肝康Ⅱ號對乙型肝炎肝硬化患者血漿硫化氫和一氧化氮水平的影響

李 芳 雷飛飛 譚華炳 李云靜 李儒貴 李金科 占國清

肝康Ⅱ號是我科治療病毒性肝病的經(jīng)驗方。在動物實驗和臨床試驗中證明其在治療慢性乙型肝炎[1,2]、慢性肝衰竭[3,4]和肝硬化方面療效確切，但機理有待進一步明確。氣體信號分子一氧化氮（Nitric oxide,NO）參與肝硬化的發(fā)生、發(fā)展過程。近年發(fā)現(xiàn)，硫化氫（Hydrogen sulfide，H2S）也參與了肝硬化的發(fā)病過程[5～7]。本研究試圖觀察肝康Ⅱ號治療肝硬化患者對血漿H2S和NO的影響。

資料與方法

一、病例來源 選擇2010年6月至2011年4月我科住院的乙型肝炎肝硬化患者64例，男46例，女18例，平均年齡47±7歲。符合《病毒性肝炎防治方案》的診斷標準[8]。排除原發(fā)性心、肺、腎疾病、腫瘤、自身免疫性肝病、藥物性肝病和酒精性肝病。排除甲型、丙型、丁型和戊型肝炎。另選同期在我院體檢中心健康體檢的正常人（無血脂、血糖和肝功能異常，病原學檢測陰性，無心、肝、腎、肺、神經(jīng)系統(tǒng)病史）30例，男21例，女9例，平均年齡46±8歲。

二、治療方法 本研究得到我院倫理委員會審查通過[9]。采用數(shù)字表法隨機將患者分為治療組（32例）和對照組（32例）。對照組給予阿德福韋酯（代丁，天津藥物研究院藥業(yè)有限責任公司）10mg，每日1次。還原性谷胱甘肽（阿拓莫蘭，重慶藥友制藥有限責任公司）1.8克加入5%葡萄糖注射液150ml中靜脈滴注，復方甘草酸苷單胺S 160mg加入5%葡萄糖注射液150ml中靜脈滴注，每日1次。治療組在對照組治療的基礎上，給予肝康Ⅱ號（基礎方：赤芍60g，丹參30g，郁金 20g，葛根 20g，全括簍 30g，三棱 20g，獲術 20g，紅花 20g，炙黃芪 20g，大黃 10g（后下），重樓 10g。脅痛加延胡索，腹脹加枳殼，納差加神曲，水腫加大腹皮、澤瀉）每日1劑，采用自動煎藥機煎煮，200ml口服，每日3次。兩組療程均為4周。

三、血清檢測 采用硝酸還原法檢測NO水平（試劑購自南京建成科技有限公司）；采用去蛋白法[10]檢測H2S水平（檢測的相關設備及試劑由北京大學生理學系提供）；采用自動生化分析儀檢測血生化指標；采用法國STA compact全自動血凝儀檢測凝血酶原活動度（PTA）。

四、統(tǒng)計學處理 應用SPSS10.0 for windows軟件，計量資料以表示，組間均數(shù)比較采用t檢驗，P＜0.05認為有統(tǒng)計學意義。

結(jié)果

一、治療4周后各組患者肝功能的變化 見表1。

表1 兩組患者治療前后肝功能指標（）變化的比較

表1 兩組患者治療前后肝功能指標（）變化的比較

與對照組比，①P＜0.01

ALT（U/L） TBIL（μmol/L） ALB（g/L） PTA（%）治療組（n=32） 治療前 112.67±12.22 59.98±12.11 28.45±2.38 65.26±7.25治療后 59.77±8.84 32.34±7.22① 32.14±2.80① 73.85±8.56對照組（n=32） 治療前 115.45±16.25 61.24±11.65 29.06±2.56 64.92±7.65治療后 65.89±7.22 40.99±6.34 30.25±2.72 68.15±8.02

二、治療4周后兩組患者血清H2S和NO的變化 見表2。

表2 各組人群血清H2S和NO（）的比較

表2 各組人群血清H2S和NO（）的比較

與對照組比，①P＜0.05

H2S（μmmol/L） NO（μmmol/L）治療組（n=32） 治療前 15.45±2.43 62.22±6.09治療后 22.12±3.12① 44.78±5.12①對照組（n=32） 治療前 15.66±2.50 62.45±6.23治療后 19.01±2.98 49.23±3.97正常組（n=30） 29.13±4.47 29.23±3.97

