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    高效液相色譜法測定酸模各部位大黃素含量

    2012-08-21 06:41:10黃愛芳林崇良蔡進章林觀樣
    溫州醫(yī)科大學學報 2012年1期
    關(guān)鍵詞:根莖黃素溫州

    黃愛芳,林崇良,蔡進章,林觀樣

    (1.溫州醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院 藥劑科,浙江 溫州 325000;2.溫州醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院 藥劑科,浙江溫州 325003)

    酸模(Rumex acetosa L.)為蓼科植物,全草均可入藥。主要功能有涼血、解毒、通便、殺蟲?,F(xiàn)代藥學研究表明其具有抑菌、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)和抗感染作用,以及對心血管和肝臟功能的調(diào)節(jié)作用[1]。酸模主要含大黃素、大黃素甲醚、大黃酚、白藜蘆醇、酸模素等化學成分[2]。大黃素具有廣泛的生物活性,具有抗菌抗病毒、抗感染、改善肝腎功能、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤等作用[3]。為更好地控制藥材的質(zhì)量,本實驗對酸模不同藥用部位進行大黃素含量測定。

    1 材料

    1.1 儀器 美國Agilent 1100系列液相色譜儀(四元泵),紫外檢測器;UPWS超純水器(杭州永潔達凈化科技有限公司);TU-1901紫外分光光度計(北京普析通用);KQ-5000DE型數(shù)控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

    1.2 試劑和藥品 大黃素對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:756-8902);甲醇為色譜純;水為超純水;其余試劑均為分析純。藥材樣品采自溫州瑞安荊谷鄉(xiāng),經(jīng)溫州醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院藥劑科林觀樣老師鑒定為蓼科酸模。

    2 方法和結(jié)果

    2.1 色譜條件 色譜柱Zorbax Ecilpse XDB-C18(4.6 mm×150.0 mm,5μm);流動相為甲醇:1%冰醋酸=70:30(V:V);流速:1.5 mL·min-1;柱溫:40 ℃;進樣量:20μL。

    2.2 對照品溶液的制備 精密稱取大黃素對照品5.0 mg,以甲醇溶解并定容至10 mL,搖勻,配成500μg·mL-1的溶液。

    2.3 供試品溶液的制備 取新鮮酸模根、根莖與葉適量于10 ℃陰干。精密稱取根、根莖和葉各5 g研細,置于100 mL具塞錐形瓶中。加入甲醇25 mL,稱定,50 ℃超聲提取30 min,冷卻,再稱定,以甲醇補足損失的質(zhì)量。取1 mL上清液,8000 r/min離心15 min,取上清液600μL備用。

    2.4 線性關(guān)系考察 取500μg·mL-1的對照品溶液,用甲醇稀釋為500、200、50、10、5、1μg·mL-1,按上述色譜條件測定,每個濃度重復3次,進樣量為20μL。以對照品峰面積積分值為縱坐標,以進樣濃度為橫坐標進行線性回歸,得回歸方程為:Y=24.862X+29.723(R=0.9995)。表明大黃素在1~500μg·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

    2.5 精密度試驗 精密吸取同一對照品溶液20μL,按上述色譜條件重復進樣6次,測得大黃素峰面積積分值RSD為1.97%(n=6),表明本法精密度良好。

    2.6 穩(wěn)定性試驗 將供試品溶液在室溫下儲存,在相同色譜條件下,精密吸取同一供試品溶液20μL,分別于0、2、4、8、12、24 h進樣,測定大黃素峰面積積分值,得RSD=2.34%(n=6),表明供試品溶液在試驗期間基本穩(wěn)定。

    2.7 重復性試驗 按“2.3”項制備方法平行配置同一批供試品溶液6份,分別進樣測定大黃素峰面積積分值,得RSD=2.06%(n=6)。

    2.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量(136.02 μg·mL-1)陰干酸模根莖0.5 g各6份研細,分別精密加入大黃素對照品(50μg·mL-1)10、20、30 mL,按樣品溶液制備方法以及上述色譜條件,測定大黃素峰面積,計算回收率,結(jié)果見表1。

    表1 加樣回收率試驗結(jié)果

    圖1 HPLC圖

    2.9 樣品含量測定 精密稱取陰干后酸模根、根莖和葉各5 g(n=6),按“2.3”項制備方法制備供試品溶液,精密吸取20μL供試品溶液進樣,測定大黃素含量。HPLC圖見圖1,結(jié)果見表2。

    表2 樣品中大黃素含量測定結(jié)果(n=6)

    3 討論

    3.1 流動相的選擇 預實驗中我們選擇了兩種流動相系統(tǒng)進行實驗,甲醇:0.1%磷酸=70:30(V:V)與甲醇:0.1%冰醋酸=70:30(V:V),結(jié)果均能達到滿意的分離效果,大黃素峰均達基線分離,峰型對稱。但前者出峰時間太晚,保留時間17.5 min,故選擇甲醇:0.1%冰醋酸=70:30(V:V)作為流動相。

    3.2 提取方法與提取條件的選擇 通過與水提法和醇提法大黃素提取率的比對,我們選擇了超聲輔助提取法,具有實驗操作簡便,產(chǎn)物提取率高的優(yōu)點。制備供試品溶液過程中,選擇提取溶劑的種類以及超聲提取時間和溫度作為考察因素,每個因素取三個水平進行正交試驗,結(jié)果用甲醇50 ℃超聲提取30 min為最佳提取條件。離心過程低于15 min,部分樣品的上清液靜置后仍會出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象,故上清液離心時間應不小于15 min。

    3.3 大黃素含量比較 結(jié)果表明,酸模根大黃素含量為2.7204 mg·g-1,酸模根莖大黃素含量為2.5966 mg·g-1,酸模葉大黃素含量為0.058 mg·g-1,各部位大黃素含量存在差異,酸模根與根莖大黃素含量明顯高于葉中大黃素含量,具有提取價值。本實驗可為酸模藥材質(zhì)量控制提供實驗室依據(jù)。

    [1] 張廣慶,趙海鵬,王振月,等. 酸模屬植物的化學成分與藥理活性研究進展[J].世界科學技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2008,10(5):86-93.

    [2] 王振月,左月明,康毅華,等.毛脈酸模化學成分的研究(Ⅱ)[J].中草藥,2005,36(11):1626-1627.

    [3] 丁艷,黃志華.大黃素藥理作用研究進展[J] .中國藥理與臨床,2007,23(5):236-238.

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