消毒液中4-氯代-3,5-二甲基苯酚的高效液相色譜分析

高志紅，楊 挺，李健玲

（1. 江南大學(xué) 化學(xué)與材料工程學(xué)院，江蘇 無錫 214122；2. 寧波市樂嘉化工有限公司，浙江 寧波 315040）

消毒液中4-氯代-3,5-二甲基苯酚的高效液相色譜分析

高志紅1，楊 挺1，李健玲2

（1. 江南大學(xué) 化學(xué)與材料工程學(xué)院，江蘇 無錫 214122；2. 寧波市樂嘉化工有限公司，浙江 寧波 315040）

研究消毒液中4-氯代-3,5-二甲基苯酚含量的測定方法。采用高效液相色譜法（HPLC），Hypersil C18柱（150×4.6mm，5mm），以甲醇-水-冰乙酸（100-99-1）為流動(dòng)相，流速1mL/min，檢測波長為285nm。在0.101～1.007mg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（r＝0.9992），平均回收率為96.19%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）小于1.10%。該方法簡便、快捷、準(zhǔn)確，可用于以4-氯代-3,5-二甲基苯酚為主有效成分的消毒液的質(zhì)量檢測和生產(chǎn)控制。

4-氯代-3,5-二甲基苯酚；高效液相色譜；消毒液；檢測

1. 前言

4-氯代-3,5-二甲基苯酚為無色至類白色針狀結(jié)晶物質(zhì)，具有微弱氣味，不易溶于水。其分子式為C8H9ClO，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

4-氯代-3,5-二甲基苯酚是《化妝品生產(chǎn)企業(yè)衛(wèi)生規(guī)范》（2007版）中規(guī)定允許使用的原料，在化妝品、洗滌用品中可以起防腐、殺菌、防霉作用。對于專用消毒產(chǎn)品，它屬鹵代酚類消毒劑，對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、真菌和霉菌具有強(qiáng)殺滅功效，且對皮膚、粘膜刺激小，環(huán)境中可降解[1]。因此，它廣泛用于皮膚、物體表面和環(huán)境地面的消毒[2-5]。

由于其所在基質(zhì)及含量存在差別，4-氯代-3,5-二甲基苯酚的檢測方法也各有不同。例如，對于海洋沉積物中酚類化合物的測定[6]、化妝品中做防腐殺菌劑時(shí)含量的測定[7,8]、水中微量含量的測定[9]、消毒液中含量的測定[10,11]、血漿和尿液中的檢測[12,13]，分別有液相色譜法[7,8,14]、薄層色譜法[10]、熒光分光光度法[15]等方法。

毒理學(xué)評價(jià)發(fā)現(xiàn)，含50g/L的4-氯代-3,5-二甲基苯酚消毒液殺菌效果好，且毒性較低，刺激小[16,17]。目前，國內(nèi)市場上有多種品牌的消毒液以4-氯代-3,5-二甲基苯酚為主要成分，且標(biāo)示含量在5.0g/100mL左右。本文結(jié)合企業(yè)實(shí)際，建立了測定消毒液中含量在5.0g/100mL左右的4-氯代-3,5-二甲基苯酚的高效液相色譜方法。該方法的特點(diǎn)是操作簡便、靈敏度高、重現(xiàn)性好，可以在短時(shí)間內(nèi)完成測定。

2. 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器及試劑

高效液相色譜儀島津LC-6A，SPD-6AV紫外-可見檢測器，HW-2000色譜工作站；超純水發(fā)生器，18.2MΩ.cm，美國Millipore公司。

4-氯代-3,5-二甲基苯酚、2,4-二氯代-3,5-二甲基苯酚，均為標(biāo)準(zhǔn)品，上海利盛化學(xué)品有限公司；甲醇，色譜純，天津四友生物公司；冰乙酸，分析純，天津四有生物公司；市售的五種品牌消毒液。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil C18柱（150×4.6mm，5mm )；流動(dòng)相：甲醇-水-冰乙酸（100-99-1）；紫外檢測器：285nm；流速：1mL/min；進(jìn)樣量：10mL；室溫下操作。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

