食用油中3－氯－1，2－丙二醇酯檢測方法的研究進(jìn)展

張 蕊 謝 剛 張 艷 郝希成 王松雪

(國家糧食局科學(xué)研究院，北京 100037)

3－氯－1，2－丙二醇酯(3－MCPD酯)是3－氯丙醇與脂肪酸的酯化產(chǎn)物。1983年西班牙首次在鹽酸精煉苯胺污染的菜籽油中檢出3－MCPD酯［1］，但20余年未受到重視。隨著科技的發(fā)展和對食品安全的高度重視，近年來3－MCPD酯越來越引起科學(xué)家及政府的重視。已有研究表明，3－MCPD酯在胰脂酶作用下會釋放出3－MCPD［2］，而3－MCPD是公認(rèn)食品污染物，具有潛在致癌性。有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，未加熱和精煉的油脂中，沒有或只有微量3－MCPD酯(＜0.05 mg/kg)，而幾乎所有精煉油中3－MCPD酯含量顯著(0.2～20 mg/kg)［3］。3 － MCPD 酯成為繼反式脂肪酸之后油脂精煉過程中引入的又一潛在危害因子。

3－MCPD酯測定方法的研究已成為當(dāng)今食品安全檢測的一大熱點(diǎn)。各國專業(yè)組織，如，德國油脂學(xué)會(DGF)、歐盟聯(lián)合研究中心(JRC)等以及國內(nèi)外科研機(jī)構(gòu)都在進(jìn)行3－MCPD酯檢測方法的研究，近兩年來有大量相關(guān)報(bào)導(dǎo)。油脂中3－MCPD酯測定方法分為間接測定法和直接測定法。本文詳細(xì)介紹國內(nèi)外食用油中3－MCPD酯的各種檢測方法研究現(xiàn)狀，討論未來3－MCPD酯檢測技術(shù)的研究發(fā)展方向，為今后我國建立食用油中3－MCPD酯標(biāo)準(zhǔn)分析方法提供參考和依據(jù)。

1 間接測定法

目前油脂中3－MCPD酯測定主要采用間接法。理論上3－MCPD酯有3種化合物，分別為sn1－3－MCPD單酯、sn2－3－MCPD單酯和3－MCPD雙酯。間接法不直接測定各種3－MCPD酯(sn1－3－MCPD單酯、sn2－3－MCPD單酯和3－MCPD雙酯)的含量，而是通過酯交換將油脂中存在的各種3－MCPD酯轉(zhuǎn)化為游離態(tài)3－MCPD，測定3－MCDP的含量，即，以3－MCPD的含量表示3－MCPD酯的總量。通過間接法測得的3－MCPD含量，包括油脂中原有的游離

3－MCPD和由油脂中各種3－MCPD酯轉(zhuǎn)化的3－MCDP，但文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)在食用油中游離態(tài)3－MCPD幾乎可以忽略不計(jì)(＜20 μg/kg)［4］。

間接法測定3－MCPD酯總量的一般分析步驟(5步)為:(1)首先將食用油溶解于溶劑中，添加適量氘代同位素內(nèi)標(biāo);(2)然后在催化劑作用下，油中存在的各種3－MCPD酯與甲醇發(fā)生酯交換反應(yīng)，轉(zhuǎn)化為3－MCPD;(3)中和反應(yīng)物，鹽析，提取純化3－MCPD;(4)然后釋放的3－MCPD在衍生劑作用下衍生化;(5)最后用GC－MS檢測3－MCPD的含量，見圖1。已見報(bào)導(dǎo)的文獻(xiàn)中，各分析步驟使用過的試劑見表1。

表1 間接法各分析步驟中已報(bào)導(dǎo)過使用的試劑

圖1 間接法一般分析步驟

根據(jù)酯交換使用催化劑種類不同，間接法主要分為堿催化(如:NaOH、NaOCH3)間接法和酸催化(如:H2SO4)間接法。下面分別介紹這兩種方法的研究現(xiàn)狀。

