水產(chǎn)品中四環(huán)素類藥物殘留檢測(cè)方法研究

李紅梅，鄒 潔，楊建濤，李潔莉，尤繼明，徐德寧，韓 華，楊抗震

（1.江蘇省寶應(yīng)縣產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，江蘇 寶應(yīng)225800；2.國(guó)家有機(jī)食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，江蘇 寶應(yīng)225800；3.江蘇省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，江蘇 南京210029；4.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 林學(xué)院環(huán)境系，河南 鄭州450002）

1 引言

四環(huán)素類抗生素（tetracycline antibiotics）是由放線菌產(chǎn)生的一類廣譜抗生素，由于實(shí)用性高且價(jià)格低廉，在畜禽養(yǎng)殖和飼料添加劑等方面得到了廣泛的應(yīng)用。近年來，我國(guó)的養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展步伐加快，水產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，水產(chǎn)品總量連續(xù)幾年居世界第一，2005年產(chǎn)量已超過4 000萬t[1～4]。隨著集約化水產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，魚類疾病也越來越復(fù)雜，魚藥和抗生素飼料添加劑的使用量也日漸增加，由于濫用藥物，導(dǎo)致了漁藥大量殘留，嚴(yán)重影響了水產(chǎn)品的質(zhì)量安全。因此，為了保障水產(chǎn)品質(zhì)量安全，消除貿(mào)易壁壘，就必須加快對(duì)藥物殘留分析方法的研究。為此本文對(duì)水產(chǎn)品中四環(huán)素類藥物殘留的檢測(cè)方法進(jìn)行了分析研究。

目前，四環(huán)素類抗生素殘留檢測(cè)方法很多，大致分為3類，一是生物測(cè)定法[5～7]，包括微生物測(cè)定法（microbiological assay）、放射受體測(cè)定法（redio receptor assay）等；二是儀器分析法[8～20]，包括波譜分析、紫外分析，熒光分析，高效液相色譜分析，氣相色譜分析，液質(zhì)聯(lián)用分析等；三是免疫分析法[21，22]，包括酶聯(lián)免疫測(cè)定法（EIA，ELISA）、膠體金免疫層析法等。

2 微生物測(cè)定法

微生物測(cè)定法是目前公認(rèn)而又廣泛應(yīng)用于測(cè)定抗生素的測(cè)定方法，也是目前我國(guó)藥典中引用的標(biāo)準(zhǔn)方法，主要有紙片擴(kuò)散法、微生物管碟法、E～test法等。

2.1 紙片擴(kuò)散法

紙片擴(kuò)散法（paper disc，簡(jiǎn)稱PD法），是依據(jù)抗生素能夠抑制微生物的生長(zhǎng)繁殖這一特性而設(shè)計(jì)的[5，6]。其原理就是將樣品提取液加一定量在紙片上，并貼在菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基上，一段時(shí)間后測(cè)其抑菌圈的大小。如果水產(chǎn)品中存在抗生素殘留，則其樣品提取液可以抑制微生物的生長(zhǎng)；反之則微生物的生長(zhǎng)不會(huì)受到抑制，而水產(chǎn)品中抗生素殘留的多少則可以根據(jù)對(duì)微生物的抑制程度來判斷。

2.2 管碟法

管碟法是國(guó)內(nèi)外常用的抗生素微生物檢定法[1]，利用管碟法測(cè)定抗生素效價(jià)，具有準(zhǔn)確、直觀、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，因而被廣泛采用。其基本原理同PD法，利用抗生素在攤布特定實(shí)驗(yàn)菌的固體培養(yǎng)基內(nèi)呈球面形擴(kuò)散，形成含一定濃度抗生素球形區(qū)，抑制了實(shí)驗(yàn)菌的繁殖而呈現(xiàn)出透明的抑菌圈。根據(jù)抗生素在一定濃度范圍內(nèi)，對(duì)數(shù)劑量與抑菌圈直徑（面積）呈線性關(guān)系，比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品兩者對(duì)接種的實(shí)驗(yàn)菌產(chǎn)生抑菌圈的大小，計(jì)算出供試品的效價(jià)[7]。但整個(gè)試驗(yàn)過程中影響結(jié)果的因素很多，任何一個(gè)環(huán)節(jié)的操作不當(dāng)就會(huì)造成很大誤差，導(dǎo)致整組試驗(yàn)失敗。

