廬山石韋和柔軟石韋營養(yǎng)葉片組織化學(xué)定位研究

鐘霞軍 李雁群 黃榮韶

摘要：利用冰凍切片法對廬山石韋和柔軟石韋營養(yǎng)葉片中的皂苷類化合物、蒽醌類化合物及多糖物質(zhì)進(jìn)行了組織化學(xué)定位研究。結(jié)果表明，皂苷類化合物主要積累在營養(yǎng)葉片主脈的薄壁組織和葉片的柵欄組織中，海綿組織、厚角組織、表皮中也有少量皂苷類化合物分布；蒽醌類化合物主要分布在營養(yǎng)葉片主脈的薄壁組織以及葉肉同化組織中，在表皮和韌皮部含有少量的蒽醌類化合物，木質(zhì)部無明顯顯色反應(yīng)；而多糖物質(zhì)普遍存在于葉肉同化組織中。從顯色程度上看，廬山石韋皂苷類化合物和多糖物質(zhì)含量高于柔軟石韋，而柔軟石韋的蒽醌類化合物含量則高于廬山石韋。這為石韋資源的合理利用提供了參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：廬山石韋；柔軟石韋；營養(yǎng)葉片；皂苷類化合物；蒽醌類化合物；多糖物質(zhì)；組織化學(xué)定位

中圖分類號：Ｑ９４９．３６＋７．２；Ｑ９４４．５６；Ｑ９４６文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０12）16－3540-05

Histochemical Localization of Foliage Leaves of Pyrrosia sheareri and P. porosa

ＺＨＯＮＧ Ｘｉａ－ｊｕｎ１，ＬＩ Ｙａｎ－ｑｕｎ２，ＨＵＡＮＧ Ｒｏｎｇ－ｓｈａｏ３

（１． Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｅｘｈｉｂｉｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ， Ｇｕａｎｇｘｉ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００１，Ｃｈｉｎａ；

２． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６４２， Ｃｈｉｎａ；

３． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｇｕａｎｇｘｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００５，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｆｒｏｚｅｎ ｓｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｌｏｃａｔｅ ｓａｐｏｎｉｎｓ， ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ ａｎｄ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｌｉａｇｅ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Ｐｙｒｒｏｓｉａ ｓｈｅａｒｅｒｉ（Ｂａｋ．） Ｃｈｉｎｇ ａｎｄ Ｐ． ｐｏｒｏｓａ（Ｃ． Ｐｒｅｓｌ） Ｈｏｖｅｎｋ． Ｔｈｅ ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｓａｐｏｎｉｎｓ ｍａｉｎｌｙ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ ｉｎ ｐａｒｅｎｃｈｙｍａ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ｍａｊｏｒ ｖｅｉｎ ｔｒａｎｓｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐａｌｉｓａｄｅ ｔｉｓｓｕｅ， ｓｏｍｅ ｅｘｉｓｔｅｄ ｉｎ ｓｐｏｎｇｙ ｔｉｓｓｕｅ， ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ ａｎｄ ｐｈｌｏｅｍ． Ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ ｗｅｒｅ ｍａｉｎｌｙ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ｐａｒｅｎｃｈｙｍａ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ｍａｊｏｒ ｖｅｉｎ ｔｒａｎｓｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｓｏｐｈｙｌｌ ａｓｓｉｍｉｌａｔｉｏｎ ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ， ｓｏｍｅ ｗｅｒｅ ｔｅｓｔｅｄ ｉｎ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ ａｎｄ ｐｈｌｏｅｍ； ｎｏ ｃｏｌｏｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｘｙｌｅｍ． Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｇｅｎｅｒａｌｌｙ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ ｉｎ ｍｅｓｏｐｈｙｌｌ ａｓｓｉｍｉｌａｔｉｏｎ ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐ． ｓｈｅａｒｅｒｉ ａｎｄ Ｐ． ｐｏｒｏｓａ． Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｓａｐｏｎｉｎｓ ａｎｄ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｉｎ Ｐ． ｓｈｅａｒｅｒｉ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ Ｐ． ｐｏｒｏｓａ； ｂｕｔ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ ｗａｓ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ Ｐ． ｐｏｒｏｓａ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｃｏｌｏｒ ｒｅａｃｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ｄａｔａ ｆｏｒ ｒａｔｉｏｎａｌ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｙｒｒｏｓｉａ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｐｙｒｒｏｓｉａ ｓｈｅａｒｅｒｉ （Ｂａｋ．） Ｃｈｉｎｇ； Ｐ． ｐｏｒｏｓａ （Ｃ． Ｐｒｅｓｌ） Ｈｏｖｅｎｋ； ｆｏｌｉａｇｅ ｌｅａｖｅｓ； ｓａｐｏｎｉｎｓ； ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ； ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ； ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ

廬山石韋［Ｐｙｒｒｏｓｉａ ｓｈｅａｒｅｒｉ（Ｂａｋ．）Ｃｈｉｎｇ］和柔軟石韋［Ｐ． ｐｏｒｏｓａ（Ｃ． Ｐｒｅｓｌ）Ｈｏｖｅｎｋ］為水龍骨科（Ｐｏｌｙｐｏｄｉａｃｅａｅ）石韋屬（Ｐｙｒｒｏｓｉａ Ｍｉｒｂｅｌ）多年生草本植物，主要分布于我國廣西、廣東、貴州、云南、四川、浙江、江西、湖北、福建及臺灣等?。ㄗ灾螀^(qū)），多生于山野的巖石上或樹上；外形上常按葉型大小不同，分為大葉石韋類和小葉石韋類兩個類群。廬山石韋為大葉石韋，已被《中華人民共和國藥典》收藏為正品石韋；而柔軟石韋為小葉石韋，為非中國藥典藥品。這兩類石韋在臨床應(yīng)用上也各有側(cè)重點，小葉石韋主要對腎炎、尿道炎有一定的療效［１－４］，而大葉石韋則對氣管炎療效較好［５］。石韋屬植物含皂苷、延胡索酸、咖啡酸、香草酸、蒽醌苷、黃酮類、鞣質(zhì)、β－谷甾醇和綠原酸等多種藥用成分［６－１２］。目前在化學(xué)成分［１３］、形態(tài)結(jié)構(gòu)［１４，１５］、含量測定［１６－１８］和藥理［１９］等方面報道不少，但有關(guān)廬山石韋和柔軟石韋藥用成分的組織化學(xué)定位以及積累研究鮮見報道。為了比較不同石韋類群化學(xué)成分在組織器官中的含量差異及其分布，試驗通過對廬山石韋和柔軟石韋主要藥用部位營養(yǎng)葉片中皂苷類化合物、蒽醌類化合物及多糖物質(zhì)進(jìn)行了組織化學(xué)定位研究，以期為研究石韋中藥材中的皂苷類化合物、蒽醌類化合物以及多糖物質(zhì)的合成、轉(zhuǎn)運和貯存的途徑提供試驗依據(jù)，同時為藥用石韋資源的合理利用提供參考。

１材料與方法

１．１試驗材料

柔軟石韋于２００７年７月采自廣西壯族自治區(qū)靖西縣安德鎮(zhèn)；廬山石韋于２００７年７月采自環(huán)江毛南族自治縣愛峒鄉(xiāng)，均取生長正常的成熟營養(yǎng)葉片為研究材料。在廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院中心實驗室進(jìn)行測定工作，所用試劑有５％香草醛、冰醋酸、高氯酸、醋酸鉛飽和溶液、３８％甲醛、７０％酒精、５％ＮａＯＨ溶液、高碘酸酒精、席夫試劑（Ｓｃｈｉｆｆ＇ｓ ｒｅａｇｅｎｔ，品紅亞硫酸試劑）等。儀器主要是廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院中心實驗室已具備的Ｌｅｉｃａ－ＤＭＬＢ顯微鏡、植物切片機(jī)等。