1.1 堿催化間接法

有關(guān)堿催化間接法測定3－MCPD酯總量的研究報(bào)導(dǎo)較多，主要原因是常規(guī)堿催化間接法中，酯交換反應(yīng)時(shí)間短(幾分鐘)，省時(shí)。但若不嚴(yán)格控制關(guān)鍵操作點(diǎn)，可能產(chǎn)生額外或消除一部分3－MCPD，從而造成過高或過低評估3－MCPD酯總量，影響結(jié)果。

早期較成熟測定3－MCPD酯總量的堿催化間接法是由Weisshaar R［5］提出。100 mg油樣溶于500 μL溶劑，加入250 μL 3－MCPD－d5內(nèi)標(biāo)溶液。在0.5 mol/L甲醇鈉/甲醇溶液作用下，反應(yīng)10 min后，加入3 mL異己烷、100 μL冰醋酸和3 mL NaCl溶液(200 g/L)，棄去有機(jī)相，再加入3 mL異己烷，棄去有機(jī)相。向剩下水相中加入250 μL苯硼酸衍生化試劑，于80℃反應(yīng)20 min。冷卻至室溫后，加入3 mL己烷提取3－MCPD衍生物，最后用GC－MS檢測3－MCPD的含量。

隨著深入研究，Weisshaar R等［6］發(fā)現(xiàn)使用文獻(xiàn)［5］中報(bào)導(dǎo)的堿催化測定油脂中3－MCPD酯總量的方法存在缺陷，會過高估計(jì)3－MCPD酯總量。這一結(jié)論在2009—2010年歐盟委員會聯(lián)合研究中心(JRC)下屬的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與測量研究所(IRMM)組織的測定食用油脂中3－MCPD酯試驗(yàn)驗(yàn)證中得到證明［7］。報(bào)告中測得3－MCPD酯含量過高的試驗(yàn)多是采用文獻(xiàn)［5］中的堿催化方法。分析原因是，鹽析試劑是氯化鈉，其中的氯離子與油脂中存在的一些前驅(qū)物(如:縮水甘油)反應(yīng)生成了額外的 3－MCPD，從而引起結(jié)果偏高。在 Weisshaar R等［6］這次研究中，提出了一種前處理方法，100 mg油脂溶解在0.5 mL 己烷/叔丁基甲基醚(80∶20)，加入0.5 mL 1－丙醇/硫酸(100:0.5)，45℃超聲波水浴中反應(yīng)15 min。其中硫酸用于破壞油脂樣品中可能存在的縮水甘油及縮水甘油酯。油脂樣品經(jīng)過前處理后按照堿催化方法測定，所測得3－MCPD含量作為樣品“真”3－MCPD酯總量。德國油脂科學(xué)協(xié)會(DGF)在此研究基礎(chǔ)上形成了官方方法C－III 18(09)［8］。

測定油脂中3－MCPD酯總量的官方方法C－III 18(09)備受關(guān)注，很多研究者對其進(jìn)行了研究和改進(jìn)。

Naoki Kaze1等［9］在 DGF標(biāo)準(zhǔn)方法 C－III 18(09)方法基礎(chǔ)上，研究了溶劑的極性對3－MCPD衍生物從水相到有機(jī)相中提取率的影響。與己烷相比，當(dāng)使用丁醇、氯仿、乙酸乙酯提取時(shí)，回收率分別提高了(5.6 ±1.2)倍、(4.7 ±1.1)倍和(3.8 ±0.9)倍。其中丁醇極性強(qiáng)，但提取物中含雜質(zhì)較多，影響MS檢測器，且丁醇沸點(diǎn)高，不易濃縮，因此從實(shí)用出發(fā)，選擇氯仿、乙酸乙酯較為合適。通過實(shí)際樣品測試，證明使用氯仿、乙酸乙酯代替己烷可提高DGF標(biāo)準(zhǔn)方法C－III 18的定量準(zhǔn)確性。

