生物磁效應(yīng)對金針菇胞外酶活性的影響1）

劉家霖，張杰，程功，張國珍，顏麗，張國財(cái)＊

（1.東北林業(yè)大學(xué)，哈爾濱150040；2.吉林省松原乾安林業(yè)局，松原131400；3.河北省女子職業(yè)技術(shù)學(xué)院，石家莊 050091）

金針菇〔Flammulina velutipes（Crut.：rF.）Sign.〕又名冬菇、樸菇，擔(dān)子菌亞門（Basidiomycotina），層菌綱（Hymennomycetes），傘菌目（Agaricales），口蘑科（Tricholoamtaceae），金錢菌屬。一般生長于榆樹、楓樹、楊樹、柳樹等的枯枝、樹樁上［1］。

金針菇具有較高的食、藥用價(jià)值。含有18種氨基酸，10g干菇中含氨基酸總量達(dá)20.9mg，人體必需氨基酸占總量的44%～50%，賴氨酸和精氨酸含量分別達(dá)1.024mg和1.231mg，高于一般菇類。由于精氨酸和賴氨酸對促進(jìn)兒童智力發(fā)育十分有益，所以金針菇也被稱為“增智菇”［2－3］。

植物纖維；金針菇子實(shí)體本含有的酸性和中性植物纖維可吸附膽汁酸鹽，調(diào)節(jié)體內(nèi)膽固醇代謝，降低血漿中膽固醇的含量，還可促進(jìn)胃腸蠕動，強(qiáng)化消化系統(tǒng)的功能。

功能蛋白質(zhì)；金針菇中含有多種功能性蛋白，真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白（FIP）具有抗癌、抗過敏、抗增殖、刺激免疫細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子和免疫調(diào)節(jié)功能。金針菇中提取到一種叫樸菇素（也叫火菇素）的堿性蛋白質(zhì)。其對小白鼠艾氏腹水瘤和肉瘤一有很好的抑制作用，

多糖；金針菇菌絲體能產(chǎn)生兩種具有很高抗腫瘤活性的多糖，試驗(yàn)表明有較強(qiáng)的抗腫瘤作用。其中的胞內(nèi)多糖對小鼠肉瘤一的抑制率高達(dá)96%，抗腫瘤活性比香菇多糖和云芝都要高。

人們在金針菇的品種選育、深層發(fā)酵、保健品開發(fā)利用等方面，有了較深入的研究。對激素、生長調(diào)節(jié)劑在金針菇應(yīng)用也有了初步探討［4－7］。但生物磁效應(yīng)用于金針菇未見報(bào)道，用磁處理水拌料栽培食用菌可增產(chǎn)10%～50%，磁處理水能使纖維素酶、脂酶、淀粉酶等酶的活性增加，加速了纖維素、脂肪、淀粉等養(yǎng)分的分解并提高這些養(yǎng)分的利用率。

1 材料和方法

1.1 材料

金針菇菌種：東北林業(yè)大學(xué)森保學(xué)科提供。

主要儀器：可控循環(huán)式生物磁化水處理器（本實(shí)驗(yàn)室專利產(chǎn)品ZL 2007 2 0117464.6）

1.2 磁處理水拌料栽培金針菇酶活性測定

1.2.1 栽培方法

培養(yǎng)料的基本組成：73%木屑、5%麥麩、1%蔗糖、1%碳酸鈣。

磁處理水：0.10T、0.25T、0.40T 的磁處理水（3次）。

用制好的磁處理水按料水之比拌入料中，做到均勻混合，培養(yǎng)料吸水一段時(shí)間后，用手緊握料，有1～2滴水從指縫滴出即可。培養(yǎng)料混勻裝入500mL罐頭瓶中。處理、對照各30個(gè)重復(fù)，壓實(shí)擦凈后，用非脫脂棉封口并用牛皮紙包扎好，置于121℃高壓蒸汽滅菌鍋滅菌30min后接種，置25℃恒溫箱中下培養(yǎng)。

1.2.2 栽培料粗酶液制備及酶活測定

粗酶液的制備：每隔5天取樣一瓶，用100mL pH4.8的0.2M乙酸鹽緩沖溶液浸提1h，用4層紗布過濾，濾液經(jīng)3500r／min離心10min。上清液為粗酶液。

其中愈創(chuàng)木酚氧化酶測定時(shí)粗酶液稀釋100倍，多酚氧化酶測定時(shí)粗酶液稀釋20倍。

1.2.2.1 漆酶活力測定［8－9］

先往試管中加入0.1MpH＝4.6的醋酸緩沖液3.4mL，再加入3.36M 的鄰聯(lián)甲苯胺0.5mL，再加入稀釋 10 倍 的 粗 酶 液 0.5mL，28℃ 保 溫 30min，測600nm處光密度（OD值）以煮沸滅活15min的酶液作對照（3個(gè)重復(fù)）。

1.2.2.2 多酚氧化物酶活力測定［10－11］

先往試管中加入0.05MpH＝6.0的磷酸鹽緩沖液2.0mL，再加入0.1mM 的鄰苯二酚2.0mL，再加稀釋10倍的粗酶液0.5mL，28℃保溫30min，測400nm處光密度（OD值）以煮沸滅活15min的酶液作對照（3個(gè)重復(fù)）。