１．２試驗方法

１．２．１皂苷類化合物檢測（香草醛－冰醋酸和高氯酸等量混合的顯色劑測定）將新鮮營養(yǎng)葉片采用冰凍切片法橫切制成２５ μｍ的薄片，在醋酸鉛飽和溶液中浸泡２４ ｈ后，滴加等量的５％的香草醛－冰醋酸和等量高氯酸混合的顯色劑，顯色５ ｍｉｎ后，觀察葉片組織有無產(chǎn)生從淡紅色→紅色→紫紅色的顏色變化。對照材料用３８％甲醛 ５ ｍＬ＋冰醋酸５ ｍＬ＋７０％酒精９０ ｍＬ配制的ＦＡＡ固定液浸泡２０ ｄ，以除去皂苷類化合物，再用上述混合劑顯色，制成裝片，用Ｌｅｉｃａ－ＤＭＬＢ顯微鏡進(jìn)行觀察并照相。

１．２．２蒽醌類化合物檢測（氫氧化鈉溶液顯色法）①將新鮮營養(yǎng)葉片采用冰凍切片法橫切制成２５ μｍ的薄片，放在載玻片上，滴上去離子水后蓋上蓋玻片，置顯微鏡下直接觀察并拍照。②在前述①的裝片上滴５％ＮａＯＨ溶液顯色，加蓋玻片后在Ｌｅｉｃａ－ＤＭＬＢ顯微鏡下觀察顯色部位，并照相。

１．２．３多糖物質(zhì)檢測采用高碘酸席夫染色法（Ｐｅｒｉｏｄｉｃ ａｃｉｄ－ｓｃｈｉｆｆ ｓｔａｉｎ，ＰＡＳ），將新鮮營養(yǎng)葉片采用冰凍切片法橫切制成２５ μｍ的薄片，在高碘酸酒精溶液中處理３ ｍｉｎ，在７０％酒精中漂洗后滴加席夫試劑處理１ ｍｉｎ，流水沖洗５ ｍｉｎ后，封片，最后在Ｌｅｉｃａ－ＤＭＬＢ顯微鏡下觀察并照相。

２結(jié)果與分析

２．１皂苷類化合物檢測

試驗采用的皂苷類化合物顯色劑是香草醛－冰醋酸和高氯酸混合劑，該顯色劑能與植物中的皂苷類化合物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成大分子復(fù)合物，并且出現(xiàn)特定的顯色反應(yīng)，因此是對植物所含皂苷類化合物定性的一種識別試劑。以５％香草醛－冰醋酸和高氯酸混合劑作為顯色劑滴加后，含有皂苷類化合物的細(xì)胞會呈現(xiàn)出淡紅→紅→紫紅的顏色變化，顏色的深淺與皂苷類化合物的含量呈正相關(guān)關(guān)系［２０－２３］。從鏡檢結(jié)果（圖１）來看，石韋植物不同種及同種的營養(yǎng)葉片中不同組織部位，其皂苷類化合物的分布和積累情況是不同的。在柔軟石韋和廬山石韋營養(yǎng)葉片主脈橫切面薄壁組織和維管束韌皮部均顯示出紅色物質(zhì)（圖１－１、圖１－４），說明有皂苷類化合物的存在；厚角組織則顯示極淺的紅色（圖１－１、圖１－４），說明此處含少量的皂苷類化合物，而木質(zhì)部顯色不明顯。在營養(yǎng)葉片的整個橫切面中均有皂苷類化合物分布，其中柵欄組織積累最多，顯色最明顯，并且呈紫紅色（圖１－２、圖１－５），表明柵欄組織有較多的皂苷類化合物存在；葉表皮和海綿組織呈淺紅色，反映出含皂苷類化合物相對較少（圖１－２、圖１－３、圖１－５），并且表皮毛顯色不明顯。研究發(fā)現(xiàn)，廬山石韋柵欄組織顯色比柔軟石韋柵欄組織明顯，呈紫紅色，表明廬山石韋營養(yǎng)葉片皂苷類化合物含量比柔軟石韋含量高。而經(jīng)７０ ％的酒精配制的ＦＡＡ固定液處理的對照材料與顯色劑沒有明顯的顯色反應(yīng)．說明皂苷類化合物已被ＦＡＡ液抽提。

