五味草水提物與醇提物預處理對四氯化碳致小鼠急性肝損傷的保護作用

王向軍

鄭州大學第二附屬醫(yī)院藥劑科鄭州450014

(2011-05-18收稿 責任編輯 徐春燕)

五味草(Corydalis taliensis Franch.)別名地錦苗(《救荒本草》)、金鉤如意草(《滇南本草》)、水金鉤如意(《昆明民間常用草藥》)、斷腸草(《貴州中草藥名錄》)、水黃連、大理紫堇(《全國中草藥匯編》)和水如意(云南)等，為彝醫(yī)習用藥材，主要分布于四川、貴州和云南等地。五味草味苦，性寒，歸肺、肝經，具有祛風、清熱、止痛和清肝明目等作用［1］。《全國中草藥匯編》中記載，其可治肝炎、痢疾、腸炎、風濕骨痛、肺熱咳嗽、牙痛及急性結膜炎等。作者觀察了五味草的醇提物和水提物預處理對四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝損傷的保護作用，報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗藥材的來源及處理 五味草購于昆明市金碧路圣愛中醫(yī)館。取全草粉碎，過80目篩，用10倍量、體積分數(shù)95%乙醇回流提取3 h，再加8倍量、體積分數(shù)95%乙醇回流提取3 h，重復1次，合并3次濾液回收，得醇提物;另取五味草全草粉碎，過80目篩，用10倍量的蒸餾水同上法提取得水提物。

1.2 實驗動物、試劑與儀器 雄性昆明種小鼠，體質量(20±2)g，SPF級，許可證號:SYXK(豫)2007-0009，由鄭州大學實驗動物中心提供。適應性飼養(yǎng)1周后實驗。CCl4(天津市光復科技發(fā)展有限公司，分析純)，復方益肝靈片(吉林省博威藥業(yè)有限公司，批號:20091004)，谷丙轉氨酶(alanine aminotransferase，ALT)測定試劑盒、谷草轉氨酶(aspartate aminotransferase，AST)測定試劑盒、丙二醛(malondialdehyde，MDA)測定試劑盒、還原性谷胱甘肽(reduced glutathione hormone，GSH)測定試劑盒及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，山梨醇脫氫酶(sorbitol dehydrogenase，SDH)酶聯(lián)免疫試劑盒購自上海逸峰生物科技有限公司。Sartorius BP 211 D型電子分析天平(北京賽多利斯儀器有限公司)，TG16-WS高速離心機(湖南賽特湘儀離心機儀器有限公司)，UV-2409型紫外分光光度計(日本島津公司)，Olympus BX-50型顯微鏡，DQP-9010石蠟冷凍切片機(上海華巖儀器設備有限公司)，ZN17-2102A型全自動酶標儀(北京中諾遠東科技有限公司)。

1.3 動物分組及處理 昆明種小鼠108只，采用隨機數(shù)字表法分成9組，每組12只，分別為正常組(灌胃生理鹽水)，模型組(灌胃生理鹽水)，益肝靈組(益肝靈200 mg/kg)，五味草醇提物低、中、高劑量組(分別相當于生藥1、2、4 g/kg)，五味草水提物低、中、高劑量組(分別相當于生藥 1、2、4 g/kg)，均灌胃給藥7 d，末次給藥1 h后除正常組以外，各組小鼠按文獻［2］方法腹腔注射體積分數(shù) 0.2%的CCl4橄欖油溶液10 mL/kg，禁食不禁水。20 h后眼靜脈采血，常規(guī)離心后分離血清備用。同時迅速剖取肝臟，取小鼠肝左葉，－4℃下制備肝組織勻漿，備用。另取肝右葉行病理組織學檢查。

