中懷柔區(qū)抗體陽性率為32%，密云縣抗體陽性率為60.3%，昌平區(qū)抗體陽性率為51.7%，BVDV感染己在北京地區(qū)規(guī)?；膛鲋衅毡榇嬖冢ū?）。

表1 懷柔、密云、昌平3個區(qū)縣牛群BVDV抗體檢測結果Table1 The detection results of antibody against BVDV in herd from Huairou，Miyun and Changping

2.2 牛冠狀病毒抗體檢測結果

結果顯示，從1 650份血清中共檢出BCV抗體陽性血清943份，平均陽性率為57.2%，943份陽性血清分布在3個區(qū)縣的26個牛群。其中，懷柔區(qū)抗體陽性率為65.5%，密云縣抗體陽性率為57.1%，昌平區(qū)抗體陽性率為42.8%，3個區(qū)縣的規(guī)模化奶牛場中BCV感染率較高（表2）。

表2 懷柔、密云、昌平3個區(qū)縣牛群BCV抗體檢測結果Table2 The detection results of antibody against BCV in herd from Huairou，Miyun and Changping

2.3 牛輪狀病毒抗體檢測結果

結果顯示，從1 650份血清中共檢出BRV抗體陽性血清861份，平均陽性率為52.2%，這861份陽性血清分布在3個區(qū)縣的20個牛群。其中，懷柔區(qū)抗體陽性率為54.0%，密云縣抗體陽性率為54.1%，昌平區(qū)抗體陽性率為45.1%（表3）。

表3 懷柔、密云、昌平3個區(qū)縣牛群BRV抗體檢測結果Table3 The detection results of antibody against BRV in herd from Huairou，Miyun and Changping

2.4 混合感染情況

本次調查中，同時有2種或3種病原混合感染率為35.1%（579／1650），其中，BVDV 和BCV 混合感染率為3.8%（62／1650），BVDV 和 BRV 混合感染率為3.2%（52／1650），BCV 和BRV 混合感染率為10.2%（169／1650），BVDV、BCV 和 BRV 3種病原混合感染率為17.9%（296／1650）。由此可見，在密云、懷柔和昌平3個區(qū)縣的牛群中，BVDV、BCV和BRV2種或3種病原混合感染嚴重。

3 討論

近年，奶牛特別是犢牛腹瀉普遍發(fā)生于世界各地，常引起大批犢牛生長不良或死亡，已成為現(xiàn)代養(yǎng)牛業(yè)的一大障礙。在引起牛腹瀉的諸多因素中，BVDV、BCV、BRV感染是造成牛腹瀉的主要因素。國外資料表明，BVDV呈世界性分布，在養(yǎng)牛業(yè)發(fā)達的國家?guī)缀醵加蠦VDV的存在與流行，有的血清抗體檢出率高達90%以上。在我國，流行病學調查顯示，牛群中BVDV的感染率為30%～95%，根據病毒感染時期的不同，可以造成胚胎死亡、流產、木乃伊胎以及胎兒免疫耐受進而發(fā)展為持續(xù)性感染畜，嚴重時可能發(fā)展成為致死性黏膜病。多數持續(xù)性感染動物外觀健康，但生產性能下降，在疫病傳播中具有重要作用。同時，BVDV還是牛源生物制品（血清、凍精、疫苗等）的常在污染源［2－3］，給畜牧業(yè)生產和相關商業(yè)領域造成巨大的經濟損失。BCV引起的腹瀉在冬季多發(fā)，約一周齡以內的犢牛發(fā)病最為常見，病死率較高，而成年牛發(fā)病率較高、死亡率低。1972年美國Stair等［4］在犢牛和成年牛的腹瀉病料中檢出BCV，以后在世界許多國家和地區(qū)都相繼報道了該病的發(fā)生。1985年宋廣林等［5］首次報道了BCV在我國的存在，隨后各地均有報道［6］。BRV可感染各年齡段的牛，多發(fā)生于1月齡以內的犢牛，犢牛感染后表現(xiàn)為水樣腹瀉、嚴重脫水，甚至死亡，而成年牛大多為隱性感染，其血清中抗體檢出率高達40%～100%，BRV在體外有很強的抵抗力，成年動物隱性感染并不斷排出病毒，若畜群中一旦感染發(fā)病，則每年都會發(fā)生。RBV感染若繼發(fā)其他疫病，死亡率會大大增加，給養(yǎng)牛業(yè)造成了巨大的經濟損失。近年來，由于我國各牛場對此類疾病重視程度不夠，缺乏有效的防控措施，導致我國牛群BVDV、BCV、BRV感染呈上升趨勢，因此，如何采取有效的措施預防和控制牛腹瀉，提高疫病的整體防控水平己成為目前養(yǎng)牛業(yè)生產的一項重要任務。