Sjaak de Koning等［3］在DGF標(biāo)準(zhǔn)方法 C－III 18(09)方法基礎(chǔ)上，改進(jìn)了GC－MS分析，將大體積進(jìn)樣和GC×GC－TOFMS技術(shù)應(yīng)用于3－MCPD酯的分析，提高了方法的靈敏度。鹽析時(shí)用NaCl溶液的提取率是使用純水提取效率的5倍，可提高分析的靈敏度，但Cl－存在，會產(chǎn)生額外的3－MCPD，影響測試結(jié)果;不使用NaCl溶液進(jìn)行提取，可消除Cl－影響，但會損失靈敏度，大體積進(jìn)樣的應(yīng)用，解決了這一矛盾。大體積進(jìn)樣25 μL代替標(biāo)準(zhǔn)方法的1 μL，不僅彌補(bǔ)因不使用NaCl溶液而損失的靈敏度，同時(shí)還進(jìn)一步提高靈敏度。GC×GC的使用，可以消除基質(zhì)干擾，使目標(biāo)物質(zhì)更好的分離，同時(shí)也增加柱容量，改進(jìn)檢出限。此方法的檢出限為0.000 80 μg/g。TOFMS開放的離子源設(shè)計(jì)，連續(xù)100次分析，體系依然穩(wěn)定。

王力清等［10］在DGF標(biāo)準(zhǔn)方法C－III 18(09)基礎(chǔ)上，將三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜多重反應(yīng)監(jiān)測技術(shù)應(yīng)用于3－MCPD酯總量的分析。通過優(yōu)化質(zhì)譜分析條件，3－MCPD酯最低檢出限為20 μg/kg，回收率在80.3%～105.4%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差3.45%。

Naoki Kaze1等［11］采用 NMR 技術(shù)，研究發(fā)現(xiàn)，使用DGF標(biāo)準(zhǔn)方法C－III 18(09)時(shí)，3－MCPD和縮水甘油會發(fā)生雙向轉(zhuǎn)化。在酯交換步驟，3－MCPD會部分轉(zhuǎn)化為縮水甘油(37%)，而在衍生化步驟中，有氯化鈉存在的酸性條件下，縮水甘油又部分轉(zhuǎn)化為3－MCPD(＞70%)，因此，C－Ⅲ18(09)并不適用于測定含有縮水甘油酯的油脂樣品中3－MCPD酯總量和縮水甘油酯的含量。研究還表明，使用方法C－Ⅲ18(09)中B部分并不能完全去除試樣中縮水甘油和縮水甘油酯。

目前DGF標(biāo)準(zhǔn)方法 C－Ⅲ 18(09)［8］因存在一定問題，已于2011年6月作廢，但同時(shí)兩個(gè)新的DGF 標(biāo)準(zhǔn)方法 C － VI 17(10)［12］和 C － VI 18(10)［13］已頒布。在2010年DGF聯(lián)合試驗(yàn)中，一些數(shù)據(jù)表明使用DGF標(biāo)準(zhǔn)方法C－III 18(09)中B部分測定3－MCPD酯會過高。因此對C－III 18(09)進(jìn)行了改進(jìn)，形成了C－VI 17(10)，用于測定3－MCPD酯和縮水甘油酯的總和，不再用于3－MCPD酯總量的測定。C－VI 18(10)是Kuhlmann提出的方法，由兩部分組成。A部分，假設(shè)在室溫下沒有其他物質(zhì)與無機(jī)氯離子反應(yīng)生成3－MCPD，堿催化酯交換后經(jīng)PBA衍生，然后測定縮水甘油酯、3－MCPD酯及可能的游離3－MCPD的總和。B部分，測定3－MCPD酯及可能存在的游離3－MCPD。然后通過A部分和B部分來計(jì)算縮水甘油酯。