微生物法雖然原理及操作簡(jiǎn)單，費(fèi)用低，一般實(shí)驗(yàn)室都能操作，但是測(cè)定所花的時(shí)間太長(zhǎng)，靈敏度低，結(jié)果誤差較大。在測(cè)定時(shí)樣品需在pH值為4.5的條件下培育3～4h，而有些抗生素，例如土霉素、四環(huán)素在酸性條件下易發(fā)生差向異構(gòu)化，形成異構(gòu)體難于分離，而其抗菌活性減弱或完全消失，限制了此方法的使用。

3 儀器分析法

目前，水產(chǎn)品中四環(huán)素類藥物殘留的常用的儀器檢測(cè)方法主要有液相色譜法（HPLC）及液相色譜～串聯(lián)質(zhì)譜法（LC～MS/MS）。

3.1 液相色譜分析法

高效液相色譜更適宜于分離、分析高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、有生理活性及相對(duì)分子量比較大的物質(zhì)，因而廣泛應(yīng)用于藥物殘留的分析檢測(cè)。

袁冬梅等[12]采用乙酸乙酯（1mol/L）＋乙酸鎂（0.005mol/L）＋EDTA（0.001mol/L）的混合液提取樣品，并用此混合液和甲醇以72：28（V/V）作為流動(dòng)相分離土霉素、金霉素和四環(huán)素，最低檢出限分別為0.013mg/g、0.016mg/g、0.014mg/g。

徐傳梅[13]等采用CaCl2衍生化，樣品經(jīng)5%HClO4除蛋白后，離心過濾。采用 Waters XTerra RP18（5μm，4.6×150mm）色譜柱，以 V（甲醇）∶V（CaCl2緩沖液）＝30∶70（pH 值為6.6）為流動(dòng)相，等度洗脫，流速0.8mL/min，柱溫25℃。經(jīng)CaCl2緩沖液衍生化，在激發(fā)波長(zhǎng)（Zx）350nm和發(fā)射波長(zhǎng)（Zm）520nm處檢測(cè)土霉素、四環(huán)素和金霉素的殘留量，土霉素的最小檢測(cè)限為1.48ng/mL，四環(huán)素為1.20ng/mL，金霉素為2.32ng/mL。

黃志勇[14]等人采用4%高氯酸溶液提取樣品中的殘留抗生素，經(jīng)濃縮處理，以乙腈和0.01mol/L NaH2PO4（18∶82，v/v）為流動(dòng)相，流速1mL/min，3種抗生素組分峰能與雜質(zhì)峰完全分開，檢測(cè)波長(zhǎng)為355mm，最低檢出限為0.08mg/g。

北京化工大學(xué)的王覃[15]等人以醋酸銨～醋酸/水緩沖液和乙腈作為流動(dòng)相，通過二元梯度洗脫，使海產(chǎn)品中四環(huán)素類抗生素得到了較好的分離，最低檢出限在15～32mg/kg。

浙江任一平[16]等人用高效液相色色譜對(duì)動(dòng)物性食品中土霉素和四環(huán)素進(jìn)行測(cè)定，樣品經(jīng)含乙二胺四乙酸二鈉的丁二酸鈉緩沖液除蛋白后，由SPE～C18小柱提純凈化，經(jīng)ODS～C18柱分離后，用8%氫氧化鋯溶液柱后衍生，與鋯離子的螯合物在激發(fā)波長(zhǎng)（EX）：406nm 和發(fā)射波長(zhǎng)（Em）：515nm 處檢測(cè)，土霉素和四環(huán)素的最低檢出限為3mg/L和4mg/L。

