鹽酸丙酰左卡尼汀注射劑中有關物質及含量的測定

沈小鐘 ，楊 帆 ，楊燕軍 ，張現(xiàn)濤

(1.廣東食品藥品職業(yè)學院，廣東 廣州 510520; 2.暨南大學藥學院，廣東 廣州 510632; 3.重慶市食品藥品檢驗所，重慶 401121)

鹽酸丙酰左卡尼汀是意大利Sigma－tau公司研發(fā)的用于治療下肢動脈病變和慢性充血性心力衰竭的藥物，1998年在意大利上市，主要成分是丙酰左卡尼汀鹽酸鹽(PLC)，是一種有效的抗體自由基劑，可以保護組織免受氧化損傷，療效遠高于左卡尼汀或乙酰左卡尼汀，可能是因其對骨骼和心臟肌肉具有很高的親和力[1]。本試驗中建立了反相高效液相色譜法測定丙酰左卡尼汀鹽酸鹽有關物質及含量，方法簡便、結果可靠，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Waters2695－2996型高效液相色譜儀，Empower2色譜工作站。注射用丙酰左卡尼汀鹽酸鹽(Dromos，意大利Sigma－tau公司，批號為 071453/A，080959/A，081525/A);丙酰左卡尼汀鹽酸鹽對照品[自制，批號為080728，按無水物計含丙酰左卡尼汀鹽酸鹽(C10H20NO4Cl)含量為99.69%];左卡尼汀對照品(沈陽東宇藥業(yè)有限公司，批號為080201，含量大于98.00%);乙酰左卡尼汀對照品(百靈威公司，批號為A0133667，含量大于98.00%);巴豆甜菜堿對照品[2](自制，批號為 BD08001，含量大于98.00%);甲醇、辛烷磺酸鈉為色譜純;水為純凈水;其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Angilent Zorbax SB－C18柱(250mm×4.6mm，5μm);流動相:0.006mol/L辛烷磺酸鈉溶液(每1000mL加三乙胺10mL，磷酸調 pH 至 2.9)－甲醇(95∶5);流速:1.0mL/min，柱溫:35℃，檢測波長:210 nm。精密量取對照品溶液10μL注入高效液相色譜儀，調節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為滿量程的10% ～25%，再分別量取供試品溶液與對照溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的4倍。供試品溶液如有雜質峰，檢測最大雜質與總雜質。丙酰左卡尼汀鹽酸鹽峰與雜質峰分離度應符合要求。

2.2 溶液制備

取本品適量，加流動相溶解并稀釋成每1 mL約含40.0 mg丙酰左卡尼汀鹽酸鹽溶液，搖勻，即為供試品溶液;精密量取供試品溶液1mL，置100mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即為對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗:按鹽酸丙酰左卡尼汀的處方配制混合輔料溶液，按上述色譜條件進樣。結果，制劑中輔料組分在210 nm波長處不干擾樣品的測定。

檢測限及定量限試驗:取丙酰左卡尼汀鹽酸鹽溶液不斷稀釋，精密量取稀釋液10μL，照上述色譜條件進樣測定，信噪比為3∶1時即為檢測限，信噪比為10∶1時即為定量限。試驗結果表明，丙酰左卡尼汀鹽酸鹽的檢測限為0.3888μg，定量限為1.944μg。

線性關系考察:取丙酰左卡尼汀鹽酸鹽對照品約100mg，精密稱定，置5mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為母液。精密量取母液 1，1，1，0.1mL，分別置 2，5，10，2mL 容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為各濃度梯度的供試品溶液。精密量取供試品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。由供試品溶液濃度(C，以C10H20NO4Cl計)對峰面積(A)進行線性回歸，得回歸方程 A=2.1 ×105C+1.636 5 ×104(r=0.999 8)。結果表明，本品進樣量在1.0036～20.072 g/L范圍內線性關系良好。

精密度試驗:取線性關系考察項下質量濃度為4.014 4 g/L的溶液，連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖，結果的 RSD為0.26%，表明本法精密度良好。

重復性試驗:取樣品(批號為080723)適量，共6份，分別加流動相溶解制成每1mL約含丙酰左卡尼汀鹽酸鹽4mg的溶液，作為供試品溶液。另精密稱取丙酰左卡尼汀鹽酸鹽對照品適量，同法制成每1mL約含丙酰左卡尼汀鹽酸鹽4mg的溶液，作為對照品溶液。精密量取供試品溶液及對照品溶液10μL注入色譜儀測定。結果的 RSD為0.47%，表明本方法重復性良好。