２．２蒽醌類化合物檢測

試驗采用的蒽醌類化合物顯色劑是５％ ＮａＯＨ溶液，該顯色劑能與植物中的蒽醌類化合物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成大分子復(fù)合物，并且出現(xiàn)特定的顯色反應(yīng)，因此是對植物所含蒽醌類化合物定性的一種識別試劑。在石韋植物營養(yǎng)葉片橫切面切片上滴加５％ ＮａＯＨ溶液后，會立即產(chǎn)生特定的顯色反應(yīng)，出現(xiàn)顏色從淡黃色至橘紅色或深紅色不等的變化。從鏡檢結(jié)果（圖２）來看，石韋植物不同種及同種的營養(yǎng)葉片的不同組織部位中，蒽醌類化合物的分布和積累情況也是不同的。在柔軟石韋和廬山石韋營養(yǎng)葉片主脈橫切面上，顯色部位主要集中在薄壁組織，上有較多細(xì)胞染成紅色（圖２－１、圖２－２、圖２－４），表明該組織含較多的蒽醌類化合物；而表皮部位顯淺紅色（圖２－１、圖２－２、圖２－5），說明蒽醌類化合物含量少；維管束的韌皮部顯色而木質(zhì)部的導(dǎo)管不顯色，厚角組織也無明顯的顯色反應(yīng)（圖２－１、圖２－２、圖２－４），說明它們不含蒽醌類化合物或蒽醌類化合物的含量極低。在營養(yǎng)葉片的柵欄組織和海綿組織中均可看到明顯的顯色反應(yīng)，而且有許多細(xì)胞染成了深紅色（圖２－３、圖２－５），特別是在柔軟石韋海綿組織中有較多的細(xì)胞呈深紅色（圖２－３），表明在柔軟石韋海綿組織中分布有較多的蒽醌類化合物。據(jù)顯色的深淺判斷，柔軟石韋營養(yǎng)葉片中的蒽醌類化合物含量要比廬山石韋的高。

在未加５％ ＮａＯＨ溶液的石韋植物營養(yǎng)葉片橫切面上，同化薄壁組織含有葉綠素，因而呈綠色（圖3-1、圖３－２、圖３－４）；表皮不具葉綠體，為白色（圖３－２、圖３－４）；主脈厚角組織和維管束中含有黃色物質(zhì)，呈黃色（圖３－１、圖３－３）。

２．３多糖物質(zhì)

冰凍切片經(jīng)過ＰＡＳ染色后，會立即產(chǎn)生特定的顯色反應(yīng)，變色范圍從淡紅色至深紅色或紫紅。鏡檢結(jié)果表明，營養(yǎng)葉片除了厚角組織被染成紅色外，主脈薄壁細(xì)胞、維管束和柵欄組織、海綿組織以及表皮毛等部位顯色較均勻，也呈紅色（圖４－１、圖４－２、圖４－３、圖４－４），說明柔軟石韋和廬山石韋營養(yǎng)葉片中都含有較多的多糖物質(zhì)。

在未經(jīng)PAS染色直接用顯微鏡觀察的廬山石韋和柔軟石韋營養(yǎng)葉片切片中，同化薄壁組織含有葉綠素，呈綠色（圖3-1、圖３－２、圖３－４）；表皮不具葉綠體，為白色（圖３－２、圖３－４）；柔軟石韋主脈厚角組織呈無色，而廬山石韋主脈厚角組織和維管束中含有淡黃色物質(zhì)，呈淡黃色（圖３－１、圖３－３）。

