血清中腫瘤相關(guān)鈣信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白2抗體對(duì)乳腺癌診斷及預(yù)后的臨床價(jià)值

鄭專 董學(xué)君

血清中腫瘤相關(guān)鈣信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白2抗體對(duì)乳腺癌診斷及預(yù)后的臨床價(jià)值

鄭專 董學(xué)君

目的探討乳腺癌患者血清中腫瘤相關(guān)鈣信號(hào)傳導(dǎo)蛋白2(TACSTD2)抗體表達(dá)水平及其在乳腺癌診斷及預(yù)后中的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法用表達(dá)TACSTD2的噬菌體包被空白的微孔板，ELISA法分別檢測(cè)100例乳腺癌患者、60例乳腺良性增生患者及60名健康體檢者血清中TACSTD2抗體含量。結(jié)果與健康對(duì)照組相比，乳腺癌患者血清中TACSTD2抗體含量明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．001);乳腺癌患者組血清中TACSTD2抗體含量亦明顯高于良性對(duì)照組(P＜0．001);但是已發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者與未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清中TACSTD2抗體含量相比較，無顯著性差異(P＞0．05)。結(jié)論血清TACSTD2抗體的表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生密切相關(guān)，可作為乳腺癌診斷的腫瘤標(biāo)志物。

TACSTD2乳腺癌腫瘤標(biāo)志物

本文利用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)100例乳腺癌患者血清中TACSTD2抗體的含量，探討血清中TACSTD2抗體在乳腺癌的診斷及預(yù)后中的臨床應(yīng)用價(jià)值。

對(duì)象與方法

1．對(duì)象:經(jīng)病理和影像學(xué)確診的乳腺癌患者共100例，年齡35～70歲，其中無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移64例。病理確診為乳腺良性疾病患者60例，年齡26～58歲，其中乳腺纖維瘤31例，乳腺囊腫29例。以上研究對(duì)象均為紹興市人民醫(yī)院住院患者。對(duì)照組為60名健康體檢者，年齡20～65歲，無任何慢性疾病。

2．標(biāo)本采集:均采空腹靜脈血5ml，4℃1800×g離心10min，收集血清并于－20℃保存待測(cè)。

3．TACSTD2抗體測(cè)定:將表達(dá)TACSTD2的T7噬菌體液1∶1000稀釋，并包被96孔酶標(biāo)板，4℃冰箱內(nèi)過夜，次日每孔加200μl 5%牛血清白蛋白(BSA)/磷酸鹽緩沖液(PBS)室溫封閉2h;用TBS－T(50mmol/L Tris－HCl pH 7．5，0．15mol/L NaCl，0．1%吐溫20)洗5次，每次3min，加入1∶100稀釋的血清樣本100μl，室溫孵育1h;用TBS－T洗5次，加入1∶10000稀釋的HRP偶聯(lián)的山羊抗人IgG100μl，室溫放置1h;用TBS－T洗5次，加入顯色液A、B各1滴，于37℃孵育15min，立即加入終止液1滴;酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)下檢測(cè)OD值。每孔反應(yīng)均重復(fù)3次，并設(shè)陰性對(duì)照和空白對(duì)照。按試劑說明書，Cutoff值=2．0×陰性對(duì)照平均OD值。

結(jié)果

1．TACSTD2抗體在乳腺癌、乳腺良性腫瘤患者及健康體檢女性血清中的表達(dá):乳腺癌患者血清中TACSTD2抗體水平高于健康對(duì)照組及乳腺良性疾病組患者(P＜0．001);而乳腺良性疾病組與健康對(duì)照組之間無顯著性差異(P=0．274，表1)。

2．乳腺癌患者血清中TACSTD2抗體水平與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系:出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者與未出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的患者TACSTD2抗體水平無顯著性差異(P= 0．162，表2)。

表2 血清TACSTD2抗體表達(dá)與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

討論

大量研究結(jié)果顯示，人體內(nèi)的腫瘤能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，生成抗腫瘤相關(guān)抗原(TTA)的自身抗體，其在腫瘤抗原表達(dá)量很低的時(shí)候就能檢測(cè)出。ADMON A和SHOSHAN SH提出，這些自身抗體可直接作用于體內(nèi)細(xì)胞表面的受體，活化和刺激細(xì)胞生長(zhǎng)的信號(hào)傳導(dǎo)通路，從而可能導(dǎo)致細(xì)胞無限制的增殖，甚至誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生［10］。這些異常的自身抗體有可能出現(xiàn)在腫瘤發(fā)生早期的某個(gè)階段，在上調(diào)促腫瘤受體的表達(dá)、增加腫瘤的惡性程度或者在導(dǎo)致腫瘤獲得潛在的轉(zhuǎn)移能力中起到關(guān)鍵性的作用，因此產(chǎn)生的自身抗體有可能作為腫瘤發(fā)生標(biāo)志物。