精密稱取干燥恒重的4-氯代-3,5-二甲基苯酚標(biāo)準(zhǔn)品100.70mg，用無水乙醇溶解后定容至100mL棕色容量瓶中，搖勻，配制成4-氯代-3,5-二甲基苯酚標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.0070mg/mL）。分別準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0mL、1.25mL、1.67mL、2.5mL、5.0mL于10mL容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，此標(biāo)準(zhǔn)系列濃度分別為0.1007mg/mL、0.1259mg/mL、0.1678mg/mL、0.2518mg/mL、0.5035mg/mL。

2.2.3 樣品溶液制備

精密吸取五種消毒液樣品各0.5mL，分別置于50mL容量瓶中，加入無水乙醇定容，搖勻，超聲處理10min后待用。測定前經(jīng)0.45mm微孔濾膜過濾。

2.2.4 測定步驟

在設(shè)定的色譜條件下，各取10mL不同濃度的4-氯代-3,5-二甲基苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，注入高效液相色譜儀，記錄保留時(shí)間以及各次不同濃度的峰面積。以含量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品測定則取制備好的樣品溶液，在測定標(biāo)準(zhǔn)溶液相同的色譜條件下進(jìn)行分析，以色譜峰保留時(shí)間定性，峰面積定量。

3. 結(jié)果與討論

3.1 分離條件的選擇

根據(jù)3,5-二甲基-4-氯代苯酚的性質(zhì)，選取甲醇、水、冰乙酸三者混合作流動(dòng)相。加入冰乙酸，可以有效地改善峰形。用甲醇-水-冰乙酸分別按70-29-1、100-80-1、100-99-1三種比例作流動(dòng)相進(jìn)行測試。在甲醇-水-冰乙酸（100-99-1）條件下，4-氯代-3,5-二甲基苯酚可以與相鄰干擾物質(zhì)基線分離，又可以在較短時(shí)間內(nèi)完成測定，也可與其共存的另一種消毒有效成分2,4-二氯代-3,5-二甲基苯酚分離完全。綜合考慮，選取甲醇-水-冰乙酸（100-99-1）作流動(dòng)相。圖1所示為4-氯代-3,5-二甲基苯酚標(biāo)準(zhǔn)色譜圖，消毒液樣品的色譜圖如圖2所示。

3.2 測定條件的選擇

采用C18反相系統(tǒng)，可變波長紫外檢測器，室溫下測定4-氯代-3,5-二甲基苯酚?？勺儾ㄩL紫外檢測器可選用被測組分最靈敏的吸收波長進(jìn)行測定，檢測靈敏度高，并且對溫度和流速變化不敏感。經(jīng)過多次試驗(yàn)摸索，根據(jù)3,5-二甲基-4-氯代苯酚的紫外吸收光譜，選擇285nm為檢測波長最合適。室溫下溫度變化對樣品峰分離影響不明顯，但對出峰時(shí)間有些許影響，完全可以滿足測試要求。

3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性關(guān)系

4-氯代-3,5-二甲基苯酚標(biāo)準(zhǔn)系列濃度平行測定6次，取平均值得到標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖3）。回歸方程為：y＝2419054.27x－40870.06，相關(guān)系數(shù)r＝0.9992，在0.101～1.007mg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

3.4 方法精密度測定

隨即取兩份配制好的4-氯代-3,5-二甲基苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，按本實(shí)驗(yàn)的方法，平行測定6次。根據(jù)峰面積計(jì)算出相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，如表1所示。可以看出，此方法測定4-氯代-3,5-二甲基苯酚有很好的精密度。

3.5 樣品消毒液中4-氯代-3,5-二甲基苯酚的含量測定

在測定標(biāo)準(zhǔn)溶液相同的色譜條件下，對市售的五種消毒液樣品進(jìn)行分析，每樣平行測定6次取平均值，結(jié)果如表2。

3.6 方法準(zhǔn)確度的測定

取已經(jīng)測得含量的消毒液樣品A、B、C、D、E按樣品處理方法處理后，在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，分別加入已知一定量的標(biāo)準(zhǔn)4-氯代-3,5-二甲基苯酚。按照上述的色譜條件測試添加標(biāo)準(zhǔn)樣品的添加回收率，每樣平行測定6次取平均值，結(jié)果見表3。結(jié)果表明，5組含量樣品加標(biāo)檢測結(jié)果重現(xiàn)性良好，平均回收率為96.19%。