３小結(jié)與討論

１）應(yīng)用組織化學(xué)定位技術(shù)來確定藥用成分在中藥材中的分布和積累是一種有效的研究手段。皂苷類化合物、蒽醌類化合物、多糖物質(zhì)是石韋屬植物中的主要藥用成分。皂苷類化合物是一類具有較強(qiáng)生理活性的次生代謝產(chǎn)物，其在不同藥材、不同植物組織器官及不同發(fā)育時期存在很大的差異［２４－２６］。林如等［２７］對絞股藍(lán)［Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｍａｋ．］的葉片皂苷類化合物進(jìn)行了定位，結(jié)果表明葉肉組織和葉脈韌皮部顯紫紅和紅色，表皮和厚角組織顯淺紅色。本試驗結(jié)果也表明，廬山石韋和柔軟石韋營養(yǎng)葉片的主脈薄壁組織、維管束韌皮部、厚角組織、表皮、柵欄組織和海綿組織中均有不同含量的皂苷類化合物分布，而表皮毛和維管束木質(zhì)部顯色不明顯。彭華勝等［２８］研究發(fā)現(xiàn)，栽培太子參［Ｐｓｅｕｄｏｓｔｅｌｌａｒｉａ ｈｅｔｅｒｏｐｈｙｌｌａ（Ｍｉｑ）Ｐａｘ ｅｘ Ｐａｘ ｅｔ Ｈｏｆｆｍ．］塊根在次生韌皮部與形成層中的皂苷類化合物含量明顯高于次生木質(zhì)部。Ｎｏｂｕｙｕｋｉ等［２９］認(rèn)為，蒽醌類化合物存在于葉片表皮下方的同化薄壁組織中。而Ｂｒｕｎｉ等［３０］認(rèn)為中央貯水組織也是積累蒽醌類化合物的場所，Ｂｅａｕｍｏｎｔ等［３１］認(rèn)為蒽醌類化合物可能貯存于維管束中。從本研究的結(jié)果來看，比較支持Ｎｏｂｕｙｕｋｉ的觀點，檢測顯示，蒽醌類化合物主要分布在石韋屬植物營養(yǎng)葉片主脈的薄壁組織及葉肉同化組織中，維管束的韌皮部顯色，而木質(zhì)部不顯色，據(jù)此我們推測蒽醌類化合物的運輸可能是通過韌皮部進(jìn)行的，當(dāng)然還有待進(jìn)一步研究確認(rèn)。葉片是植物進(jìn)行光合作用合成糖類物質(zhì)的重要器官，呂洪飛等［３２］在石斛屬（Dendrobium Sw.）植物葉片多糖物質(zhì)的組織化學(xué)定位研究中，發(fā)現(xiàn)葉片里染色較深的部位在葉肉細(xì)胞、表皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)及韌皮部細(xì)胞的細(xì)胞壁上。章英才等［３３］在研究了大黃（Rheum tanguticum Maxim et Balf var. liupanshanense Cheng et Kao）莖和葉中多糖貯藏分布特征后認(rèn)為，葉肉柵欄組織和海綿組織細(xì)胞內(nèi)分布有大量的葉綠體，糖類物質(zhì)在葉肉細(xì)胞中合成，進(jìn)行短暫的貯存后通過一定的途徑經(jīng)由葉柄和莖維管束運輸至根莖或根中貯藏積累。本研究也發(fā)現(xiàn)廬山石韋和柔軟石韋營養(yǎng)葉片中含有較多的多糖物質(zhì)，但是否運輸至石韋葉柄和根狀莖中貯藏積累及其運輸途徑還有待進(jìn)一步確認(rèn)。

２）張藝軒等［１３］利用高效液相色譜技術(shù)研究大葉石韋和小葉石韋的指紋圖譜，發(fā)現(xiàn)大葉石韋（廬山石韋）與小葉石韋［有柄石韋，Pyrrosia petiolosa （Ｃｈｒｉｓｔ）Ｃｈｉｎｇ］的指紋圖譜有較大的差異。我們的研究表明，廬山石韋和柔軟石韋營養(yǎng)葉片中存在著大量的皂苷類化合物、蒽醌類化合物和多糖物質(zhì)，它們在石韋植物營養(yǎng)葉片中的分布是多位點的，不同組織中有一定的貯藏與分布；根據(jù)不同組織中細(xì)胞的顯色程度不同，廬山石韋和柔軟石韋營養(yǎng)葉片中皂苷類化合物、蒽醌類化合物和多糖物質(zhì)的含量差異也較大，廬山石韋營養(yǎng)葉片的皂苷類化合物和多糖物質(zhì)含量比柔軟石韋營養(yǎng)葉片的高，而柔軟石韋營養(yǎng)葉片的蒽醌類化合物含量則高于廬山石韋的?！吨腥A人民共和國藥典》中只收錄了石韋［Ｐｙｒｒｏｓｉａ ｌｉｎｇｕａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｆａｒｗ．］、廬山石韋、有柄石韋這３種石韋植物作為傳統(tǒng)中藥石韋的原植物［３４］，但據(jù)本研究發(fā)現(xiàn)，柔軟石韋營養(yǎng)葉片具有較高的蒽醌類化合物含量，而蒽醌類化合物是一類具有重要藥用價值的中藥有效成分，具有抗菌消炎、健胃、強(qiáng)壯、通經(jīng)、利尿、祛瘀血、抗腫瘤等作用［３５－４３］。加上隨著醫(yī)療事業(yè)的發(fā)展，石韋藥材的用藥量在不斷增加，這造成野生資源的急劇減少。不過據(jù)調(diào)查，柔軟石韋的野生資源在廣西壯族自治區(qū)各地還比較豐富［４４］，有較好的利用價值。本研究也可為合理開發(fā)利用石韋資源提供參考依據(jù)。