此外，關(guān)于堿催化間接法，科研工作者還展開了其他方面的研究。

瑞士通用公證行(SGS)德國公司 Kuhlmann［14］研究指出，在強(qiáng)堿條件下釋放出來3－MCPD極易轉(zhuǎn)化為縮水甘油，從而影響3－MCPD的測試結(jié)果，因此Kuhlmann對堿催化條件進(jìn)行了改進(jìn)。改進(jìn)后，酯化過程中釋放出的MCPD轉(zhuǎn)化為縮水甘油可以忽略。實(shí)驗(yàn)中，加標(biāo)樣品在緩和的堿催化條件下(即低濃度氫氧化鈉/甲醇)，于－25℃下反應(yīng)至少16 h，釋放出MCPD和縮水甘油，接著加入600 μL溴化鈉酸性溶液終止反應(yīng)，此時(shí)縮水甘油轉(zhuǎn)化成溴丙醇(MBPD)，然后加入苯硼酸(PBA)將生成的MCPD和MBPD衍生化，最后用GC－MS進(jìn)行分析。Kuhlmann采用此方法參加了德國聯(lián)邦風(fēng)險(xiǎn)評估機(jī)構(gòu)(BfR)組織的測定食用油脂中3－MCPD酯的能力驗(yàn)證，五個(gè)食用油樣品的測試結(jié)果的 z值在－0.62～+0.35之間，較為理想。Kuhlmann還使用3－氯－1，2－棕櫚酸甘油酯(PP－3－MCPD)作為參比物，添加到空白芝麻油中，對方法進(jìn)行驗(yàn)證。添加濃度范圍在0.56～31 mg/kg的 PP－3－MCPD(相當(dāng)于 0.1～5.7 mg/kg的3－MCPD)，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)系數(shù)R2為0.999 6，檢出限(LOD)為 0.050 mg/kg ，定量限(LOQ)為 0.100 mg/kg。

Karel Hrncirik等［15］研究了在堿催化條件下，鹽析試劑(氯化鈉和硫酸銨)及內(nèi)標(biāo)(3－MCPD－d5和PP－3－MCPD－d5)對間接法測定3－MCPD酯總量的影響。研究表明，堿催化酯交換條件下，3－MCPD的穩(wěn)定性差(只有40%左右的回收率)，易轉(zhuǎn)化為縮水甘油，影響方法的靈敏度。這與文獻(xiàn)［9］、文獻(xiàn)［11］提到的一致。發(fā)現(xiàn)使用硫酸銨時(shí)作為鹽析試劑，結(jié)果比較接近真值，而使用氯化鈉時(shí)，會過高評估油脂中3－MCPD酯的總量。這說明，在鹽析步驟時(shí)氯離子與油脂中存在的一些前驅(qū)物(如:縮水甘油)反應(yīng)生成了額外的3－MCPD。他們還發(fā)現(xiàn)，使用硫酸銨作為鹽析試劑，測定結(jié)果不受鹽析步驟中pH的影響，當(dāng)使用氯化鈉作為鹽析試劑時(shí)，鹽析步驟的pH對測定結(jié)果有很大的影響。當(dāng)pH值大于3時(shí)，與硫酸銨相比，使用氯化鈉鹽析測得的3－MCPD的量高出近20%;當(dāng)pH值小于3時(shí)，使用氯化鈉鹽析測得的3－MCPD的量高出近一倍。使用3－MCPD－d5作為內(nèi)標(biāo)，3－MCPD酯的測定結(jié)果會高出7%～15%，而使用PP－3－MCPD－d5作為內(nèi)標(biāo)，測定結(jié)果更加準(zhǔn)確。分析原因是內(nèi)標(biāo)PP－3－MCPD－d5與食用油中存在的主要3－MCPD酯(主要為3－MCPD雙酯)結(jié)構(gòu)更加相似。目前，在德國油脂學(xué)會(DGF)2011年頒布的用于分析油脂中3－MCPD酯的標(biāo)準(zhǔn)方法 C －VI 18(10)［13］已使用 PP －3－MCPD －d5作為內(nèi)標(biāo)。

