黃鱔胚胎和仔魚發(fā)育過程中機體營養(yǎng)成分的變化

王自蕊 王曉芳 朱長生 周秋白

黃鱔（Monopterus albus），又名鱔魚、長魚等，屬合鰓目，合鰓科，黃鱔屬，是我國重要的淡水經(jīng)濟魚類之一，主要分布在中國、朝鮮、日本等國家。黃鱔肉質(zhì)細嫩、味道鮮美、營養(yǎng)價值高，含肉率高達65%以上[1]。黃鱔不僅有重要的食用價值，而且還具有良好的藥用價值，近年來，各地廣泛開展了黃鱔的人工養(yǎng)殖，取得了較好的效果[2]。目前，有關(guān)黃鱔幼體的研究，大多集中在形態(tài)學方面。楊代勤等(1999)用人工授精方法對黃鱔胚胎發(fā)育和魚苗培育進行了初步探索[3]。周秋白等(2003)首次用顯微攝影記錄了黃鱔的胚胎期及胚后發(fā)育的過程[4]。評估機體生長發(fā)育狀況和營養(yǎng)代謝的更好辦法則是對機體生化成分變化的測定。目前國內(nèi)有不少學者對部分魚類不同生長階段進行了機體生化成分的測定[5-6]，但在受精卵孵化期間的機體營養(yǎng)成分變化方面報道較少。

許多魚類的仔魚在由內(nèi)源性營養(yǎng)轉(zhuǎn)換為外源性營養(yǎng)時往往會出現(xiàn)大量死亡，死亡原因錯綜復(fù)雜，但能否及時提供適口性餌料是其中一個重要因素[7]。在魚類胚胎發(fā)育階段和仔魚發(fā)育早期，營養(yǎng)來源于卵黃所儲存的內(nèi)源性物質(zhì)。一般而言，魚卵含有仔魚在卵黃營養(yǎng)階段所需的所有營養(yǎng)，可以在仔魚攝食外源性營養(yǎng)之前，保證內(nèi)環(huán)境平衡和發(fā)育[8]。不同種類魚卵的生化組成各不相同，其主要成分（蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物）的消耗順序在質(zhì)和量上都有區(qū)別[9]。因此，本試驗以黃鱔為對象，研究受精胚胎發(fā)育期和仔魚期在饑餓狀態(tài)下機體主要營養(yǎng)成分的變化，為預(yù)測幼魚的成活率及了解其開口仔魚對蛋白質(zhì)和脂肪的需求奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料來源

試驗所用受精卵來自江西農(nóng)業(yè)大學黃鱔繁殖試驗基地。受精卵置直徑14.8 cm的培養(yǎng)皿內(nèi)加曝氣自然水，室溫（25～30℃）靜水孵化到幼魚階段，定期換水，未喂食。

1.2 檢測指標及方法

從卵受精當天開始，每2 d（仔魚階段每5 d）取樣1次，每次取3份樣品，每份樣品40粒卵(仔魚)，用于測定水分、蛋白質(zhì)和脂肪等的含量。干物質(zhì)和粗蛋白質(zhì)的含量測定分別參照國家標準GB 6435—86(1996)和GB/T 6432—94（1996）推薦的方法測定。脂肪含量測定采用Folch提取脂質(zhì)法：每份取30顆卵或仔魚，搗碎樣品后，加1 ml氯仿-甲醇（1：2）攪拌搖勻后靜置24 h，用混合液潤洗濾紙和漏斗并抽提2～3次，倒入試管后加氯化鎂，振蕩1 min后靜置2～3 h，待清晰分層后移走上層甲醇，放入真空干燥箱中干燥，15 d左右，至水分蒸發(fā)完全，稱重。

1.3 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)以“平均值±標準誤”表示，采用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計分析。統(tǒng)計結(jié)果的顯著性水平為P＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 濕重和干重及含水量(見表1)