３）試驗對廬山石韋和柔軟石韋營養(yǎng)葉片采用氫氧化鈉溶液顯色法進(jìn)行了蒽醌類化合物的組織定位、采用ＰＳＡ染色法對多糖物質(zhì)進(jìn)行了組織定位、采用香草醛－冰醋酸和高氯酸等量混合劑顯色法對皂苷類化合物進(jìn)行了組織定位，３種方法都成功地產(chǎn)生了從淡色－深色的復(fù)合顯色變化，顯示出廬山石韋和柔軟石韋營養(yǎng)葉片中有皂苷類化合物、蒽醌類化合物以及多糖物質(zhì)的存在，且不同組織中顏色深淺不同，其色度變化與石韋活性成分含量呈正比關(guān)系，顯色反應(yīng)靈敏，完全可以作為快速定性識別、定位檢測石韋屬植物營養(yǎng)葉片中的皂苷類化合物、蒽醌類化合物以及多糖物質(zhì)的方法應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

［１］ 童玉懿，李潔，王珂，等．常用中藥材品種整理和質(zhì)量研究［Ｍ］．北京：北京醫(yī)科大學(xué)出版社，２００１．２１２．

［２］ 國家中醫(yī)藥管理局中華本草編纂委員會．中華本草（第二卷）［Ｍ］．上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，２０００．２５３．

［３］ 劉建忠，姚波，吳正啟．復(fù)方石韋片治療上尿路感染臨床觀察［Ｊ］．湖北中醫(yī)雜志，２００７，２９（６）：３２．

［４］ 吳金英，賈占紅，孫建寧．復(fù)方石韋片主要藥效的實驗研究［Ｊ］．浙江實用醫(yī)學(xué)，２００５，１０（５）：３１１－３１３．

［５］ 上海第一醫(yī)學(xué)院，上海第一醫(yī)學(xué)院附屬中山醫(yī)院，上海醫(yī)藥工業(yè)研究院，等．石韋治療慢性氣管炎的有效成分研究［Ｊ］．醫(yī)藥工業(yè)，１９７３，３（６）：１．

［６］ 王楠，王金輝，程杰，等．有柄石韋的化學(xué)成分［Ｊ］．沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，２００３，２０（６）：４２５－４２７．

［７］ 張亞寧，吳博，楊吉剛，等．ＨＰＬＣ法測定石韋中木犀草素的含量［Ｊ］．藥學(xué)實踐雜志，２００６，２４（６）：３５９－３６１．

［８］ 王白軍，楊紅兵，齊譽．正交設(shè)計研究石韋總黃酮和鞣質(zhì)提取工藝［Ｊ］．時珍國醫(yī)國藥，２００７，１８（２）：４６３－４６４．

［９］ 馬辰，周圓，劉愛茹．高效液相色譜法測定中藥石韋兩種成分的含量［Ｊ］．藥學(xué)學(xué)報，２００３，３８（４）：２８６－２８９．

［１０］ 王瑞蘭，易俗，譚新中，等．廬山石韋總黃酮的提取工藝研究［Ｊ］．湘潭師范學(xué)院學(xué)報（自然科學(xué)版），２００４，２６（４）：７７－７９．

［１１］ 張?zhí)m，劉遠(yuǎn)環(huán)，何聿，等．毛細(xì)管電泳－電化學(xué)檢測法用于中藥石韋中綠原酸和槲皮素的同時測定［Ｊ］．分析測試技術(shù)與儀器，２００５，１１（１）：２２－２７．