楊挺[17]等人建立了一種高效液相色譜法測(cè)定水產(chǎn)品中土霉素、四環(huán)素、去甲基金霉素、金霉素、脫氧土霉素的分析方法。樣品用5.0%高氯酸溶液提取，上清液用Oasis HLB固相萃取柱凈化，用紫外檢測(cè)器于355nm測(cè)定。土霉素、四環(huán)素、去甲基金霉素檢測(cè)限為0.01mg/kg，金霉素、脫氧土霉素檢出限為0.02mg/kg。

從上面高效液相色譜檢測(cè)方法來看，樣品前處理多采用高氯酸等強(qiáng)酸或者M(jìn)CI緩沖液提取，經(jīng)固相萃取柱（C18或者HLB）凈化后，儀器柱后衍生檢測(cè)[2]。四環(huán)素類抗生素在酸性和堿性條件下均不穩(wěn)定，四環(huán)素類藥物中含有許多羥基、烯醇羥基及羰基，在中性條件下能與多種金屬離子形成不溶性螯合物，儀器檢測(cè)時(shí)候會(huì)出現(xiàn)幾個(gè)峰，通過保留時(shí)間不易對(duì)結(jié)果進(jìn)行判斷，容易出現(xiàn)假陽性；而且緩沖溶液配制較為復(fù)雜，樣品要經(jīng)過固相萃取凈化，前處理比較復(fù)雜，而且利用復(fù)雜的緩沖鹽對(duì)儀器柱子的壽命有很大的影響，加上儀器分析技術(shù)的局限，難以適應(yīng)大量復(fù)雜樣品和現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的需要。

3.2 液質(zhì)聯(lián)用分析法

近年來，隨著液質(zhì)的普遍應(yīng)用，由于其更加可靠，定量更加靈敏準(zhǔn)確，能夠去除假陽性干擾，特異性強(qiáng)，液質(zhì)聯(lián)用（LC～MS/MS）技術(shù)愈來愈多的應(yīng)用于獸藥殘留的確證檢測(cè)。

劉艷萍[18]等人用高效液相色譜～串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水產(chǎn)品中的4種四環(huán)素類藥物殘留量，以MTC緩沖液提取水產(chǎn)品中的四環(huán)素類殘留物，經(jīng)HLB固相萃取柱凈化，采用LC～MS/MS選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)（SRM）正離子模式測(cè)定，可一次對(duì)水產(chǎn)品中的四環(huán)素、土霉素、金霉素和強(qiáng)力霉素進(jìn)行定性和定量。4種物質(zhì)最低檢出限均可達(dá)到2.0μg/kg。

洪武興[19]等人用液質(zhì)聯(lián)用法檢測(cè)水產(chǎn)品中四環(huán)素類殘留，樣品利用乙酸乙腈提取，氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)靡译嫠芙夂?，加入正己烷去除脂肪等雜質(zhì)，取乙腈水相過0.45μm濾膜上機(jī)檢測(cè)，采用子離子定量，四環(huán)素類藥物的檢測(cè)限均可達(dá)到20μg/kg。

林荊[20]等人用超高效液相色譜～串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC～MS/MS）法測(cè)定水產(chǎn)品中6種四環(huán)素。樣品粉碎后，用0.01mol/L Na2EDTA～Mcllvaine磷酸鹽緩沖溶液提取，樣液過濾后正己烷除脂，經(jīng)Oasis HLB固相萃取柱凈化，甲醇洗脫，氮?dú)獯蹈删彌_液定容后，用反相液相色譜分離，電噴霧正離子模式離子化，用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）監(jiān)測(cè)，三重四級(jí)桿質(zhì)譜測(cè)定，外標(biāo)法定量。該法對(duì)四環(huán)素類藥物在5.0～50.0μg/kg范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r在0.996 9～0.999 9之間，在5.0、10.0、25.0、50.0μg/kg添加水平，回收率為61%～97%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.3%～5.7%，其檢出限達(dá)2.5μg/kg。

