石榴皮鞣質(zhì)對(duì)糖尿病大鼠血脂的影響及對(duì)肝臟的保護(hù)作用

譚紅軍 楊林 羅春華 張玉紅

石榴皮鞣質(zhì)對(duì)糖尿病大鼠血脂的影響及對(duì)肝臟的保護(hù)作用

譚紅軍 楊林 羅春華 張玉紅

目的初步觀察石榴皮鞣質(zhì)對(duì)糖尿病大鼠血脂的影響及肝臟的保護(hù)作用。方法采用腹腔注射鏈脲佐菌素(75mg/kg)的方法建立糖尿病大鼠模型，將成模大鼠隨機(jī)分為4組:模型組、石榴皮鞣質(zhì)低、中、高劑量組，另取正常大鼠作為空白對(duì)照組。連續(xù)給藥21天后，觀察石榴皮鞣質(zhì)對(duì)血糖血脂和肝功能的影響。結(jié)果與模型組比較，石榴皮鞣質(zhì)可顯著降低GLU、TG、TC、LDL－C濃度、ALT活性(P＜0．05，P＜0．01)，提高HDL－C濃度(P＜0．05，P＜0．01)。結(jié)論石榴皮鞣質(zhì)對(duì)糖尿病大鼠的肝臟具有保護(hù)作用，可降低血糖調(diào)節(jié)血脂。

石榴皮鞣質(zhì)糖尿病大鼠調(diào)節(jié)血糖血脂肝臟保護(hù)

糖尿病易導(dǎo)致糖、脂類、蛋白質(zhì)代謝異常，也可導(dǎo)致各種類型的肝臟損傷，常伴發(fā)心腦血管、腎、眼及神經(jīng)等多種并發(fā)癥，危害性大，其中脂代謝紊亂常與上述疾病合并，是重要的心腦血管危險(xiǎn)因素［1］。糾正血脂紊亂、控制血糖、保護(hù)肝臟功能對(duì)防治心腦血管疾病具有極其重要的價(jià)值。石榴皮是石榴的干燥果皮，性酸、味澀，具有澀腸、止血、殺蟲功效，近來(lái)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，石榴皮還具有抗菌、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、抗癌等多種功能，在治療糖尿病方面，石榴皮提取物具有明顯的降低空腹血糖和升高血清胰島素水平的作用，對(duì)α－淀粉酶和α－葡萄糖苷酶有不同程度的抑制作用［2～4］。但尚未見(jiàn)石榴皮鞣質(zhì)對(duì)糖尿病模型大鼠肝功能影響的研究報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)將初步觀察石榴皮鞣質(zhì)對(duì)糖尿病大鼠血糖血脂及肝功能的影響，探討石榴皮鞣質(zhì)對(duì)肝臟的保護(hù)作用。

材料與方法

1．材料:(1)動(dòng)物:雄性SD大鼠50只，體重250±10g，清潔級(jí)，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):SCXK(鄂)2004－0007。(2)藥物:石榴皮(武漢銀杏中藥飲片廠)，經(jīng)三峽職業(yè)技術(shù)學(xué)院楊先哲副主任藥師鑒定為石榴科石榴屬石榴(punica granatum L．)的果皮。稱取石榴皮約200g，粉碎，用10倍量的70%丙酮在室溫下浸漬約6h，再超聲20min，濾取濾液。其殘?jiān)僦貜?fù)以上操作3次，合并濾液并濃縮。濃縮液上HP－20柱，以不同濃度CH3OH洗脫，收集洗脫液冷凍干燥，即得石榴皮鞣質(zhì)粉末。(3)試劑:鏈脲佐菌素(美國(guó)Sigma公司，批號(hào):019K1022);葡萄糖(Glu)試劑盒(長(zhǎng)春匯力生物科技有限公司，批號(hào):YZB/吉0109－2009，A031)，甘油三酯(TG)試劑盒(上海德賽診斷系統(tǒng)有限公司，批號(hào): 60975006/1)，總膽固醇(TC)(上海德賽診斷系統(tǒng)有限公司，批號(hào):60931006/2)，HDL－C(上海德賽診斷系統(tǒng)有限公司，60069246/1)，LDL－C(日本積水醫(yī)療株式會(huì)社，158RDF)，ALT(上海豐匯公司，20100406)。(4)儀器:穩(wěn)豪血糖儀及血糖試紙，強(qiáng)生(中國(guó))醫(yī)療器材有限公司;TDZ4－WS臺(tái)式低速自動(dòng)平衡離心機(jī)，湘儀離心機(jī)儀器有限公司;BT224半自動(dòng)生化分析儀，意大利BIOTECNICA公司;日本HITACHI7600－020全自動(dòng)生化分析儀。