1.2 酸催化間接法

已有文獻(xiàn)表明，酸催化間接法耐用性好，能提供更加可靠的3－MCPD酯總量的測量值，但常規(guī)酸催化酯交換反應(yīng)往往需要16 h，比較耗時(shí)［15］。

Veronica Divinova等［16］以3 －MCPD －d5為內(nèi)標(biāo)，使用GC－MS檢測3－MCPD酯。含有3－MCPD－d5的樣品，加入1.8 mL H2SO4/甲醇，40℃下反應(yīng)16 h。冷卻至室溫后，加入0.5 mL飽和NaHCO3溶液中和，55℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，殘留物溶解于2 mL 20%NaCl溶液中，衍生化，進(jìn) GC－MS進(jìn)行分析。食用油樣品，3－MCPD檢出限(LOD)和定量限(LOQ)分別是1.1 mg/kg 和3.3 mg/kg。

Weisshaar R［5］將甲醇鈉/甲醇堿催化方法與Veronica Divinova等［16］提出的 H2SO4/甲醇酸催化方法進(jìn)行了對比。使用兩種方法分別測定了10個(gè)樣品，包括甘油、單硬酯?；视?、兩個(gè)特級初榨橄欖油、精煉橄欖油以及這5個(gè)樣品對應(yīng)加入1%NaCl的樣品。結(jié)果表明，添加了1%NaCl的樣品，使用H2SO4/甲醇酸催化，會產(chǎn)生大量額外3－MCPD，此結(jié)論與文獻(xiàn)［17］一致。在試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)未添加NaCl的樣品，使用H2SO4/甲醇酸催化比使用甲醇鈉/甲醇催化所測得的3－MCPD值偏高，此結(jié)果與其他研究酸催化間接法報(bào)導(dǎo)［15，17－19］不一致。Weisshaar R 給出的原因是可能樣品中或試劑中存在痕量的氯離子。

Alessia Ermacora等［17］評價(jià)了酸催化間接法測定3－MCPD酯的方法靈敏度和耐用性，研究了氯離子和縮水甘油對結(jié)果的干擾。結(jié)果表明，在酸催化條件下，縮水甘油酯不會干擾3－MCPD的分析結(jié)果。指出只有當(dāng)氯離子添加量高出典型實(shí)際油品中氯離子含量(實(shí)際典型的油品中氯離子的含量一般少于10 mg/kg)一個(gè)數(shù)量級時(shí)，才表現(xiàn)出明顯的氯離子干擾。樣品分析之前通過使用去離子水萃取可消除氯離子的干擾。此外考察了酯交換時(shí)間(2～16 h)對3個(gè)樣品(精煉棕櫚油、加標(biāo)棕櫚原油、煎炸油)測定結(jié)果的影響，結(jié)果表明4～16 h的測定結(jié)果一致，沒有顯著差別。將酯交換時(shí)間從16 h改為4 h，沒有降低結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。他們也指出使用PP－3－MCPD－d5測定結(jié)果更加準(zhǔn)確，與文獻(xiàn)［15］一致。

R A Abd Razak等［18］基于德國聯(lián)邦風(fēng)險(xiǎn)評估機(jī)構(gòu)(BfR)的方法 BfR －008［20］(酸催化)上，評估了酯交換時(shí)間對結(jié)果的影響，并評價(jià)了方法的回收率。他們考慮到棕櫚油熔點(diǎn)高，可能需要更長酯化時(shí)間，考察了16 h、18 h、20 h的測定結(jié)果，結(jié)果表明18 h和20 h的測定結(jié)果沒有差別，最終酯化時(shí)間選擇了18 h。添加量在0.25～6.0 mg/kg范圍內(nèi)時(shí)，回收率在97.6%～107.9%之間。所測校準(zhǔn)曲線線性相關(guān)性R2≥0.999，方法檢出限(LOD)和定量限(LOQ)分別是 0.25 mg/kg 和0.5 mg/kg。