討論

內(nèi)源性H2S是體內(nèi)含硫氨基酸如蛋氨酸、半胱氨酸、同型半胱氨酸等在5'-磷酸吡哆醛依賴酶[包括胱硫醚 -β- 合成酶（cystathionine-β-synthase，CBS）、胱硫醚 -γ- 裂解酶（cystathioniniyase，CSE）]作用下產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物[11]。肝臟是體內(nèi)H2S生成的主要部位，H2S能調(diào)節(jié)肝臟微循環(huán)功能。肝內(nèi)主要由肝星狀細胞（HSC）和肝細胞產(chǎn)生內(nèi)源性H2S。肝硬化時激活的HSC降低了CSE的表達活性，從而減少了H2S的合成[12]。本研究發(fā)現(xiàn)肝硬化患者H2S水平顯著下降，治療后H2S水平上升，說明肝康Ⅱ號治療后H2S水平得到恢復，肝組織微循環(huán)可能得到改善。

NO在一氧化氮合成酶（Nitrogen monoxide synzyme，NOS）的作用下形成，主要在肝實質(zhì)細胞和Kupffer細胞中產(chǎn)生。NOS依據(jù)是否需要鈣元素分為結(jié)構(gòu)型一氧化氮合成酶和誘導型一氧化氮合成酶（i-NOS）[13]。內(nèi)皮型一氧化氮合成酶形成的NO對肝臟有有益作用，而iNOS合成的NO對肝臟有毒性作用[14～16]。肝硬化患者血清NO水平明顯升高，且隨Child-Pugh分級水平的進展呈遞增性變化，說明血清NO水平與患者肝功能狀態(tài)有關[17]，在肝硬化時肝臟解毒功能下降和側(cè)支循環(huán)形成引起的腸源性內(nèi)毒素血癥，及其刺激產(chǎn)生的細胞因子如腫瘤壞死因子等可激活iNOS，可能是導致全身或局部NO水平升高的原因。本研究發(fā)現(xiàn)通過肝康Ⅱ號治療，患者血漿NO水平下降，肝功能得到改善。

NO在肝硬化大鼠中對H2S/CSE體系表現(xiàn)為抑制作用，它使機體可以在病理狀態(tài)下達到一種新的平衡，避免氣體信號分子之間呈現(xiàn)同向變化，是機體的一種自我保護的調(diào)節(jié)機制[18]。NO濃度的升高也是導致H2S/CSE抑制，并導致H2S濃度下降的原因之一。本研究發(fā)現(xiàn)通過肝康Ⅱ號治療，可以在升高H2S、降低NO的基礎上使H2S/CSE達到新的平衡。

肝康Ⅱ號重用赤芍為君藥，旨在清除血中瘀熱，使血脈通利，瘀熱得清。赤芍含芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、羥基芍藥苷、苯甲酰芍藥苷等單萜類化合物，總稱赤芍總苷[19]，赤芍能促進肝細胞DNA合成，促進肝細胞再生[20]。赤芍總苷具有一定的退黃降酶作用，其作用機制可能與增加膽汁分泌量，增強肝微粒體氧化酶的活力，增加肝臟解毒的能力，提高尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶（UDPG-T）的活性，促進膽紅素代謝等有關[21]。丹參為臣藥，養(yǎng)血活血而不助熱，祛瘀滯瘀血。郁金行氣解郁，涼血破瘀；葛根生津液，防止活血藥物傷陰；全瓜萎，生津、清熱、潤腸通便、通暢腑氣，利于中焦肝脾氣機調(diào)達；三棱、莪術、紅花，破血行氣，瘀滯得解；炙黃芪，益氣補中，調(diào)肝健脾，促肝脾功能恢復；大黃苦寒，入血分，即可清濕熱，又散瘀結(jié)。重樓為使，歸肝經(jīng)，清熱、涼肝。全方針對肝硬化的病機，取得有效提升H2S和降低NO濃度的治療效果。

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