近年來，北京地區(qū)奶業(yè)生產發(fā)展速度較快，奶牛養(yǎng)殖業(yè)已成為京郊農民致富的重要產業(yè)之一，然而由于當前奶牛腹瀉性疾病的臨床發(fā)病率、死亡率逐年升高，治療費用劇增，嚴重影響了奶牛養(yǎng)殖業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展，因此，本研究選擇了奶牛養(yǎng)殖規(guī)模較大的懷柔、密云、昌平3個區(qū)縣作為代表進行BVDV、BCV、BRV感染的血清學調查。調查結果顯示，BVDV抗體平均陽性率為48.2%，BCV抗體平均陽性率為57.2%，BRV抗體平均陽性率為52.2%。本次調查結果與國內其他地區(qū)的報道結果基本一致。金愛華等［7］對上海奉賢區(qū)14家奶牛場奶牛血清進行了BVDV抗體檢測，陽性率為34.06%。楊得勝等［8］對福建省9個地區(qū)大型牛場和散養(yǎng)戶牛進行BVDV抗體血清學調查，總陽性率高達92.5%。魏偉等［9］對黑龍江省內不同地區(qū)的2006年－2008年的1 388份血清樣本進行了BVDV抗體檢測，3年的平均BVDV血清陽性率分別為54.66%、57.68%和62.90%。姚火春等［10］對我國不同地區(qū)的奶牛、黃牛及人血清進行了BCV抗體檢測，陽性率分別為80.6%、67%、19.3%。劉合義等［11］對黑龍江一些地區(qū)采集到的256份牛血清樣品進行BCV抗體檢測，結果陽性率為65.23%。李鑫等［12］對2005年－2006年期間在我國12個不同地區(qū)收集的1 760份牛血清進行了BRV抗體檢測，其強陽性率12.8%、中等陽性率70.4%、弱陽性率15.9%，總抗體陽性率高達99%。不同地區(qū)的流行病學調查資料均顯示出，目前在我國牛群中BVDV、BCV、BRV感染已相當嚴重。本次調查所采集的血清均為1歲～3歲的奶牛，檢測到的BVDV、BCV及BRV抗體水平均較高，可判斷為經歷過BVDV、BCV及BRV的自然感染，血清抗體的陽性率一定程度上反映了BVDV、BCV及BRV的感染情況。本次調查的部分牛場兩種或三種病原混合感染率為35.1%，混合感染嚴重，BVDV、BCV及BRV感染在密云、懷柔和昌平3個區(qū)縣的牛群中普遍存在，感染率較高，存在有地區(qū)差異，應引起高度重視，進一步加強牛群中BVDV、BCV及BRV的流行病學調查、監(jiān)測及防控力度。

對于BVDV、BCV及BRV的防制，目前由于我國對此類疫病重視程度不夠等諸多因素的存在，使得在疫病防制上存在很大難度。國外防制BVDV主要采用疫苗接種、加強監(jiān)測、淘汰持續(xù)感染和免疫耐受的動物。而我國BVDV具有特征性臨床癥狀的病例并不多見，多半是持續(xù)感染和免疫耐受等隱性感染，疫苗防控效果不理想。國內目前也尚無預防BCV、BRV的有效疫苗。為了更好地預防和控制牛腹瀉性疾病，必須建立應用行之有效的練合性防制措施，從免疫、檢測、環(huán)境及飼養(yǎng)管理等多方面綜合入手。定期進行血清學、病原學檢測，尤其是對畜群持續(xù)性感染動物的定期檢測，嚴格牛群及牛源生物制品的檢測；淘汰撲殺持續(xù)性感染的陽性牛；建立嚴格的衛(wèi)生消毒制度，加強環(huán)境控制；嚴格引種檢疫，做好隔離飼養(yǎng)管理工作。

［1］殷 震，劉景華.動物病毒學［M］.北京：科學出版社，1997：645－652，697－698，562－571.

［2］Bielanski A，Nadin－Davis S，Sapp T，et al.Viral contamination of embryos cryopreserved in liquid nitrogen［J］.Cryobiology，2000，40（2）：110－116.

［3］Patel J R，Shilleto，R W，Williams J，et al.Prevention of transplacental infection of bovine foetus by bovine viral diarrhea virus through vaccination［J］.Arch Virol，2002，147：2453－2463.

［4］Stair E L，Rhodes M B，White R G，et al.Neonatal calf diarrhea：purification and electron microscopy of a coronavirus－like agent［J］.Am J Vet Res，1972，33：1147－1156.

［5］宋廣林，董惠蘭，滕 慶，等.犢牛流行性腹瀉病原研究［J］.畜牧獸醫(yī)學報，1985，16（2）：121－124.

［6］陸承平.牛冠狀病毒的檢出及分布［J］.動物檢疫，1986（3）：36－40.

［7］金愛華，衛(wèi)秀余，沈 強，等.奶牛病毒性腹瀉病的血清學調查［J］.上海畜牧獸醫(yī)通訊，2008（3）：31.

［8］楊得勝，黃 雁，洪 英，等.2006年福建省牛病毒性腹瀉病的血清學調查［J］.動物醫(yī)學進展，2007，28（9）：49－51.

［9］魏 偉，李 巖，劉長軍，等.黑龍江省部分奶牛場牛病毒性腹瀉病毒感染的血清學調查［J］.中國獸醫(yī)科學，2009，39（6）：561－563.

［10］姚火春，杜念興，徐為燕，等.牛冠狀病毒的血清流行病學調查［J］.南京農業(yè)大學學報，1990，13（1）：117－121.

［11］劉合義，孫留霞，王進軼，等.牛冠狀病毒重組N蛋白間接ELISA檢測方法的建立［J］.中國預防獸醫(yī)學報，2009，31（8）：618－622.

［12］李 鑫，常繼濤，劉海軍，等.我國A群牛輪狀病毒感染的血清流行病學調查［J］.中國預防獸醫(yī)學報，2010，32（9）：664－667.