1.4 病理組織學檢查 將體積分數(shù)5%甲醛溶液固定的肝組織石蠟包埋、切片，HE染色，光鏡下觀察病理組織學改變。

1.5 血清ALT、AST和SDH活性及肝組織勻漿中MDA、GSH和SOD水平測定 按所購試劑盒說明進行操作。

1.6 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 13.0進行分析，應用單因素方差分析和LSD-t檢驗比較各組血清ALT、AST和 SDH活性及肝組織勻漿中 GSH、MDA和SOD水平的差異，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 各組小鼠肝組織病理觀察 光鏡下可見，正常組肝細胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，細胞核明顯，結構正常;模型組小鼠肝竇及中央靜脈明顯擴張，肝細胞明顯壞死，胞質連成一片，幾乎看不到細胞膜，周圍肝細胞發(fā)生不同程度的氣球樣變及嗜酸性變，大量炎性細胞浸潤;五味草醇提物高劑量組相對模型組肝細胞稍有改善，而五味草水提物高劑量組壞死細胞已部分修復，中央靜脈周圍只有少量的炎性細胞(圖1)。

圖1 各組小鼠肝組織病理變化(HE，×200)A:正常組;B:模型組;C:益肝靈組;D、E、F:分別為五味草醇提物低、中、高劑量組;G、H、I:分別為五味草水提物低、中、高劑量組。

2.2 各組小鼠血清ALT、AST和SDH活性比較見表1。

2.3 各組小鼠肝組織勻漿中GSH、MDA和SOD水平比較 見表2。

表1 各組小鼠血清ALT、AST和SDH活性比較(n=12) IU/L

表2 各組小鼠肝組織勻漿中GSH、MDA和SOD水平比較(n=12)

3 討論

肝臟氧化損傷是一種非常常見和嚴重的損傷，可加重機體的衰老和病變。目前，市場上有許多抗肝臟氧化損傷的產品，但是大多數(shù)都有不易提取獲得、純度不高、有效成分不明確、價格高等缺點，給應用帶來了很大的困難。開發(fā)一種來源廣、純度高、成分明確、效果好、安全的抗肝臟氧化損傷的產品非常迫切且具有重大的意義。

現(xiàn)有研究表明，在肝細胞的病變過程中，自由基、酶以及脂質過氧化反應等均發(fā)揮重要的作用。CCl4致小鼠肝損傷的機制［3］為:CCl4在肝內經微粒體細胞色素分解活化，形成三氯甲基自由基和氯自由基，導致肝微粒體的脂質過氧化。三氯甲基自由基通過破壞肝細胞及其內膜機構，損壞或殺死肝細胞，致使胞質中的酶如ALT、AST等溢至血中。因此，血清中ALT和AST活性可敏感地反映肝臟損害的程度。另有文獻［4］報道，血清SDH的活性增高與肝病發(fā)病的特異性高，可作為肝功能檢測的特異性指標。

該研究結果顯示，中、高劑量五味草水提物及高劑量五味草醇提物預處理可減輕CCl4所致的小鼠肝損傷，顯著降低 CCl4引起的血清 ALT、AST和SDH升高，降低損傷肝組織中MDA水平，升高GSH和SOD水平，顯著改善肝組織病理損傷，且以高劑量五味草水提物為佳。據(jù)此推測，五味草抗急性肝損傷作用可能與其清除自由基相關，具體作用機制有待于進一步研究。目前對五味草的研究還很少，應對其做進一步研究，以找到其明確的活性部位和單體。

［1］中華本草編委會.中華本草·第三卷［M］.上海:上海科學技術出版社，1999:641

［2］婁猛猛，李國玉，王航宇，等.四氯化碳致小鼠急性肝損傷模型的研究［J］.農墾醫(yī)學，2010，32(3):196

［3］戴志強，俞月桂，袁幸菊，等.氧代賴氨酸抗四氯化碳所致小鼠肝細胞損壞的超微結構觀察［J］.中國藥理學和毒理學雜志，1994，8(2):139

［4］黃伏生，周自剛，彭劍虹，等.一種特異性肝功能檢測指標的研究［J］.中國實驗診斷學，2004，8(4):379