兔vx2聲門上喉癌動(dòng)物模型的建立及雙頸部轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)規(guī)律的觀察

張 品

（遼寧省錦州市中心醫(yī)院耳鼻咽喉科，遼寧 錦州 121001）

聲門上型喉癌是指癌腫發(fā)生于聲帶以上部位，包括會(huì)厭癌、室?guī)О?huì)厭室?guī)О┑萚1]。由于聲門上區(qū)有豐富的淋巴網(wǎng)，因而易發(fā)生頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。聲門上型喉癌治療失敗的主要原因是頸淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)，也是喉癌致死的主要原因[2]。對(duì)頸部隱匿性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診

斷和治療現(xiàn)已成為聲門上癌治療成敗的關(guān)鍵。如何術(shù)前、術(shù)中確定頸部轉(zhuǎn)移灶，盡可能減少過度手術(shù)治療給患者造成的損傷是目前研究的熱點(diǎn)[3]。要想對(duì)頸淋巴轉(zhuǎn)移的診治有進(jìn)一步的了解，就要對(duì)腫瘤的進(jìn)展和相伴隨的淋巴轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)做進(jìn)一步的研究，即建立動(dòng)物模型進(jìn)行研究。兔VX2腫瘤廣泛應(yīng)用于各種器官的腫瘤模型，其特點(diǎn)是腫瘤易于生長(zhǎng)，生長(zhǎng)速度快。本實(shí)驗(yàn)主要研究出現(xiàn)頸淋巴轉(zhuǎn)移與時(shí)間的關(guān)系以及出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的部位。及不同部位的癌腫雙頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移特點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象

Vx2瘤珠，60只新西蘭大白兔。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 vx2瘤的種植傳代

VX2瘤細(xì)胞株，調(diào)配1640培養(yǎng)液至1×107/mL活細(xì)胞濃度，取1mL瘤細(xì)胞液注射于兔后腿外側(cè)肌肉內(nèi)，2周左右可形成實(shí)質(zhì)性包塊，即制成傳種兔。

1.2.2 制備組織塊懸液

無菌條件下切取傳種兔后腿實(shí)體瘤，放置于盛有20ml1640液的玻璃皿中，取瘤體邊緣生長(zhǎng)旺盛的組織，剪切成泥，離心沉淀后，加1640培養(yǎng)液配制成組織塊懸液20mL。

1.2.3 麻醉方法

實(shí)驗(yàn)兔60只，雌雄不限，體重2.0～30.kg。每只以10%水合氯醛（5mg/kg）進(jìn)行腹腔注射。

1.2.4 vx2腫瘤組織懸液接種

實(shí)驗(yàn)兔以小兒支撐喉鏡暴漏會(huì)厭，上頜竇穿刺針于會(huì)厭舌面接種0.3mL瘤液。

1.3 組織病理學(xué)檢查

在接種后第1、2、3、4周分4次處死動(dòng)物，（在時(shí)間觀察選擇點(diǎn)上，本次研究檢測(cè)第1、2、3、4周的情況，是由于既往預(yù)實(shí)驗(yàn)中及參考其他類似實(shí)驗(yàn)的選擇[4]）肉眼觀察喉部腫瘤生長(zhǎng)情況，解剖雙側(cè)頸部淋巴結(jié)。行病理學(xué)檢查 。結(jié)果：①模型一般情況：種植瘤兔60只，隨機(jī)數(shù)字法分成4組，每組15只，分別在接種VX2瘤珠后，于第一、二、三、四周分4批處死動(dòng)物，原位接種成功了60個(gè)。接種成功率100%。觀察結(jié)果：在第1周15只瘤兔中未出現(xiàn)頸內(nèi)靜脈旁淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。在第2周15只瘤兔中有9只瘤兔出現(xiàn)患側(cè)頸內(nèi)靜脈旁淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，對(duì)側(cè)頸內(nèi)靜脈旁未見淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，第3周15只瘤兔中有9只瘤兔出現(xiàn)患側(cè)內(nèi)靜脈旁淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的情況，對(duì)側(cè)頸內(nèi)靜脈旁有6只出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。而在第4周14只瘤兔中患側(cè)頸內(nèi)靜脈旁均出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的情況。對(duì)側(cè)有10只出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。②原發(fā)灶瘤體觀察：所有腫瘤經(jīng)病理證實(shí)為V X 2 鱗狀細(xì)胞癌.