穩(wěn)定性試驗:取同一樣品(批號為080723)適量加流動相溶解，制成每1mL約含丙酰左卡尼汀鹽酸鹽4mg的溶液，精密量取供試品溶液及對照品溶液 10 μL，分別于 0，1，2，4，6，8 h 時進樣測定。結果進樣精密度的RSD為0.31%，溶液穩(wěn)定性的 RSD為1.55%，表明本法穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗:取本品原料適量，與輔料按處方量的80%，100%，120%混合。精密稱取本品原料80%，100%，120%，分別精密加入相應數(shù)量的輔料，每組不同比例各3份;加流動相溶解并定量稀釋，作為供試品溶液。按含量測定項下的方法測定，計算回收率，結果見表1?？梢?，按照處方比例，投料量在80% ～120%時，本品含量測定方法的回收率良好。

表1 加樣回收試驗結果

中間精密度:由不同操作人員，于不同時間在不同儀器上照精密度試驗項下方法對同一批(批號為080723)樣品進行含量測定，結果的 RSD為0.29%，表明本法中間精密度良好。

有關物質檢查:取本品適量，加流動相溶解并稀釋制成每1mL約含40.0 mg丙酰左卡尼汀鹽酸鹽的溶液，搖勻，作為供試品溶液;精密量取供試品溶液1 mL，置100 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。取對照溶液10μL注入液相色譜儀，調節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為滿量程的10% ～25%，再分別量取供試品溶液與對照溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的4倍。供試品溶液如有雜質峰，檢測總雜質和單個最大雜質。結果見表2、圖1和圖2。

2.4 含量測定

取本品適量，精密稱定，加流動相溶解并定量稀釋制成每1mL約含丙酰左卡尼汀鹽酸鹽4 mg的溶液，作為供試品溶液。另精密稱取對照品適量，同法制成每1mL約含丙酰左卡尼汀鹽酸鹽4mg的溶液，作為對照品溶液。精密量取供試品溶液及對照品溶液10μL進樣測定，按外標法以峰面積計算本品的含量，結果批號分別為071453、080959、081525的樣品含量分別為 99.01%，100.03%，100.12%。

表2 雜質含量比對結果(百分之一對照法，%)

圖1 鹽酸丙酰左卡尼汀的雜質結構圖

圖2 鹽酸丙酰左卡尼汀高效液相色譜圖

3 討論

鹽酸丙酰左卡尼汀作為左卡尼汀的升級產(chǎn)品，有著十分廣闊的市場前景[3]，筆者通過試驗建立的本方法可以為其質量研究提供參考。

試驗發(fā)現(xiàn)，鹽酸丙酰左卡尼汀中的有關物質主要是左卡尼汀失去一分子水的化合物巴豆甜菜堿(雜質A)、左卡尼汀(雜質B)和乙酰左卡尼汀鹽酸鹽(雜質C)。其中，巴豆甜菜堿需加入校正因子F后再按照百分之一對照法進行計算(F=A210PLC×C巴豆甜菜堿 /A210C巴豆甜菜堿 ×CPLC)，F(xiàn)值為0.013 06。左卡尼汀和乙酰左卡尼汀是臨床常用藥物，安全性較高，巴豆甜菜堿雜質亦為左卡尼汀和乙酰左卡尼汀中的有關物質[4]。

試驗發(fā)現(xiàn)，不同批號鹽酸丙酰左卡尼汀有關物質差異較大。其中，雜質A、雜質B隨著時間延長含量有不斷增加的趨勢;隨著保存時間延長，丙酰左卡尼汀鹽酸鹽有向左卡尼汀、巴豆甜菜堿、鹽酸乙酰左卡尼汀轉化的可能。

[1]Ilaria D，F(xiàn)rancesco G，Barbara G，etal.Enantio－and chemo－selective HPLC separations by chiral－achiral tandem－columns approach:the combination of CHIR OBIOTIC TAGTM and SCX columns for the analysis of propionyl carnitine and related impurities[J].Journalof Chromatography A，2004，1 061(2):167 －173.

[2]范立強，袁琴生.大腸桿菌轉化巴豆甜菜堿合成L－卡尼汀[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，1998，29(3):99 －102.

[3]唐玉亮，常 剛.左卡尼汀的臨床應用進展[J].中國藥業(yè)，2010，19(17):84－86.

[4]李 璽，李 薇，佟愛東.注射用乙酰左卡尼汀含量及有關物質的測定[J].今日藥學，2008，18(5):24－25.