本研究顯示乳腺癌患者血清中TACSTD2抗體整體水平顯著高于正常對(duì)照組及乳腺良性疾病組，而乳腺良性疾病組的TACSTD2抗體水平與正常對(duì)照組無顯著性差異，表明該指標(biāo)可用于乳腺癌的輔助診斷。我們進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者與未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清中TACSTD2抗體含量相比，無顯著性差異(P＞0．05)，說明該指標(biāo)在監(jiān)測(cè)乳腺癌病情方面價(jià)值不大。

研究中我們還應(yīng)用了噬菌體展示技術(shù)，用噬菌體展示肽庫來源的模擬抗原替代TACSTD2，包被微孔板，用ELISA法檢測(cè)血清中的抗體［11］。其操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，檢測(cè)速度快，可以對(duì)乳腺癌進(jìn)行早期診斷，有利于腫瘤的早期治療，提高患者的生存率。

總而言之，檢測(cè)乳腺癌患者血清中的TACSTD2抗體，為腫瘤的診斷與治療提供一個(gè)新的有效思路。

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11董學(xué)君，李志國(guó)，楊明峰，等．乳腺癌新指標(biāo)的篩選及其臨床價(jià)值驗(yàn)證［J］．中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2011，28(11):2005－2006

(收稿:2011－12－31)

(修回:2012－02－16)

Diagnostic Value of Antibody Against Tumor－associated Calcium Signal Transducer 2 in Patients with Breast Cancer．

Zheng Zhuan，Dong Xuejun．Molecular Medicine Center，Shaoxing People's Hospital，Zhejiang 312000，China

ObjectiveTo evaluate the application value of antibody against tumor－associated calcium signal transducer 2 (TACSTD2)in the treatment effect monitoring in breast cancer．MethodsAntibody against TACSTD2 was determined by ELISA in breast cancer patients(n=100)，benign breast disease patients(n=60)and health controls(n=60)．ResultsThe level of antibody against TACSTD2 was significantly higher in breast cancer patients than that in health controls and in benign breast disease patients(P＜0．001)．However，there was no statistically significant difference between antibody against TACSTD2 in the breast cancer patients who had axillary lymph node metastasis and that in the breast cancer patients who had no axillary lymph node metastasis(P＞0．05)．ConclusionAntibody against TACSTD2 is helpful in the diagnosis of breast cancer．

TACSTD2;Breast neoplasms;Tumor markers

乳腺癌是危害婦女健康的主要惡性腫瘤之一。近年來，乳腺癌發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)，流行病學(xué)調(diào)查表明，女性25～35歲乳腺癌的發(fā)病率大幅增加，55～65歲為第2個(gè)發(fā)病高峰。在大中城市，乳腺癌已躍居女性惡性腫瘤的首位或第2位，成為“女性之?dāng)场?。檢測(cè)乳腺癌血清標(biāo)志物可以反映腫瘤的生物學(xué)特性，對(duì)輔助診斷、指導(dǎo)治療及判斷預(yù)后均有重要意義。腫瘤相關(guān)鈣信號(hào)傳導(dǎo)蛋白2(TACSTD2)在人類的角膜、胰腺、前列腺等器官中均有表達(dá)，并在正常的滋養(yǎng)層細(xì)胞、多層上皮細(xì)胞及上皮癌中高度表達(dá)［1～4］。TACSTD2參與多種細(xì)胞的增殖、凋亡相關(guān)基因和癌基因的轉(zhuǎn)錄。TACSTD2的表達(dá)與腫瘤侵襲及預(yù)后有關(guān)，已有研究報(bào)道，乳腺癌組織中TACSTD2的基因表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常乳腺組織，但是乳腺癌患者血清TACSTD2抗體含量是否高于正常人，TACSTD2抗體檢測(cè)能否作為檢測(cè)乳腺癌的標(biāo)志物之一，還有待進(jìn)一步研究［5～8］。

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科學(xué)研究基金資助項(xiàng)目(2009A208)

312000紹興市人民醫(yī)院分子醫(yī)學(xué)中心

董學(xué)君，電子信箱:dxj9666@163．com