由表1可知，黃鱔機體濕重在胚胎發(fā)育期和仔魚發(fā)育期變化都不顯著(P＞0.05)，但出膜前后變化顯著(P＜0.05)，出膜前機體濕重為29.93 mg，出膜后第1 d濕重為17.52 mg，相比出膜前濕重含量下降了41%(P＜0.05)。機體干重在整個胚胎發(fā)育期差異不顯著，但在出膜后第10 d開始，機體干重顯著下降(P＜0.05)。含水量在受精卵的整個胚胎發(fā)育階段差異不顯著，保持在83.28%～83.71%之間。但在出膜前后卻有顯著差異（P＜0.05），出膜后含水量突然下降，之后至第10 d開始慢慢恢復(fù)到出膜前的水平。

表1 黃鱔胚胎及仔魚機體的濕重、干重和含水量

2.2 蛋白質(zhì)和脂肪及占干濕重比(見表2)

表2 黃鱔胚胎及仔魚機體蛋白質(zhì)和脂肪的含量及占濕重比

由表2可知，蛋白質(zhì)的質(zhì)量在黃鱔受精卵的整個發(fā)育期間差異不顯著(P＞0.05)，但是呈下降趨勢。仔魚發(fā)育到20 d時，相比胚胎發(fā)育初期，蛋白質(zhì)含量下降了28%。蛋白質(zhì)占濕重的百分含量在胚胎發(fā)育期和仔魚發(fā)育期第 10、15、20 d 之間差異都不顯著(P＞0.05)，但與仔魚發(fā)育期1 d和5 d相比差異顯著(P＜0.05)，并且仔魚發(fā)育期第1 d和第5 d之間存在顯著差異(P＜0.05)。

每顆卵粒蛋白質(zhì)的質(zhì)量在胚胎發(fā)育期為3.5 mg左右，仔魚孵出后，蛋白質(zhì)在出膜1 d時質(zhì)量較大，1～10 d呈下降趨勢，在出膜10 d時降到最低水平，隨后保持基本穩(wěn)定（P＞0.05）。脂肪質(zhì)量在胚胎發(fā)育期基本不變（P＞0.05），仔魚發(fā)育階段明顯下降，在出膜10 d后下降量顯著高于出膜1 d仔魚（P＜0.05）。脂肪的質(zhì)量在整個胚胎發(fā)育期無顯著變化(P＞0.05)，但與仔魚發(fā)育期第 10、15、20 d 相比存在顯著差異(P＜0.05)。仔魚發(fā)育到第20 d時，相比胚胎發(fā)育初期，脂肪含量下降了57.8%。脂肪占濕重比整個脂肪發(fā)育期差異不顯著，但在出膜后，脂肪占濕重比顯著上升(P＜0.05)，之后隨時間增加而呈下降趨勢。而對于占濕重比例，蛋白質(zhì)占濕重比和脂肪占濕重比兩者在出膜時都有一迅速上升階段。

由表2可知，蛋白質(zhì)占干重的百分含量在整個發(fā)育期間差異不顯著（P＞0.05）。除去水分，蛋白質(zhì)的變化范圍很小，在胚胎發(fā)育期蛋白質(zhì)占干重比從第3 d開始維持在70%左右。脂肪占干重的百分含量在胚胎發(fā)育初期含量較低，到第3 d時有明顯增加（P＜0.05），之后保持穩(wěn)定。仔魚發(fā)育初期，出膜1 d相比出膜前，脂肪占干重比顯著下降(P＜0.05)，但出膜后第5 d，脂肪占干重比又明顯增加(P＜0.05)，之后開始呈下降趨勢，但差異不顯著(P＞0.05)。

3 討論

卵黃囊期是魚類早期發(fā)育中的一個重要階段，是魚類由內(nèi)源性營養(yǎng)向外源性營養(yǎng)轉(zhuǎn)化的一個關(guān)鍵時期[10]。從更深更廣的角度來研究卵和幼體營養(yǎng)成分的變化，可間接了解能量轉(zhuǎn)移和利用過程，這對滿足幼魚營養(yǎng)需求，提高其成活率有很大理論指導意義。