1.2.2.3 愈創(chuàng)木酚氧化酶活力測定按文獻(xiàn)［12］的方法進(jìn)行

2 結(jié)果與分析

磁處理水拌料栽培金針菇過程中的金針菇胞外酶；漆酶、多酚氧化物酶、愈創(chuàng)木酚氧化酶的活性變化，測得數(shù)據(jù)及圖表如下。

2.1 漆酶活性

表1 栽培階段金針菇漆酶活性

圖1 栽培階段金針菇漆酶活性變化趨勢

從表1、圖1可知：0.25T處理組的漆酶活性要最高可達(dá)8.9U，比0.10T 處理組提高了4.49%，比0.40T處 理 組 提 高 了 13.48%，比 對 照 提 高 了11.25%。0.25T、0.10T處理組在13天便達(dá)到活性頂點(diǎn)。0.40T處理組和對照組到15天才達(dá)到活性頂點(diǎn)。

2.2 多酚氧化物酶活性

表2 栽培階段金針菇多酚氧化物酶活性

圖2 栽培階段多酚氧化物酶活性變化趨勢

從表2、圖2可知：0.25T處理組的多酚氧化物酶活性要最高可達(dá)14.4U，比0.10T處理組提高了6.25%，比0.40T處理組提高了11.11%，比對照提高了9.03%。0.25T、0.10T處理組在11天之前達(dá)到活性頂點(diǎn)。0.40T處理組、比對照13天之前達(dá)到活性頂點(diǎn)。

2.3 愈創(chuàng)木酚氧化酶活性

表3 栽培階段金針菇愈創(chuàng)木酚氧化酶活性

圖3 栽培階段愈創(chuàng)木酚氧化活性變化趨勢

從表3、圖3可知：0.25T處理組的愈創(chuàng)木酚氧化酶活性最高可達(dá)16.0U，比0.10T處理組提高了10.63%，比0.40T處理組提高了20.00%，比對照提高了17.50%。0.25T、0.10T處理組在11天之前達(dá)到活性頂點(diǎn)。0.40T處理組、對照組13天之前達(dá)到活性頂點(diǎn)。

3 結(jié)論與討論

3.1 本試驗(yàn)金針菇液體菌種的3（A、B、C）個(gè)配方，分別用0.10T、0.25T、0.40T的3個(gè)磁場強(qiáng)度、3次切割磁場的磁處理水（以下磁處理水均為3次切割磁場）制備金針菇液體菌種（玉米粉2%、蛋白胨1%、KH2PO40.3%、MgSO40.05%、可溶性淀粉3%）。在28℃、180r／min條件下進(jìn)行搖床培養(yǎng)。0.25T3次切割磁場的磁處理水可以應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐。

3.2 用0.25T磁處理水拌料培養(yǎng)料栽培，可以使漆酶多酚氧化物酶愈創(chuàng)木酚氧化酶活性提高于。漆酶、多酚氧化物酶是分解木質(zhì)素的酶，栽培階段較高漆酶、多酚氧化物酶活性可以使培養(yǎng)料中的木質(zhì)素得到充分利用，可以提高生物轉(zhuǎn)化率，提前結(jié)實(shí)。

3.3 利用磁處理水制備液體培養(yǎng)基，究竟是源于小分子團(tuán)水的哪些活性才對金針菇液體菌種產(chǎn)生影響，以及怎樣促進(jìn)金針菇生理生化方面的變化。這種影響有待于進(jìn)一步的研究。

3.4 磁處理水能使某些胞外酶等的活性增加，是否激活新的酶更有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

3.5 如何制備磁處理水，使之磁效應(yīng)更加顯著是我們今后重點(diǎn)探索的內(nèi)容。

［1］ 張雪岳.食用菌學(xué)［M］.重慶：重慶大學(xué)出版社，1984.

［2］ 魏華，謝俊杰，吳凌偉，等，金針菇的營養(yǎng)保健作用［J］.食用菌學(xué)報(bào)，1995，2（1）：59－64.

［3］ www.tjagri.net／zjxt／jinzhengu／link｝shiy／syindex.htm.

［4］ 何立敏.赤霉素（GA3）對金針菇產(chǎn)量的影響［J］.河池師專學(xué)報(bào)（理科），1994，14（3）：104－105，19.

［5］ 張占甲，陳坤明，李仲芳.激素與營養(yǎng)液配施對金針菇生育的影響［J］.食用菌，1994 16（2）：3－5.

［6］ 劉勝貴.植物生長調(diào)節(jié)劑對金針菇生長發(fā)育的影響［J］.懷化師專學(xué)報(bào)，1998 17（2）：44－46.

［7］ 趙士杰，李樹林.植物生長調(diào)節(jié)劑對金針菇菌絲生長的影響［J］.內(nèi)蒙古農(nóng)牧學(xué)院學(xué)報(bào)，1995，16（2）：111－114.

［8］ 馬立芝.杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)及貯藏工藝的研究［D］.北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005.

［9］ 馬立芝.杏鮑菇液體菌種培養(yǎng)條件的研究［J］.食用菌，2005（3）：19－21.

［10］ 曾榮鑒.碳源和氮源對平菇菌絲胞外酶的誘導(dǎo)作用［J］.食用菌，1992（1）：17－18.

［11］ 潘迎捷，陳明杰，汪昭月，等.香菇菌絲生長中多酚氧化酶的動態(tài)變化［J］.食用菌，1990（3）：4－6.

［12］ 潘裕添，林志超，林嬌芬，等.糙皮側(cè)耳裂殖過程中幾種碳源胞外酶系活性變化規(guī)律的研究［J］.漳州師范學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2005（4）：73－77.