液相色譜～串聯(lián)質(zhì)譜儀法測(cè)定水產(chǎn)品中四環(huán)素類藥物殘留，由于以子離子和母離子定性和定量，消除了假陽性，而且樣品前處理比液相色譜簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便，穩(wěn)定性好，選擇性好，靈敏度高，檢出限低，能夠達(dá)到歐盟和日本等國(guó)家對(duì)進(jìn)口水產(chǎn)品最高殘留量的要求。

液質(zhì)聯(lián)用法的缺點(diǎn)就是儀器比較昂貴，對(duì)人員要求比較高，技術(shù)復(fù)雜，使用起來費(fèi)用比較高，普遍性較差，但是隨著社會(huì)的發(fā)展，利用液質(zhì)聯(lián)用法檢測(cè)獸藥殘留是將是未來的發(fā)展趨勢(shì)。

4 免疫分析法

4.1 酶聯(lián)免疫法

酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定法，簡(jiǎn)稱酶聯(lián)免疫法，或者ELISA法[21]。它的中心就是讓抗體與酶復(fù)合物結(jié)合，然后通過顯色來檢測(cè)。酶聯(lián)免疫試劑盒是酶免疫測(cè)定技術(shù)中應(yīng)用最廣的技術(shù)。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體（聚苯乙烯微量反應(yīng)板）表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行，用洗滌法將液相中的游離成分去除。自從Engvall和Perlman（1971）首次報(bào)道建立ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫試劑盒）（Enzyme～Linked ImmunosorbentAssays，ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫試劑盒）以來，由于ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，酶聯(lián)免疫試劑盒）具有快速、敏感、簡(jiǎn)便、易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)，使其得到迅速的發(fā)展和廣泛應(yīng)用。

四環(huán)素類藥物殘留檢測(cè)試劑盒能在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行大批量樣品的篩選，又不需要復(fù)雜昂貴的大型儀器，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、樣品預(yù)處理簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。我國(guó)農(nóng)業(yè)部1025號(hào)公告～20～2008中動(dòng)物性食品中四環(huán)素類藥物殘留檢測(cè)采用的是酶聯(lián)免疫吸附法。

4.2 膠體金免疫層析法

膠體金免疫層析法即時(shí)檢驗(yàn)技術(shù)（或稱“側(cè)流免疫層析技術(shù)”和“免疫膠體金技術(shù)”等）是20世紀(jì)90年代以來在單克隆抗體技術(shù)、免疫層析技術(shù)及膠體金顯色技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一項(xiàng)新型體外診斷技術(shù)。近年來發(fā)展迅速，目前已經(jīng)在農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)、環(huán)境檢測(cè)、尤其是在家庭自檢領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。

四環(huán)素類藥物為廣譜抑菌劑，高濃度時(shí)具殺菌作用。其作用機(jī)制在于藥物能特異性地與細(xì)菌核糖體30S亞基的A位置結(jié)合，阻止氨基?！玹RNA在該位上的聯(lián)結(jié)，從而抑制肽鏈的增長(zhǎng)和影響細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成。

檀尊社[22]等人采用免疫競(jìng)爭(zhēng)法，將抗四環(huán)素單克隆抗體～膠體金復(fù)合物包被在膠體金結(jié)合墊上，并將人工合成的四環(huán)素抗原包被在硝酸纖維素薄膜表面作為檢測(cè)線（線），其殘留藥物與待測(cè)樣品中四環(huán)素競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合膠體金標(biāo)記的四環(huán)素單克隆抗體，最終能以顏色直觀顯示檢測(cè)結(jié)果。檢測(cè)水產(chǎn)品試樣時(shí)，試劑靈敏度最低值可達(dá)100ng/mL，僅需5～10min，與金霉素、土霉素、強(qiáng)力霉素等四環(huán)素族抗生素有很強(qiáng)的交叉反應(yīng)，故可同時(shí)檢測(cè)四環(huán)素族中幾種主要抗生素，而與沙丁胺醇、萊克多巴胺等其他獸藥無交叉反應(yīng)。操作方便，僅需配備小型離心機(jī)，檢測(cè)成本低廉。

