香蕉枯萎病誘導(dǎo)抗性的小區(qū)試驗(yàn)

王芳 李靜 唐碧桃

摘要：在田間小區(qū)栽培的香蕉苗上，接種串珠鐮刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ）、噴施飽和石灰水和無(wú)菌水７ ｄ后，接種尖孢鐮刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ），測(cè)定過(guò)氧化物酶（ＰＯＤ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、過(guò)氧化氫酶（ＣＡＴ）活性。結(jié)果表明，飽和石灰水能夠誘導(dǎo)香蕉植株對(duì)尖孢鐮刀菌產(chǎn)生抗性，串珠鐮刀菌與尖孢鐮刀菌復(fù)合侵染，加重了病害的發(fā)生。

關(guān)鍵詞：香蕉枯萎?。皇宜?；串珠鐮刀菌；尖孢鐮刀菌；誘導(dǎo)抗性

中圖分類號(hào)：Ｓ４３６．６８文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８114（２０12）16－3485-03

Field Plot Test on Induced Resistance of Banana Fusarium Wilt

ＷＡＮＧ Ｆａｎｇ，ＬI Ｊｉｎｇ，ＴＡＮＧ Ｂｉ－ｔａｏ

（Ｆｏｓｈａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Foshan ５２８０００，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，China）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｅｌｄ ｐｌｏｔ ｔｅｓｔ， ｂａｎａｎａ ｐｌａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ，ｓａｔｕｒａｔｅｄ ｌｉｍｅｗａｔｅｒ ａｎｄ ｓｔｅｒｉｌｅ ｗａｔｅｒ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ａｎｄ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ７ ｄａｙｓ later； ａｎｄ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ （ＰＯＤ）， ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ （ＳＯＤ）， ｃａｔａｌａｓｅ （ＣＡＴ）ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｌｉｍｅｗａｔｅｒ ｃould ｉｎｄｕｃｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ ｂａｎａｎａ ｔｏ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ. Cｏｍｐｌｅｘ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂｏｔｈ Ｆ． ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ａｎｄ Ｆ． ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ ａｇｇｒａｖａｔｅｄ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： banana Fusarium wilt； ｌｉｍｅｗａｔｅｒ； Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ； Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ； ｉｎｄｕｃｅｄ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ

香蕉枯萎病是由尖孢鐮刀菌古巴?；停郏疲酰螅幔颍椋酰?ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ．ｓｐ．ｃｕｂｅｎｓｅ（ＦＯＣ）］引起的香蕉毀滅性病害，防治困難［１］，被列為我國(guó)進(jìn)口檢疫對(duì)象［２］，所謂的“蕉癌”即是香蕉枯萎?。郏常荩瑖?guó)內(nèi)最早于１９６０年在廣西的西貢蕉上發(fā)現(xiàn)此病［４］，２００７年該病導(dǎo)致海南、廣東地區(qū)多數(shù)蕉農(nóng)損失慘重。加強(qiáng)香蕉枯萎病的防治迫在眉睫，目前主要防治方法有嚴(yán)格執(zhí)行檢疫制度，限制蕉苗和馬尼拉麻苗及其所附帶的土壤由病區(qū)輸入；選栽無(wú)病種苗和抗病品種；隔離病區(qū)，毀滅病株；病土處理；施用殺菌藥劑。生物防治作物病害越來(lái)越受到人們的重視［５］，從香蕉地土壤中分離到對(duì)香蕉枯萎病有抑制作用的拮抗菌，并對(duì)其抑菌作用進(jìn)行測(cè)定，開(kāi)發(fā)防治香蕉枯萎病的生防制劑是今后研究和開(kāi)發(fā)的方向之一。試驗(yàn)以串珠鐮刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ）、飽和石灰水作為誘導(dǎo)因子，模擬大田條件，通過(guò)對(duì)相關(guān)酶的活性的測(cè)定［６］，研究香蕉枯萎病的誘導(dǎo)抗性，探索香蕉枯萎病誘導(dǎo)抗病性的生理指標(biāo)。

１材料與方法

１．１試驗(yàn)材料

１．１．１供試菌種及石灰水串珠鐮刀菌、尖孢鐮刀菌，由佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院試驗(yàn)基地植物病理實(shí)驗(yàn)室提供；飽和石灰水為實(shí)驗(yàn)室自制。

１．１．２香蕉苗由佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院試驗(yàn)基地提供，組培苗，田間小區(qū)栽培。