Hrncirik等［15］研究結(jié)果表明，堿催化間接法易受酯交換時(shí)間和其他因素(如:pH)的影響，最終影響方法的回收率、特異性和耐用性，而酸催化間接法避免了這個(gè)問題。因?yàn)樵谒岽呋g接法中，縮水甘油酯被不可逆轉(zhuǎn)的破壞(存在的縮水甘油酯在鹽析步驟中會轉(zhuǎn)化為額外的3－MCPD，從而干擾分析結(jié)果)。研究還表明在酸催化間接法中，鹽析試劑(硫酸銨、氯化鈉)的類型對測定結(jié)果沒有顯著影響。酸催化間接法表現(xiàn)出更好的耐用性。

Colin G等［19］對基于HFBI衍生劑的酸催化間接法進(jìn)行了單實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證，研究了方法的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、方法檢出限、線性范圍以及耐用性。與Veronica Divinova等［16］的酸催化間接法有所不同，在酯交換前增加了前處理過程(加標(biāo)油樣溶于正己烷/乙醚中，兩次加入5 mL去離子水，離心分離，棄去水層。有機(jī)層過無水硫酸鈉，旋轉(zhuǎn)除掉溶劑。最終溶于1 mL的THF，備用)，衍生化之前增加了Extrelut填料凈化步驟(因HFBI衍生劑對水分非常敏感，必須除去提取液中的水分)。酯交換過程與文獻(xiàn)［16］類似。結(jié)果表明，對于油脂，方法檢出限(LOD)為40 μg/kg，線性范圍為 40～10 000 μg/kg。當(dāng)樣品中分別添加游離3－MCPD、氯離子、甘油、縮水甘油丁酸酯時(shí)，對3－MCPD酯的回收率沒有顯著影響，方法選擇性(耐用性)好。Colin G等［19］使用此方法參加了2009年歐盟聯(lián)合研究中心(EC JRC)組織的測定食用油脂中3－MCPD酯的能力驗(yàn)證，2個(gè)食用油樣品測試z值分別為－0.1和+0.2之間，結(jié)果理想。

2 直接測定法

間接測定法只能測定油脂中3－MCPD酯的酯交換產(chǎn)物3－MCPD的總量，不能區(qū)分油脂中原有3－MCPD酯是單酯還是雙酯，這給3－MCPD酯安全性評估帶來問題。單酯和雙酯與腸道中胰脂酶的親和性不同［2］，在體內(nèi)的酶解速率、代謝途徑和毒性都不同。因此，開發(fā)一種能同時(shí)分析游離3－MCPD、3－MCPD單酯和3－MCPD雙酯的檢測方法是非常必要的。直接法是指不將油樣中的3－MCPD酯裂解為3－MCPD，而直接分析各3－MCPD酯的含量。目前關(guān)于直接法測定3－MCPD酯的方法正式期刊上發(fā)表相對較少。

Zuzana Zelinková等［21］測定了嬰兒食品中油脂各3－MCPD酯的含量。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)合成了各種3－MCPD酯標(biāo)準(zhǔn)品。油脂溶于1 mL四氫呋喃，添加內(nèi)標(biāo)P－3－MCPD－d5和PP－3－MCPD－d5，上硅膠柱，用溶劑洗脫。收集250～500 mL含有3－MCPD雙酯流出液以及625～850 mL含有3－MCPD單酯流出液，用于GC－MS分析。方法可用于分析1，2－二月桂酸－3－MCPD 酯、1，2－ 二豆蔻酸 －3－MCPD 酯、1，2－ 二棕櫚酸－3－MCPD酯等9種3－MCPD酯。1，2－二棕櫚酸－3－MCPD酯最低檢出限為180 μg/kg，RSD為0.7%，在0.52～20.801 μg/mL 范圍內(nèi)線性相關(guān)系數(shù)為0.999 5;棕櫚酸－3－MCPD單酯最低檢出限為200 μg/kg，RSD 為1.7%，在0.165～20.705 μg/mL 范圍內(nèi)線性相關(guān)系數(shù)為0.996。