表1 方法的精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 消毒液中4-氯代-3,5-二甲基苯酚含量的測定結(jié)果

表3 消毒液中4-氯代-3,5-二甲基苯酚添加回收率的測定結(jié)果

表4 方法的重現(xiàn)性測定結(jié)果

3.7 方法重現(xiàn)性的測定

在上述儀器和色譜條件下，企業(yè)委派的技術(shù)人員按照本實(shí)驗(yàn)方法，從A～E消毒液中隨機(jī)抽取兩個(gè)樣品進(jìn)行分析，每樣平行測定3次，幾天內(nèi)重復(fù)操作測試，結(jié)果如表4。

4. 結(jié)論

本方法具有操作簡單、分離效果好、出峰快的特點(diǎn)，適用于以4-氯代-3,5-二甲基苯酚為主消毒成分的消毒液的測定，對于企業(yè)在生產(chǎn)過程中進(jìn)行質(zhì)量控制具有實(shí)際意義。

[1] SONG S, LIU Z W, HE Z Q, LI Y, CHEN J M, LI C L. Chemosphere [J]. 2009, 77(8): 1043-51.

[2] BISHARA S ATIYEH, SAAD A DIBO, SHADY N Hayek. International Wound Journal[J]. 2009, 6(6): 420-430.

[3] BEERSE P W, MORGAN J M, BAIER K G, et al (Procter & Gamble Co., USA). Mild, rinse-off antimicrobial liquid cleansing compositions containing salicylic acid[P]. US, 6106851 A. 20000822.

[4] ZHOU Z Y, ZHOU L. Spraying detergent for pad of closestool[P]. CN, 101836838 A. 20100922.

[5] NARAYANAN K S, JON D, PATEL J, WINKOWSKI K (ISP Investments Inc., USA). Aqueous composition for delivering bioactive hydrophobic nanoparticles [P]. US, 20100239629 A1.20100923.

[6] SANTANA C M, FERRERA Z S, SANTANA RODRIGUEZ J J. Journal of Chromatographic Science [J]. 2005, 43(6): 282-288.

[7] WU T, WANG C, WANG X, MA Q, ZHANG F,LIU L. Fenxi Huaxue[J]. 2007, 35(10): 1439-1443.

[8] GAGLIARDI L, CAVAZZUTTI G, TUCHETTO L, MANNA F, TONELLI D. Journal of Chromatography [J].1990, 508(1): 252-258.

[9] MAHUGO SANTANA C M, TORRES PADRON M E, SOSA FERRERA Z., SANTANA RODRIGUEZ J J. Journal of Chromatography A[J]. 2007, 1140(1-2): 13-20.

[10] CAO X F ,ZHANG S W, LI Y H, LIU J C, TONG J B. Sepu[J].2001, 19(4): 356-357.

[11] THOMPSON R D. Journal of AOAC International[J].2001, 84(3): 815-822.

[12] DORANTES A, STAVCHANSKY S. Analytical Letters[J].1991, 24(1): 39-53.

[13] DORANTES, A, STAVCHANSKY S. Analytical Letters[J].1989, 22(6): 1513-26.

[14] GAGLIARDI L, AMATO A, BASILI A, CAVAZZUTTI G, GATTAVECCHIA E, TONELLI D. J Chromatogr[J]. 1985, 325(1):353-358.

[15] SHUA'A O A, KITTANEH R B, ALAJRAMI R. Oriental Journal of Chemistry[J]. 1996, 12(2):115-120.

[16] 陳惠珍, 張紫虹. 對氯間二甲苯酚復(fù)方消毒劑生物效應(yīng)研究[J]. 中國消毒學(xué)雜志, 2005, 22(2): 182.

[17] 張紫虹, 楊美玲, 胡永成, 等. 含對氯間二甲基苯酚消毒水安全毒理性評價(jià)[J]. 華南預(yù)防醫(yī)學(xué), 2005,31(3): 55.