１．１．３培養(yǎng)基馬鈴薯葡萄糖瓊脂（ＰＤＡ）培養(yǎng)基、玉米粒培養(yǎng)基。

１．２試驗(yàn)方法

１．２．１孢子懸浮液的配制和接種菌種經(jīng)PDA培養(yǎng)基活化培養(yǎng)后，接入玉米粒培養(yǎng)基。?。保埃?ｇ玉米粒培養(yǎng)基培養(yǎng)１５ ｄ的菌落，加入１ ０００ ｍＬ無(wú)菌水，１０ ０００ ｒ／ｍｉｎ離心５ ｍｉｎ，取出孢子懸浮液備用。

試驗(yàn)設(shè)３個(gè)處理，１０次重復(fù)。處理采用噴灑方式，處理１為無(wú)菌水（對(duì)照），處理２為串珠鐮刀菌孢子懸浮液，處理３為飽和石灰水。處理７ ｄ后接種尖孢鐮刀菌孢子懸浮液，采用土壤接種方法。

１．２．２酶的提取與活性測(cè)定 接種尖孢鐮刀菌孢子懸浮液后第七天進(jìn)行酶的提取與活性測(cè)定。取香蕉葉片為試驗(yàn)材料，測(cè)定酶活性，３次重復(fù)。

過(guò)氧化物酶（ＰＯＤ）的提取與活性測(cè)定方法參照文獻(xiàn)［６］，以每克鮮樣品酶液每分鐘ＯＤ470 nm變化１．０為１個(gè)酶活單位（Ｕ）。

ＰＯＤ活性（Ｕ）＝■。式中，ｔ：反應(yīng)時(shí)間（ｍｉｎ）；VT：樣液總體積（ｍＬ）；V１：測(cè)定時(shí)樣品用量（ｍＬ）；ＦＷ：樣品鮮重（ｇ）。

超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的提取與測(cè)定方法參照文獻(xiàn)［３］，以每克鮮樣品酶液抑制ＮＢＴ光化還原５０％為1個(gè)酶活單位（Ｕ）。

ＳＯＤ活性（Ｕ）＝■。式中，A0：對(duì)照管的ＯＤ值；ＡＳ：樣品管的ＯＤ值；VT：樣液總體積（ｍＬ）；V１：測(cè)定時(shí)樣品用量（ｍＬ）；ＦＷ：樣品鮮重（ｇ）；t：反應(yīng)時(shí)間（min）。

過(guò)氧化氫酶（ＣＡＴ）的提取與測(cè)定方法參照文獻(xiàn)［３］，以每克鮮樣品酶液每分鐘OD２４０ nm減少０．１為１個(gè)酶活單位（Ｕ）。

ＣＡＴ活性（Ｕ）＝■。式中，ｔ：反應(yīng)時(shí)間（ｍｉｎ）；VT：樣液總體積（ｍＬ）；V１：測(cè)定時(shí)樣品用量（ｍＬ）；ＦＷ：樣品鮮重（ｇ）。

２結(jié)果與分析

２．１３個(gè)處理的ＰＯＤ活性

３個(gè)處理香蕉植株的ＰＯＤ活性測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖１。串珠鐮刀菌、飽和石灰水及對(duì)照３個(gè)處理的ＰＯＤ活性隨反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)均呈下降趨勢(shì)。反應(yīng)１ ｍｉｎ各處理的情況為，飽和石灰水３４．５６ Ｕ，串珠鐮刀菌１７．９２ Ｕ，對(duì)照３２．６０ Ｕ；反應(yīng)２ ｍｉｎ各處理的情況為，飽和石灰水３３．６２ Ｕ，串珠鐮刀菌１６．８５ Ｕ，對(duì)照３１．２５ Ｕ；反應(yīng)３ ｍｉｎ各處理的情況為，飽和石灰水３０．８２ Ｕ，串珠鐮刀菌１４．３９ Ｕ，對(duì)照 ２６．５０ Ｕ；反應(yīng)４ ｍｉｎ各處理的情況為，飽和石灰水２９．９６ Ｕ，串珠鐮刀菌１３．７６ Ｕ，對(duì)照２３．５９ Ｕ；反應(yīng)５ ｍｉｎ各處理的情況為，飽和石灰水２８．７６ Ｕ，串珠鐮刀菌１３．０５ Ｕ，對(duì)照１８．５４ Ｕ。飽和石灰水處理的ＰＯＤ活性明顯高于對(duì)照，而串珠鐮刀菌處理的低于對(duì)照。