［１２］ 鐘小群，蔡慶順，寒勛銜．ＨＰＬＣ法測定石韋藥材中綠原酸的含量［Ｊ］．江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，２００２，１４（２）：１６－１７．

［１３］ 張藝軒，李開通，李秋月，等．不同產(chǎn)地和品種石韋藥材的高效液相指紋圖譜研究［Ｊ］．中藥材，２０１１，３４（１）：２０－２６．

［１４］ 李雁群，黎穎菁，黎樺，等．廣西石韋屬七種植物葉片結(jié)構(gòu)與孢子形態(tài)的比較研究［Ｊ］．廣西植物，２０１０，３０（４）：４６２－４７０．

［１５］ 文瑞良，伍蘭．相異石韋性狀及顯微鑒別［Ｊ］．中藥材，２０００，２３（８）：４４６－４４７．

［１６］ 李玉華， 彭敬東，鄭敏，等．ＨＰＬＣ法同時測定石韋藥材中綠原酸、芒果苷和木犀草素的質(zhì)量濃度［Ｊ］． 西南師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），２０１１，３６（２）：１０４－１０７．

［１７］ 陳超君，尹小紅，黃敏，等．石韋孢子葉和營養(yǎng)葉中活性成分含量分析［Ｊ］．廣西植物，２０１０，３０（１）：１３３－１３６．

［１８］ 蘇靜州，劉明言，董海榮．ＨＰＬＣ法測定復(fù)方石韋片中苦參堿和氧化苦參堿的含量［Ｊ］．中草藥，２００５，３６（３）：３８３－３８４．

［１９］ 賈永芳，李莉，張彤，等．石韋對小鼠免疫功能及異基因皮片移植排斥的抑制作用［Ｊ］．四川動物，２０１１，３０（２）：２６１－２６４．

［２０］ 鄭友蘭，李向高．吉林人參與西洋參生藥學(xué)和組織化學(xué)的比較研究［Ｊ］．吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，１９８６，８（４）：３０－３５．

［２１］ 劉世彪，林如，胡正海．絞股藍(lán)人參皂甙的組織化學(xué)定位及其含量的變化［Ｊ］．實驗生物學(xué)報，２００５，３８（１）：５４－５７．

［２２］ 蘇紅文，胡正海．不同年生西洋參根的解剖結(jié)構(gòu)及組織化學(xué)研究［Ｊ］．石河子大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），１９９５，13（３）：１－５．

［２３］ ＫＵ Ｂ Ｏ． Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｌ：Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅｓ ｉｎ ｇｉｎｓｅｎｇ （Ｐａｎａｘ ｇｉｎｓｅｎｇ） ｒｏｏｔ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｌｌｏｇｄｉａ），１９８０，４３（２）：２７８－２８４．

［２４］ 李金亭，彭勵，胡正海，等．牛膝根的結(jié)構(gòu)發(fā)育與三萜皂苷積累的關(guān)系［Ｊ］．分子細(xì)胞生物學(xué)報，２００７，４０（２）：１２１－１２９．

［２５］ ＴＡＮ Ｌ Ｌ， ＣＡＩ Ｘ， ＨＵ Ｚ Ｈ， ｅｔ ａｌ． Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｙｎａｍｉｃ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ｓａｉｋｏｓａｐｏｎｉｎ ｉｎ ｔｈｅ ｒｏｏｔ ｏｆ Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００８，５０（８）：９５１－９５７．

［２６］ 胡正海． 藥用植物的結(jié)構(gòu)、發(fā)育與其主要藥用成分積累關(guān)系的研究［Ｊ］．中國野生植物資源，２００５，２４（１）：８－１２．

［２７］ 林如，曹玉芳，胡正海．絞股藍(lán)營養(yǎng)器官的結(jié)構(gòu)及其人參皂甙的組織化學(xué)定位研究［Ｊ］．西北植物學(xué)報，２００２，２２（４）：７９６－８００．

［２８］ 彭華勝，劉文哲，胡正海，等． 栽培太子參塊根中皂苷的組織化學(xué)定位及其含量變化［Ｊ］．分子細(xì)胞生物學(xué)報，２００９，４２（１）：１－６．

