加州鱸對15種飼料原料體外消化率的測定

汪福保 殷文斌 周 萌 朱旺明 羅祖征 楊獻秀

加州鱸學名大口黑鱸（Micropterus salmoides），屬鱸形目、太陽魚科、黑鱸屬，是一種原產(chǎn)于美國加利福尼亞州的肉食性魚類。1984年引入我國，因其肉嫩味美深受廣大消費者的喜愛，素有“淡水石斑”之稱，已成為我國淡水養(yǎng)殖的一種重要經(jīng)濟魚類。目前，加州鱸大部分尚以冰鮮小雜魚作為餌料，這不僅易造成資源浪費和環(huán)境污染，還帶來病害的流行。能滿足加州鱸生長需要的人工配合飼料研制尚未完全成熟，加州鱸對各種飼料原料消化率的數(shù)據(jù)還十分有限（錢國英，2001；王廣軍等，2008；NRC，2011）。體內(nèi)消化率能夠比較準確地對飼料營養(yǎng)價值進行評定，但往往耗時、費力，很難在短時間內(nèi)對大量的飼料樣品進行評價分析，水產(chǎn)動物還存在糞便收集困難的問題。而體外消化率具簡單、快捷、重復性好等特點，能為不同飼料原料的比較提供可靠的依據(jù)，在飼料營養(yǎng)價值評定方面占有重要地位（Bassompierre等，1997；Chong等，2002；張鐵鷹等，2005）。基于“體外消化率高的原料在魚體內(nèi)也應具有較高的消化率”和“由具有較高消化率的原料為主組成的配合飼料對養(yǎng)殖魚類也應具有較高的消化率，其養(yǎng)殖效果較佳”的原則（羅莉等，1997），我們測定了加州鱸對15種飼料原料的體外消化率，為設計優(yōu)質、高效的加州鱸飼料配方提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗魚

加州鱸購自廣州市天河區(qū)長湴市場，體重(357±28)g。

1.2 飼料原料

選用魚粉、豆粕等11種常見飼料原料和蘇氨酸蛋白粉（生產(chǎn)蘇氨酸的副產(chǎn)物）、酵母培養(yǎng)物（以玉米、麩皮等為發(fā)酵底物，經(jīng)酵母菌發(fā)酵得到）、酵母膏（啤酒酵母泥經(jīng)生物破壁產(chǎn)品，由廣州市信豚水產(chǎn)技術有限公司提供）、破壁酵母（商品名為信豚1號，由廣州市信豚水產(chǎn)技術有限公司提供）等4種新型原料為試驗對象。固體原料經(jīng)粉碎機粉碎后過80目標準篩。采用常規(guī)方法測定各原料的干物質和粗蛋白含量，見表1。

表1 待測原料的營養(yǎng)組成（%）

1.3 試驗方法

1.3.1 粗酶液的制備

參照葉元土等（2003）的方法進行。將活魚置于冰盤上，常規(guī)解剖取出魚的胃和腸道，去掉胃腸道表面的脂肪及內(nèi)容物。用濾紙吸干表面水分后分別稱取胃和腸道的重量，分別按胃重量的10倍體積（W/V）加入預冷的0.2 mol/l的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液（4℃，pH值 2.2），腸重量的 10倍體積（W/V）加入預冷的0.2 mol/l的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液（4℃，pH值7.4），用玻璃勻漿器在冰浴中勻漿。勻漿液在4℃、4 000 r/min，離心20 min，取上清液作為粗酶提取液，-20℃冷凍保存于冰箱中備用。

1.3.2 體外消化率的測定

準確稱量飼料原料樣品0.500 0 g放入50 ml帶蓋離心管中，加入0.2 mol/l、pH值2.2的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液和加州鱸胃組織酶液各10 ml，然后放入30℃恒溫振蕩水浴鍋中以80次/min振搖酶解14 h。按放入順序取下離心管，用10%NaOH溶液調(diào)pH值至中性，然后加入0.2 mol/l、pH值7.4的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖溶液和加州鱸腸道組織酶液各10 ml繼續(xù)在恒溫水浴鍋中酶解5 h（30℃，80次/min）。酶解完畢后取離心管置于離心機中離心15 min（4℃，5 000 r/min）。用注射器小心吸出上層清液，沉淀，再用蒸餾水清洗兩次、離心除去上清液，將沉淀連離心管一起于105℃烘干至恒重，用凱式定氮法測定濾渣中粗蛋白質的含量。每個樣品設置3個平行。

1.4 計算公式

干物質消化率 (%)=[(飼料樣品質量×樣品干物質含量－消化后殘渣質量)/(飼料樣品質量×樣品干物質含量)]×100；

粗蛋白消化率（%）=[(飼料樣品粗蛋白含量×樣品干物質含量－消化后殘渣質量)/(飼料樣品粗蛋白含量×樣品干物質含量)]×100。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法

用統(tǒng)計軟件SPSS 17.0進行數(shù)據(jù)的分析統(tǒng)計。經(jīng)過單因素方差分析，使用Duncan's多重比較法分析數(shù)據(jù)之間的差異顯著性，使用SPSS直線回歸進行兩組數(shù)據(jù)間的回歸分析，并進行雙變量相關性分析。差異顯著水平為P＜0.05，極顯著水平為P＜0.01。