3.1 黃鱔胚胎發(fā)育期和仔魚發(fā)育過程中機體水分含量的變化

黃鱔胚胎剛受精時，卵為淺黃色或橙黃色的正圓形卵，沉性，比一般魚類的大。外層包有無色半透明的卵膜，卵黃均勻[11]。受精卵在發(fā)育階段，水分變化不大，但在仔魚發(fā)育期從第1 d開始，含水量急劇下降，由胚胎期第1 d的83.28%降到仔魚出膜第1 d的71.28%，之后緩慢回升。說明仔魚孵化過程中卵膜破裂時，卵膜細胞內(nèi)非胚胎水分流出導致水分大幅減少。而仔魚饑餓期間，細胞外間隙增加，細胞體積縮小，含水量百分比有所提高，而實際含水量下降[12]。當水產(chǎn)動物處于饑餓狀態(tài)時，貯存于體內(nèi)的脂肪被水解成甘油和游離脂肪酸，并釋放入血液被運送全身各組織氧化利用。脂肪酸是機體的主要功能物質(zhì)，在有氧條件下徹底氧化為水和二氧化碳，并釋放大量的能量，以ATP的形式供機體利用[13]。因此，隨著動物能源物質(zhì)的不斷消耗，動物體的含水量會逐漸上升，這也許是導致仔魚后期含水量上升的重要因素。機體各種營養(yǎng)成分的變化處于動態(tài)平衡，而水分是維持機體正常新陳代謝的必要條件，所以仔魚后期水分含量會逐漸升高直到與初始含水量相差不大。若不考慮水分的影響，蛋白質(zhì)和脂肪總體上變化范圍較小，說明水分在營養(yǎng)成分的變化過程中起主要作用。

依據(jù)魚卵的比重和水的比重關(guān)系，可以把魚類的卵分為浮性卵和沉性卵。殷名稱（1993）指出，魚類卵的浮性主要取決于卵（黃）內(nèi)水分的含量，脂肪僅是營養(yǎng)物質(zhì)存在的一種形式，浮性卵的含水量達90%～92%，而典型沉性卵含水量為60%～75%[14]。由本試驗可知，黃鱔受精卵的含水量在整個發(fā)育期間保持在83.28%～83.71%，介于典型沉性卵和浮性卵之間。

3.2 黃鱔胚胎發(fā)育期和仔魚發(fā)育過程中機體蛋白質(zhì)和脂肪含量的變化

黃鱔胚胎發(fā)育期的蛋白質(zhì)含量有不同程度的上升，這可歸因于胚胎發(fā)育期隨著卵裂的進行，細胞數(shù)目增多，組成各個細胞的細胞膜的脂肪和蛋白質(zhì)的含量也相應(yīng)增加[14]。熊傳喜（1995）對建鯉胚胎和仔魚機體蛋白質(zhì)和脂肪含量的測定結(jié)果顯示，受精卵發(fā)育階段，蛋白質(zhì)呈現(xiàn)明顯下降趨勢，而脂肪含量基本不變；仔魚發(fā)育初期，脂肪和蛋白質(zhì)含量均下降[5]。但本試驗測定發(fā)現(xiàn)，胚胎發(fā)育期蛋白質(zhì)和脂肪含量無顯著變化。但仔魚孵出后，蛋白質(zhì)和脂肪含量都有不同程度的下降，仔魚發(fā)育到20 d時，蛋白質(zhì)和脂肪含量相比胚胎發(fā)育初期分別下降了28%和57.8%。在初孵仔魚階段，蛋白質(zhì)和脂肪占濕重比均呈現(xiàn)下降趨勢，但蛋白質(zhì)含量占干重比上升，脂肪占干重比下降；仔魚發(fā)育期5 d之后（卵黃囊消失）蛋白質(zhì)質(zhì)量保持穩(wěn)定，脂肪質(zhì)量呈下降趨勢。試驗還發(fā)現(xiàn)仔魚發(fā)育期間，脂肪和蛋白質(zhì)均消耗很大，這可能是由于仔魚發(fā)育過程中生命活動和運動的能量消耗。脂肪和蛋白質(zhì)的這種變化規(guī)律以及它們間的能量代謝，提示在投喂開口仔魚時，應(yīng)考慮餌料中蛋白質(zhì)和脂肪的含量是否充足，以滿足仔魚正常生長發(fā)育的需要。

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