免疫方法能夠在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行大批量樣品的篩選，又不需要復(fù)雜昂貴的大型儀器，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、樣品預(yù)處理簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。但是對(duì)于藥殘檢測(cè)試劑盒的研發(fā)相對(duì)遲緩，免疫法對(duì)實(shí)驗(yàn)室溫度、光線、使用溶劑要求較高，而且試劑盒使用起來比較昂貴，限制了其普遍應(yīng)用。

5 問題和展望

微生物法是最早用于四環(huán)素類藥物殘留檢測(cè)的方法之一。微生物法測(cè)定四環(huán)素類抗生素，在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)抑菌圈不是很規(guī)則，直徑大小不一致，由此計(jì)算并繪制出的濃度曲線不準(zhǔn)確，導(dǎo)致最終得出的樣液測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確，所以該種方法只能用于定性試驗(yàn)。

液相色譜法靈敏度能夠達(dá)到要求，是現(xiàn)階段普遍采用的方法之一，但是前處理比較復(fù)雜，用的試劑都是有機(jī)試劑，容易污染環(huán)境，對(duì)人體造成傷害，而且四環(huán)素類藥物在酸性和堿性條件下容易發(fā)生異構(gòu)化，在儀器上檢測(cè)容易出現(xiàn)假陽性。液質(zhì)聯(lián)用法前處理比較簡(jiǎn)單，耗時(shí)少，靈敏度高，檢出限低，滿足檢測(cè)要求，是未來的發(fā)展趨勢(shì)。

酶聯(lián)免疫試劑盒的研制在我國(guó)還是比較落后的，隨著技術(shù)的提高，酶聯(lián)免疫試劑盒測(cè)定藥物殘留能夠大大提高檢測(cè)效率和滿足多樣品的同時(shí)檢測(cè)。隨著方法的不斷改進(jìn)、材料的不斷更新，使其更為簡(jiǎn)便實(shí)用，因此標(biāo)準(zhǔn)化免疫法能夠成為藥物殘留的快速檢測(cè)方法。

6 結(jié)語

水產(chǎn)品中四環(huán)素類殘留是涉及人類健康的問題，應(yīng)加強(qiáng)檢測(cè)工作，提高檢測(cè)效率，降低檢測(cè)成本，并努力研究發(fā)展一些簡(jiǎn)單、快速和便攜化的篩選多殘留分析技術(shù)，普及廣大企業(yè)的出廠檢驗(yàn)，如試劑盒檢測(cè)；發(fā)展高效、高靈敏的聯(lián)用技術(shù)和多殘留組分確證技術(shù)，如LC～MS/MS；實(shí)現(xiàn)分析過程自動(dòng)化或智能化，以提高分析效率、降低成本，保證消費(fèi)者的健康。

[1]孔凡真.我國(guó)肉類企業(yè)的現(xiàn)狀與展望[J].山東食品科技，2004，6（5）：3～5.

[2]郭 霞，王慶賀，王 申，等.水產(chǎn)品中四環(huán)素類抗生素殘留檢測(cè)方法的比較和探討[J].水產(chǎn)科技情報(bào)，2008，35（3）：129～132.

[3]Masahiko T，Shigeki D，Taketoshi N.Determination of chloramphenicol residues in fish meats by liquid chromatography～atmospheric pressure photoionization mass spectrometry[J].Journal of Chromatography A，2003（1011）：67～75.

[4]Pascal M，Veronique P，Eric G.Determination of the antibiotic chloramphenicol in meat and seafood products by liquid chromatography～electrospray ionization tandem mass spectrometry[J].Journal of Chromatography A，2003（994）：75 ～ 84.