［２９］ ＮＯＢＵＹＵＫＩ Ｏ， ＭＡＳＡＭＩ Ａ， ＨＩＮＥ Ｎ， ｅｔ ａｌ． Ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｄｅｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈｅｎｏｌｉｃ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｉｎ ａｌｏｅ ｓｐｅｃｉｅｓ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ， １９９６，2：２２５－２３１．

［３０］ ＢＲＵＮＩ Ａ， ＴＯＳＩ Ｂ． Ａ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｇｎｏｓｔｉｃ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ａｌｏｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ｕｓｉｎｇ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ［Ｊ］． Ｉｎｔ Ｊ Ｃｒｕｄｅ Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ，１９８２，２０（３）：１２７－１３１．

［３１］ ＢＥＡＵＭＯＮＴ Ｊ， ＣＵＴＬＥＲ Ｄ Ｆ， ＲＥＹＮＯＬＤＳ Ｔ． Ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｔｉｓｓｕｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｅａｓｔ Ａｆｒｉｃａ ｓｈｒｕｂｂｙ ａｌｏｅｓ［Ｊ］． Ｂｏｔａｎｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｌｉｎｎｅａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ，１９８６，９２：３９９－４０３．

［３２］ 呂洪飛，郭衛(wèi)東，羅文姬，等． ２種石斛屬植物和小葉石仙桃多糖的組織化學(xué)定位［Ｊ］． 中山大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），２００７，３６（３）：７９－８３．

［３３］ 章英才，李俐．六盤山雞爪大黃莖和葉多糖貯藏分布特征的研究［Ｊ］．植物研究，２００９，２９（６）：７５３－７５６．

［３４］ 中華人民共和國藥典編纂委員會．２０１０版中華人民共和國藥典（一部）［Ｍ］． 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，２０１０．

［３５］ 茍奎斌，孫立華，婁衛(wèi)寧，等．大黃４種蒽醌類化合物抑制幽門螺旋桿菌效果比較［Ｊ］．中國藥學(xué)雜志，１９９７，３２（５）：２７８．

［３６］ 郭嘯華，劉志紅，戴春筍，等．大黃酸抑制ＴＧＦ－β１誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞肥大及細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生［Ｊ］． 腎臟病與透析腎移植雜志，２００１，１０（２）：１０１－１０５．

［３７］ 吳立軍．天然藥物化學(xué)［Ｍ］.第四版．北京：人民衛(wèi)生出版社，２００３．１８０．

［３８］ 吳春玲．蘆薈的藥理與臨床應(yīng)用［Ｊ］． 海峽藥學(xué)，２００４，１６（１）：９２－９４．

［３９］ 梁榮感，羅偉生，李利亞，等．大黃蒽醌類化合物體外抗流感病毒作用的研究［Ｊ］．華夏醫(yī)學(xué)，２００６，１９（３）：３９６－３９８．

［４０］ 郭蘭，鄧懷慈．蘆薈中的活性成分——蒽醌化合物抗腫瘤的研究［Ｊ］．現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，２００６，１４（６）：７５７－７５９．

［４１］ 郭美姿，徐海榮，李孝生．大黃酸對小鼠急性肝損傷的影響［Ｊ］．中醫(yī)藥研究，２００２，１８（１）：３７．

［４２］ ＡＲＯＳＩＯ Ｂ， ＧＡＧＬＩＡＮＯ Ｎ ， ＦＵＳＡＲＯ Ｌ Ｍ， ｅｔ ａｌ． Ａｌｏｅ－Ｅｍｏｄｉｎ ｑｕｉｎｏｎｅ ｐｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｒｅｄｕｃｅｓ ａｃｕｔｅ ｌｉｖｅｒ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｃａｒｂｏｎ ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ［Ｊ］． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ，２０００，８７（５）：２２９－２３３．

［４３］ 劉冠賢，葉任高，譚志明，等．大黃素對狼瘡性腎炎成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為的影響［Ｊ］．中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，２０００，２０（３）：１９６－１９８．

［４４］ 黃永康，杜金子，鐘霞軍，等．廣西石韋種質(zhì)資源調(diào)查研究與開發(fā)利用概況［Ｊ］．大眾科技，２０１０（１０）：１８５－１８６．