2 原發(fā)灶瘤體觀察

形態(tài)學(xué)觀察：腫瘤部位明顯隆起，表面粘膜糜爛，形成潰瘍。病理學(xué)檢查：光鏡下觀察：癌細(xì)胞排列緊密呈實(shí)體巢狀，間質(zhì)結(jié)締組織少， 高倍鏡下見癌細(xì)胞大小和形態(tài)不一，胞漿豐富，淡紅染色，未見角化珠;核大而畸形，核膜清楚，核仁明顯，核分裂相多見。

3 頸部淋巴結(jié)解剖及病理學(xué)檢查

形態(tài)學(xué)觀察：淋巴結(jié)較硬，無明顯包膜，切面呈灰白色魚肉狀。

光鏡下觀察：細(xì)胞以多邊形為主。HE染色見細(xì)胞輕度嗜堿，核大，核質(zhì)比例異常，細(xì)胞呈異型性明顯，可見較多核分裂象，鏡下顯示正常淋巴結(jié)結(jié)構(gòu)消失，大量腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)。

4 討 論

4.1 本次實(shí)驗(yàn)瘤珠種植部位偏于一側(cè)目的在于觀察不同時(shí)間段同側(cè)淋巴結(jié)及對(duì)側(cè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移出現(xiàn)的先后次序。本次實(shí)驗(yàn)表明成瘤部位最先在患側(cè)出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，隨著瘤體的不斷生長(zhǎng)、浸潤(rùn)，對(duì)側(cè)也出現(xiàn)淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移。這也符合我們臨床上聲門上喉癌淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移規(guī)律，聲門上喉癌最先在同側(cè)出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，到中晚期雙側(cè)均出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

4.2 腫瘤動(dòng)物模型的建立在腫瘤研究中具有重要價(jià)值，理想的動(dòng)物模型要求在發(fā)生部位、組織學(xué)類型、生物學(xué)行為等方面盡量與所對(duì)應(yīng)的人類腫瘤相似。目前喉癌裸鼠動(dòng)物模型研究較多，但由于所移植的腫瘤均表現(xiàn)為血源性轉(zhuǎn)移，所以裸鼠中移植的喉癌模型對(duì)于研究頸淋巴轉(zhuǎn)移意義不大。兔 VX2腫瘤是一種來源于 Shope病毒致乳頭瘤惡變形成的鱗狀上皮細(xì)胞惡性腫瘤，屬于鱗狀細(xì)胞癌。1940年建株保存 經(jīng) 72次傳代培養(yǎng)后建立起來的仍可在兔體內(nèi)種植的腫瘤細(xì)胞株。它可接種在兔的肝臟、腎臟、肌肉等處[5]。兔VX2模型具有：①其特點(diǎn)是性質(zhì)穩(wěn)定，移植成瘤率時(shí)間短，成瘤率高。②實(shí)驗(yàn)成本低于細(xì)胞培養(yǎng)方法，操作簡(jiǎn)單，易推廣。③嚙齒類動(dòng)物頸外動(dòng)脈管徑小，為動(dòng)脈給藥等局部治療實(shí)驗(yàn)帶來操作困難。較大的動(dòng)物有其無法比擬的優(yōu)勢(shì)，如取血量大等。④ Dunne[6]等專門對(duì)兔頸部淋巴結(jié)區(qū)域引流進(jìn)行了系統(tǒng)研究，證實(shí)其與人類頸部淋巴結(jié)分布極其相似。因此兔vx2聲門上喉癌動(dòng)物模型是研究腫瘤侵襲及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的良好模型。

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