[5]鄧 斌，鄧春來，張 曦.牛奶中抗生素殘留及其檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J].飼料安全，2002，（24）：19～22.

[6]陳 宏.水產(chǎn)品中幾種常見漁藥殘留檢測(cè)方法的研究[J].科技創(chuàng)新導(dǎo)報(bào)，2009，18：255～256.

[7]任董春.淺談抗生素微生物檢定～管碟法操作注意要點(diǎn)[J].安徽醫(yī)藥，2003，7（3）：230.

[8]陳士恩，程燕平，阿依木古麗，等.固相萃取～高效液相色譜檢測(cè)牛肉中四環(huán)素類抗生素殘留[J].西北民族大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2011，81（32）：62～67

[9]陸 梅，高 翔，李淑文.高效液相色譜法測(cè)定水產(chǎn)品中四環(huán)素類抗生素殘留[J].環(huán)境監(jiān)測(cè)管理與技術(shù)，2008，5（20）：38～39.

[10]劉 麗，蔡志斌，張 英.高效液相色譜法測(cè)定水產(chǎn)品中土霉素、四環(huán)素、金霉素[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2007，8（17）：1 405～1 406.

[11]吉彩霓，岳振峰，謝麗琪，等.高效液相色譜法同時(shí)檢測(cè)水產(chǎn)品中7種四環(huán)素類抗生素殘留的研究[J].中國(guó)獸醫(yī)科技，2005，35（10）：820～826.

[12]袁冬梅，李一婧.養(yǎng)殖水產(chǎn)品中四環(huán)素類抗生素殘留的高效液相色譜測(cè)定法[J].食品工業(yè)科技，2008，29（01）：281～285.

[13]許傳梅，星玉秀，董 琦，等.肉類及水產(chǎn)品中四環(huán)素類抗生素殘留量的高效液相色譜測(cè)定方法[J].分析實(shí)驗(yàn)室，2007，12（26）：258～260.

[14]黃志勇，蔡洪基，黃高凌，等.水產(chǎn)品中四環(huán)素類抗生素殘留量的高效液相色譜測(cè)定方法[J].福建分析測(cè)試，2005，14（1）：2 093～2 105.

[15]王 覃，陳大舟，湯 燁，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定海產(chǎn)品中四種抗生素的分析方法[J].北京化工大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，5（33）：90～93.

[16]任一平，徐 威，黃百芬.用柱后衍生熒光測(cè)定法檢測(cè)食品中土霉素和四環(huán)素殘留[J].浙江科技學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，11（15）：50～53.

[17]楊 挺，王立君，趙 健，等.高效液相色譜法測(cè)定水產(chǎn)品中四環(huán)素類抗生素殘留[J].化學(xué)分析計(jì)量，2007，2（16）：35～36.

[18]劉艷萍，冷凱良，王清印，等.高效液相色譜～串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水產(chǎn)品中的4種四環(huán)素類藥物殘留量[J].研究學(xué)報(bào)，2009，4（33）：34～39.

[19]洪武興，孫良娟，劉益峰，等.液質(zhì)聯(lián)用法檢測(cè)水產(chǎn)品中四環(huán)素類殘留[J].現(xiàn)代食品科技，2010，7（26）：756～758.

[20]林 荊，張金虎，鄭 宇，等.水產(chǎn)品中四環(huán)素類藥物殘留的超高效液相色譜～串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定[J].食品科學(xué)，2010，20（31）：286～289.

[21]李亞琳，張俊升，王欽暉.酶聯(lián)免疫法測(cè)定牛奶中四環(huán)素類藥物的殘留量[J].云南畜牧獸醫(yī)，2005（2）：27.

[22]檀尊社，陸 恒，邵 偉，等.膠體金免疫層析法快速檢測(cè)水產(chǎn)品中四環(huán)素類藥物殘留[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2010，19（8）：32～37.