Haines等［22］采 用 LC － TOFMS 直 接 測 定3－MCPD酯，不需要衍生、強(qiáng)烈的化學(xué)處理過程。首先在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)合成各種3－MCPD酯(如:3－氯－1，2－油酸甘油酯、3－氯 －1，2－亞油酸甘油酯、3－MCPD單酯混合物等)標(biāo)準(zhǔn)品，用于測定標(biāo)準(zhǔn)曲線。添加內(nèi)標(biāo)的樣品用HPLC的流動相B(100 mL 0.26 mmol醋酸鈉/800 mL亞甲基氯/100 mL乙腈)稀釋，進(jìn)樣5 μL，HPLC 流速為0.25 mL/min。高分辨率的TOFMS可以消除干擾，提高分析的靈敏度。它的結(jié)果與DGF所測結(jié)果并不一致。他們認(rèn)為是DGF中強(qiáng)烈的化學(xué)反應(yīng)步驟－酯交換和樣品制備，產(chǎn)生了額外的3－MCPD，從而造成過高估計(jì)3－MCPD酯的總量。但Haines等［22］開發(fā)的方法，也面臨一些問題。試驗(yàn)中為了得到有效ESI電離，檢測［M+Na+］加合物，向流動相中加入Na+。流動相中Na+會嚴(yán)重污染質(zhì)譜系統(tǒng)，儀器需要每天使用前清理，一周需要一次昂貴清理。ESI源一些器件易被腐蝕，需要經(jīng)常更換，如:不銹鋼的噴霧針需要一周更換一次(正常使用一年或更長時(shí)間更換一次)。這些都大大增加了儀器使用成本。

Eliska Moravcova等［23］開發(fā)了兩種直接分析各種3－MCPD酯的方法。一種是采用U－HPLC與高分辨率質(zhì)譜orbitrap MS聯(lián)用技術(shù)分析植物油中9種3－MCPD雙酯。為消除油脂干擾，經(jīng)過快速硅膠小柱從油脂樣品中分離出分析物，收集5～25 mL流出液用于分析3－MCPD雙酯。向油樣中添加2 mg/kg和10 mg/kg一系列的目標(biāo)檢測物標(biāo)物，回收率為89%～120%，RSD為5%～9%。方法最低檢出限為2～5 μg/kg(依據(jù)3－MCPD雙酯)。另一種是采用最新解析離子化技術(shù)－實(shí)時(shí)直接分析與高分辨率質(zhì)譜orbitrap MS聯(lián)用技術(shù)(DART－MS)對樣品中3－MCPD雙酯半定量檢測，4 min中內(nèi)可分析12個(gè)樣品，但最低檢出限高(40～118 μg/kg)。此外，因?yàn)?－MCPD單酯在ESI和DART條件下的離子化效率低，檢出限高(分別是365 ～420 μg/kg，2 996 ～4 300 μg/kg)，所以使用目前兩個(gè)方法檢測實(shí)際樣品中3－MCPD單酯不可能。