2 結果與分析

加州鱸對15種飼料原料干物質和粗蛋白的體外消化率見表2。

表2 加州鱸對15種飼料原料干物質和粗蛋白的體外消化率(%)

將15種飼料原料分為4類：動物性蛋白、植物餅粕、玉米大豆加工副產(chǎn)物、發(fā)酵副產(chǎn)物。除個別原料外，總的來看，加州鱸對4類原料的利用效果為：動物性蛋白＞發(fā)酵副產(chǎn)物＞植物餅粕＞玉米大豆加工副產(chǎn)物。動物性蛋白中秘魯魚粉和血粉均有較高的體外消化率，植物餅粕中以豆粕和花生麩效果為佳，玉米大豆加工副產(chǎn)物中以玉米蛋白粉為佳，發(fā)酵副產(chǎn)物中以蘇氨酸蛋白粉、酵母膏和破壁酵母為佳。菜粕、棉粕、玉米、大豆?jié)饪s蛋白、DDGS、酵母培養(yǎng)物、啤酒酵母粉利用效果相對較差。關于加州鱸對飼料原料體內(nèi)消化率的數(shù)據(jù)十分有限，且不同的作者之間難有可比性，故比較了同為鱸形目的銀鱸對相同飼料原料的粗蛋白體內(nèi)消化率（見表3），發(fā)現(xiàn)二者之間具有極顯著的相關性（R2=0.87），噴干血粉、秘魯魚粉、豆粕粗蛋白消化率均較高，棉粕、菜粕、啤酒酵母粉消化率均較低。

表3 加州鱸對部分原料粗蛋白體外消化率與銀鱸體內(nèi)消化率的比較

3 討論

加州鱸屬于典型的肉食性魚類，胃發(fā)達、腸道短，胃腸道中的蛋白酶活性較高，而淀粉酶活性很弱（關勝軍等，2006、2007）。這些特征決定了它對高淀粉、纖維類的原料利用較差，我們的研究結果也證實了這一點。加州鱸對玉米、DDGS、菜粕、棉粕等纖維含量高的原料利用率偏低。啤酒酵母粉因具有較厚的細胞壁，消化酶不易進入，很多研究表明魚類對其消化利用率也低（錢國英，2001；NRC，2011）。而啤酒酵母粉經(jīng)過破壁后得到的酵母膏和破壁酵母的蛋白質消化率得到顯著提高，甚至超過了秘魯魚粉，是加州鱸良好的蛋白質來源。

噴干血粉因工藝改進，比普通的滾筒干燥血粉具有更好的消化率(任澤林等，2001)，可作為加州鱸的飼料原料，考慮其氨基酸平衡性差和適口性問題，添加量不宜過大。4種植物餅粕中，以豆粕和花生麩消化利用率為佳，本試驗未考慮植物餅粕中抗營養(yǎng)因子和毒素的影響，在選用時應加以注意。玉米大豆加工副產(chǎn)物中以玉米蛋白粉消化利用率為佳，但應注意摻假的影響。玉米、DDGS干物質和粗蛋白的消化率均較低，用作加州鱸飼料原料時應慎重，以免增加消化道的負擔。大豆?jié)饪s蛋白抗營養(yǎng)因子低，但在本試驗中其體外消化率不及豆粕。發(fā)酵副產(chǎn)物中蘇氨酸蛋白粉消化性能較好，但也存在氨基酸不平衡和適口性問題。4種酵母產(chǎn)品則宜選用消化利用率高的破壁酵母和酵母膏。

在試驗方法上，本試驗采用“胃-腸”兩步法，原料先經(jīng)胃酶液消化，再經(jīng)腸酶液消化，盡可能地模擬加州鱸體內(nèi)的消化過程，所得到的蛋白質體外消化率和體內(nèi)消化率存在顯著相關性，證明該方法可以用來預測多種飼料原料在加州鱸體內(nèi)的消化率，對飼料原料營養(yǎng)價值進行評定。同時該方法簡單、快速、重復性好，可作為飼料企業(yè)評價原料營養(yǎng)價值的一個手段。需要指出的是，該方法與魚體內(nèi)的實際情況相比仍存在許多不足：消化產(chǎn)物不能及時被去除，不斷積累對酶促反應產(chǎn)生反饋抑制；將溶于水的養(yǎng)分認為是已消化的養(yǎng)分，事實并非如此（張鐵鷹等，2005），例如，噴干血粉水溶性好，測得的體外消化率也很高。各種原因導致體外消化率一般低于體內(nèi)消化率。因此本試驗得出的結果只是評價各個原料之間的相對利用率，作為原料選擇的依據(jù)之一，不能直接作為真實消化率使用。相比畜禽，水產(chǎn)動物體外消化模擬技術的研究較少，也需進一步系統(tǒng)研究，以確定真正適合于水產(chǎn)動物體外消化的模擬技術和操作方法。4 結論

①秘魯魚粉、噴干血粉、豆粕、花生麩、玉米蛋白粉、酵母膏、破壁酵母適合作為加州鱸的飼料原料；

②玉米、DDGS干物質和粗蛋白的消化率很低，選作加州鱸飼料原料時應慎重；

③啤酒酵母粉經(jīng)破壁處理后干物質和蛋白質的消化利用率顯著提高；

④“胃-腸”兩步法得到體外消化率法與體內(nèi)消化率具有極顯著的相關性，可作為魚類飼料原料營養(yǎng)價值的評價手段。

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