2．方法:(1)動(dòng)物模型建立:采用腹腔注射鏈脲佐菌素的方法建立糖尿病大鼠模型。大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)6天，禁食不禁水12h，分別按75mg/kg劑量腹腔注射2%鏈脲佐菌素檸檬酸緩沖液1次。72h后尾靜脈取血測(cè)血糖，選取血糖濃度16.7mmol/L以上的大鼠為糖尿病成功模型。(2)分組:將造模成功的36只大鼠隨機(jī)分為4組，每組9只，分別為:模型組;石榴皮鞣質(zhì)低劑量(50mg/kg)治療組;中劑量(75mg/kg)治療組;高劑量(100mg/kg)治療組。另選9只正常大鼠作為空白對(duì)照組，共5組。(3)給藥:成模后每天上午灌胃給藥1次，空白對(duì)照組、模型組灌胃蒸餾水，各組連續(xù)灌胃21天，隨時(shí)觀察各組大鼠的一般生理狀況。(4)生化指標(biāo)測(cè)定:末次給藥前禁食不禁水12h，給藥1h后，麻醉，腹主動(dòng)脈采血，3000r/ min離心10min后取血清待測(cè)。血清ALT采用酶速率法，HDL－C、HDL－C采用免疫抑制直接法。

結(jié)果

1．對(duì)各組大鼠血清Glu濃度、ALT活性的影響:與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠血清Glu濃度、ALT活性顯著升高(P＜0．01);與模型組比較，石榴皮鞣質(zhì)低劑量組血清ALT活性顯著降低(P＜0．05)、中、高劑量組血清Glu濃度、ALT活性均顯著降低(P＜0．01)(表1)。

表1 石榴皮鞣質(zhì)對(duì)各組大鼠血清Glu、ALT的影響±s，n=9)

表1 石榴皮鞣質(zhì)對(duì)各組大鼠血清Glu、ALT的影響±s，n=9)

與空白對(duì)照組比較，△P＜0．01;與模型組比較，*P＜0．05、＊＊P＜0．01

組別Glu(mmol/L)ALT(U/L)空白對(duì)照組6．85±1．4745．44±8．70模型組19．80±2．32△96．11±11．87△低劑量組17．86±2．1481．78±15．71*中劑量組15．86±2．59＊＊76．11±14．43＊＊高劑量組13．94±1．76＊＊74．36±20．96＊＊

2．對(duì)各組大鼠血清TG、TC、HDL－C、LDL－C濃度的影響:與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠血清TG、TC、LDL－C濃度顯著升高(P＜0．01)，HDL－C濃度顯著降低(P＜0．01);與模型組比較，石榴皮鞣質(zhì)中劑量組血清TG、高劑量組血清TC濃度顯著降低(P＜0．05)，高劑量組血清TG、HDL－C濃度顯著降低(P＜0．01);中劑量組血清HDL－C濃度顯著升高(P＜0．05)，高劑量組血清HDL－C濃度顯著升高(P＜0．01)。與模型組比較，中、低劑量組大鼠血清TG、TC、LDL－C濃度均有所降低，低劑量組血清HDLC濃度有所增加，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表2)。

表2 石榴皮鞣質(zhì)對(duì)各組大鼠血清TG、TC、HDL－C、LDL－C的影響±s，n=9，mmol/L)

表2 石榴皮鞣質(zhì)對(duì)各組大鼠血清TG、TC、HDL－C、LDL－C的影響±s，n=9，mmol/L)

與空白對(duì)照組比較，△P＜0．01;與模型組比較，*P＜0．05、＊＊P＜0．01

TGTCHDL－CLDL－C空白對(duì)照組組別0．38±0．091．26±0．421．67±0．420．21±0．08模型組0．71±0．12△2．97±0．44△0．70±0．20△0．31±0．08△低劑量組0．64±0．112．82±0．610．98±0．290．29±0．07中劑量組0．60±0．12*2．67±0．751．04±0．21*0．28±0．09高劑量組0．50±0．10＊＊2．34±0．44*1．09±0．27＊＊0．21±0．05＊＊