２．２３個(gè)處理的ＳＯＤ活性

３個(gè)處理的ＳＯＤ活性測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖２。在３個(gè)處理中，飽和石灰水處理ＳＯＤ活性最高，反應(yīng)１５ ｍｉｎ時(shí)為２３．６５ Ｕ，對(duì)照次之，為１８．２４ Ｕ，串珠鐮刀菌處理的ＳＯＤ活性最低，為１５．０５ Ｕ。試驗(yàn)說(shuō)明飽和石灰水能提高香蕉組培苗ＳＯＤ的活性， 串珠鐮刀菌降低了植物ＳＯＤ的活性。

２．３３個(gè)處理的ＣＡＴ活性

３個(gè)處理的ＣＡＴ活性測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖３。反應(yīng)５ ｍｉｎ時(shí)，飽和石灰水處理ＣＡＴ活性最高，為６４．８６ Ｕ，高于對(duì)照，串珠鐮刀菌處理ＣＡＴ活性（５０．８０ Ｕ）略高于對(duì)照的ＣＡＴ活性。經(jīng)計(jì)算，飽和石灰水處理ＣＡＴ活性是對(duì)照的１．３０倍，串珠鐮刀菌處理是對(duì)照的１．０２倍。

３小結(jié)與討論

ＰＯＤ、ＳＯＤ、ＣＡＴ是生物體內(nèi)的保護(hù)酶，ＳＯＤ消除逆境條件下產(chǎn)生的有害自由基，ＰＯＤ消除生物體代謝過(guò)程中產(chǎn)生的過(guò)氧化氫，ＣＡＴ降低過(guò)氧化氫對(duì)細(xì)胞的毒害。

飽和石灰水處理香蕉植株７ ｄ后接種尖孢鐮刀菌，香蕉葉片的ＰＯＤ、ＳＯＤ、ＣＡＴ酶活性均大于對(duì)照，說(shuō)明石灰水能提高植株清除過(guò)氧化氫和自由基的能力，從而提高植物對(duì)不良環(huán)境的抗性。石灰水能誘導(dǎo)香蕉對(duì)枯萎病產(chǎn)生抗性。

串珠鐮刀菌懸浮液接種香蕉植株７ ｄ后接種尖孢鐮刀菌，香蕉葉片的ＳＯＤ、ＰＯＤ均低于對(duì)照，說(shuō)明串珠鐮刀菌能破壞植株正常的生理功能，與尖孢鐮刀菌復(fù)合侵染可降低植物對(duì)體內(nèi)有害物質(zhì)的清除能力，從而加重植物病害的發(fā)生。

植物誘導(dǎo)抗病是利用外源誘導(dǎo)因子啟動(dòng)植物自身防衛(wèi)體系，從而使植物對(duì)病原菌產(chǎn)生系統(tǒng)抗性。誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗病性，能控制植物病害，同時(shí)不污染環(huán)境，利于農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展。

試驗(yàn)以串珠鐮刀菌和飽和石灰水作為誘導(dǎo)因子，在田間小區(qū)種植的香蕉植株上測(cè)定植株的防御性酶的活性，以期為香蕉枯萎病大田防治提供相關(guān)根據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

［１］ 夏竹．烏干達(dá)開(kāi)發(fā)出抗香蕉枯萎病的基因［Ｊ］．中國(guó)果業(yè)信息，２００８，２５（４）：２２－２５．

［２］ 許文耀，兀旭輝，林成輝．香蕉枯萎病防治劑的篩選［Ｊ］．福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），２００５，３４（４）：４２０－４２４．

［３］ 陳銑，梁炳坤，何貴源，等．香蕉枯萎病的發(fā)生及防治試驗(yàn)［Ｊ］．廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，２００５（５）：４２－４３．

［４］ 戚佩坤．廣東果樹(shù)真菌病害［Ｍ］．北京：科學(xué)出版社，２０００．

［５］ 陳志誼，許志剛，陸凡，等．拮抗細(xì)菌Ｂ－１９６對(duì)水稻植株的抗性誘導(dǎo)作用［Ｊ］．西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，２００１，１４（２）：４４－４８．

［６］ 李靖，利容千，袁言靜．黃瓜感染霜霉病菌葉片中一些酶活性的變化［Ｊ］．植物病理學(xué)報(bào)，１９９１，２１（４）：２７７－２８２．