3 結(jié)語

無論是間接測定3－MCPD酯總量還是直接測定各3－MCPD酯含量都存在一定優(yōu)缺點(diǎn)。

間接法最大優(yōu)點(diǎn)是可操作性強(qiáng)［檢測儀器易得(GC－MS)、使用標(biāo)準(zhǔn)品品種少］，高靈敏度(因間接法是將所有的3－MCPD酯轉(zhuǎn)化為3－MCPD，最后測定總的3－MCPD)。校準(zhǔn)曲線只需一個(gè)內(nèi)標(biāo)(如:3－MCPD－d5或PP－3－MCPD －d5等)和一個(gè)參比物(如:3－MCPD或PP－3－MCPD等)，在市場可以買到相應(yīng)有效商業(yè)標(biāo)準(zhǔn)品，無需實(shí)驗(yàn)室自行合成，提高了實(shí)驗(yàn)室之間可比性。但另一方面間接法也存在缺點(diǎn)。間接法需要經(jīng)過一系列前處理過程，往往在酯交換、鹽析等環(huán)節(jié)可能產(chǎn)生額外或消除一部分3－MCPD，從而造成過高或過低評估3－MCPD酯總量，影響測試結(jié)果。堿催化間接法易受酯交換時(shí)間和其他因素(如:pH)影響，在操作過程中要嚴(yán)格控制關(guān)鍵點(diǎn);酸催化間接法耐用性更好，能提供更加可靠的3－MCPD酯總量測量值，但操作相對耗時(shí)。此外，間接法另一個(gè)缺點(diǎn)是無法區(qū)分3－MCPD、3－MCPD單酯和3－MCPD雙酯，只能以3－MCPD的含量來表示油脂中3－MCPD酯總量。

直接法最大優(yōu)點(diǎn)是專一性強(qiáng)，可以區(qū)分3－MCPD、3－MCPD單酯和3－MCPD雙酯。直接法無需復(fù)雜的化學(xué)前處理，可簡單處理直接進(jìn)樣，從而避免在酯交換、鹽析等過程中生成新物質(zhì)，影響結(jié)果的準(zhǔn)確。但直接法也存在缺點(diǎn)。首先，直接法需要系列3－MCPD酯參比物，而不同3－MCPD酯有效商業(yè)參比物非常有限。這些參比物不得不由實(shí)驗(yàn)室自行合成，從而帶來一個(gè)問題，參比物的純度會影響分析結(jié)果的可靠性。其次，相對于LC－MS，單個(gè)3－MCPD酯的GC－MS檢出限較高。LC－MS法中使用的質(zhì)譜檢測器多為高分辨率質(zhì)譜檢測器，增加了分析成本，給實(shí)驗(yàn)室日常應(yīng)用帶來了困難。此外，Haines等［22］提出的LC－TOFMS法中，質(zhì)譜系統(tǒng)污染問題需要解決;Eliska Moravcova等［23］提出ESI和DART法中需要解決3－MCPD單酯離子化效率低的問題。

由于間接法可操作性強(qiáng)，在一定時(shí)期內(nèi)3－MCPD酯測定方法仍將主要采用間接法。目前間接法研究主要限于各個(gè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的研究，缺乏系統(tǒng)嚴(yán)格評價(jià)。應(yīng)系統(tǒng)對比各種間接法，研究現(xiàn)有間接法的可靠性，找出主要關(guān)鍵點(diǎn)，選擇適合方法進(jìn)行協(xié)同驗(yàn)證試驗(yàn)，最后成為可靠的官方方法。直接法受有效商業(yè)參比物、儀器等限制，離實(shí)驗(yàn)室日常應(yīng)用還有一段距離。但直接測定3－MCPD、3－MCPD單酯和雙酯的含量，對于毒理學(xué)評價(jià)、形成機(jī)理研究有著重要的意義，因此直接法測定3－MCPD酯是未來發(fā)展趨勢。隨著將來有效參比物品種不斷增加、高端儀器的普及，直接法實(shí)驗(yàn)室日常應(yīng)用將成為可能。此外，在現(xiàn)有基礎(chǔ)上應(yīng)進(jìn)一步改進(jìn)間接法和直接法，比較間接法和直接法的一致性。

對于我國來說，油脂科研人員應(yīng)積極參與3－MCPD酯檢測方法研究，并在國外相對成熟3－MCPD酯檢測方法基礎(chǔ)上，建立一套適合我國國情、可推廣的3－MCPD酯標(biāo)準(zhǔn)檢測方法。

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