討論

肝臟是糖、脂類、蛋白質(zhì)代謝、聯(lián)系、調(diào)節(jié)的核心器官，意義極其重要，糖尿病患者長(zhǎng)期的脂代謝紊亂，損傷肝功能，會(huì)引起載脂蛋白及磷脂合成減少、脂蛋白合成障礙，肝內(nèi)甘油三酯不能正常運(yùn)出，HDL亦常下降，導(dǎo)致脂肪肝。研究表明胰島素抵抗可能是脂肪肝形成的啟動(dòng)因素，而脂肪肝又加劇了胰島素抵抗，并誘導(dǎo)脂質(zhì)過(guò)氧化［5］。近年來(lái)認(rèn)為，大量自由基的產(chǎn)生和所導(dǎo)致的氧化應(yīng)激反應(yīng)是糖尿病及微血管并發(fā)癥的初始致病因子之一。Brownlee［6］提出，線粒體電子傳遞鏈過(guò)氧化物產(chǎn)生過(guò)量是高血糖高血脂誘導(dǎo)血管損傷的共同機(jī)制，微血管病變及微循環(huán)障礙，可累及各臟器(包括肝臟)缺血缺氧，肝細(xì)胞內(nèi)氧供減少、氧耗增加、酸中毒，磷酸化能力降低，ALT活性增加，甚至引起肝纖維化和肝硬化。石榴皮的主要有效成分為石榴皮鞣質(zhì)，占總重量的10．4%～21．3%，是一類結(jié)構(gòu)較復(fù)雜的多元酚類化合物。國(guó)外應(yīng)用化學(xué)發(fā)光技術(shù)，證明鞣質(zhì)還具有清除過(guò)氧化氫的作用，對(duì)羥自由基和超氧陰離子自由基均具有較好的清除作用［7，8］。本課題的另一部分工作發(fā)現(xiàn)石榴皮鞣質(zhì)在糖尿病模型大鼠體內(nèi)具有清除自由基的抗氧化作用。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，石榴皮鞣質(zhì)可以降低ALT活性，改善肝功能，降低血糖，調(diào)節(jié)血脂。其對(duì)肝臟的保護(hù)作用可能與其酚羥基結(jié)構(gòu)的還原性有關(guān)，機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

1小田原野人．脂代謝［J］．日本醫(yī)學(xué)介紹，2007，28:837

2Khalil E．Antidabetic effect of an aqueous extract of pomegranate(Punica granatum L．)peels in normal and alloxan diabetic rats［J］．The Egyptian Journal of Hospital Medicine，2004，16:92－99

3Jurenka JS．Therapeutic applications of pomegranate(punica granatum L．):a review［J］．Altern Med Rev，2008，13(2):128

4謝貞建，范玨，唐鵬程，等．石榴皮提取物的酶抑制作用研究［J］．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37(7):2829

5Samuel VT，Liu ZX，Qu X，et al．Mechanism of hepatic insulin resistance in non－alcoholic fatty liver disease［J］．J Biol Chem，2004，279 (31):32345－32353

6Brownlee M．The pathobiology of diabetic complication:a unifying mechanism［J］．Diabetes，2005，54(6):1615－1625

7Fedeli D，Berrettini M，Gabryelak T，et al．The effect of some tannins on trout erythrocytes exposed to oxidative stress［J］．Mutation Research，2004，6(8):89－96

8周本宏，王慧媛，郭志磊，等．石榴皮鞣質(zhì)對(duì)羥自由基和超氧陰離子自由基的清除作用［J］．中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2008，28(17):1442－1445

(收稿:2011－10－10)

(修回:2011－10－21)

Effects of Tannin in Punica granatum L．on Blood Lipids and Its Protecting Liver Ability in Diabetic Rats．

Tan Hongjun，Yang Lin，Luo Chunhua，Zhang Yuhong．HuBei Three Gorges Polytechnic College of Medicine，Hubei 443002，China

ObjectiveTo study the effects of Tannin in Punica granatum L．on blood lipids and its protecting liver ability in diabeticrats．MethodsDiabetic rat models were induced by i．p．injection of streptozotocin(75mg/kg)．The diabetic rats were randomly divided into four groups:model group，tannin in punica granatum L．50，75，100mg/kg treatment Group．The blank control group was composed by normal rats．Serum alanine transaminase(ALT)activity of rats in each group，and glucose(GLU)，triglyceride(TG)，total cholesterol(TC)，high density lipoprotein－cholesterol(HDL－C)，low density lipoprotein－cholesterol(LDL－C)levels were studied 21 days after medication administration．ResultsCompared with model Group，Tannin in punica granatum L．can lower GLU，TG，TC，LDL－C concentration and ALT activity significantly(P＜0．05，P＜0．01)，increase HDL－C levels(P＜0．05，P＜0.01)．Conclusion Tannin in punica granatum L．has the function of good protection in liver of diabetic rats，It can lower blood glucose and regulate blood lipids．

Tannin in punica granatum L;Diabetic rat;Disturbing blood glucose and lipids;Protecting liver ability

湖北省宜昌市科技局立項(xiàng)課題資助項(xiàng)目(A09301－39)

443002宜昌，湖北三峽職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院(譚紅軍、楊林);443003三峽大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院(羅春華);443000湖北三峽職業(yè)技術(shù)學(xué)院附屬醫(yī)院(張玉紅)