阿苯達(dá)唑?qū)ΨN兔感染腦炎原蟲(chóng)的防治研究

潘耀謙，劉興友，馮春花，趙振升，李瑞珍，劉志科，李會(huì)珍，孫玉倩

（1.河南科技學(xué)院動(dòng)物疫病和殘留物防控河南省高校工程技術(shù)研究中心，河南新鄉(xiāng)453003；2.新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南新鄉(xiāng)453003；3.河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河南洛陽(yáng)471003）

腦炎原蟲(chóng)病是一種人獸共患的原蟲(chóng)性寄生蟲(chóng)病，臨床上以隱性感染或慢性感染為特點(diǎn)，一般沒(méi)有明顯的臨床癥狀，只有當(dāng)腦炎原蟲(chóng)侵及大腦并形成特異性肉芽腫病變時(shí)才會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)癥狀的出現(xiàn)。據(jù)報(bào)道，本病以獺兔的感染率和發(fā)病率最高，是研究本病最好的動(dòng)物模型。作者在對(duì)某一兔場(chǎng)的調(diào)查中，發(fā)現(xiàn)商品獺兔感染了腦炎原蟲(chóng)病，于是對(duì)該場(chǎng)的種兔進(jìn)行了調(diào)查和防治研究。大量研究報(bào)道［1-6］，兔腦炎原蟲(chóng)既可水平傳播，引起兔群中不同個(gè)體的相互感染；也可垂直傳播，即由母體傳染給胎兒，形成先天性感染。鑒于此，為了從兔場(chǎng)中根除本病，對(duì)該兔場(chǎng)的115只成齡種兔進(jìn)行了抗兔腦炎原蟲(chóng)抗體的血清學(xué)檢測(cè)和尿沉渣特殊染色的腦炎原蟲(chóng)檢查。結(jié)果發(fā)現(xiàn)18只種兔呈腦炎原蟲(chóng)隱性感染狀態(tài)。根據(jù)腦炎原蟲(chóng)的生物學(xué)特點(diǎn)和致病特性，選用阿苯達(dá)唑?qū)鼓X炎原蟲(chóng)抗體陽(yáng)性感染兔和陰性兔進(jìn)行治療和預(yù)防研究，取得了較好的治療和預(yù)防效果。茲將研究結(jié)果予以報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 種兔的腦炎原蟲(chóng)檢測(cè)及分組 經(jīng)間接ELISA檢測(cè)和尿沉渣腦炎原蟲(chóng)的檢查，115只種兔（年齡1.5～2歲；體重3kg～4kg）中，有18只種兔（雄兔6只，雌兔12只）的血清抗體OD值超過(guò)0.044，即抗腦炎原蟲(chóng)抗體陽(yáng)性，并從16只病兔尿沉渣中檢出腦炎原蟲(chóng)，臨床診斷為感染兔，其余的97只種兔（雄兔16只，雌兔81只）均為抗兔腦炎原蟲(chóng)抗體陰性，尿沉渣中也未檢出腦炎原蟲(chóng)，臨床診斷為未感染兔。隨后，將感染種兔與未感染種兔隔離，分別用阿苯達(dá)唑進(jìn)行治療和預(yù)防研究。

1.1.2 治療藥物 本研究所用的防治藥物為阿苯達(dá)唑，蘇州同仁江南獸藥有限公司產(chǎn)品，生產(chǎn)批號(hào)為080829。制劑與規(guī)格：50mg×100片／袋（用于治療組），阿苯達(dá)唑膠囊200mg×100粒／袋（用于預(yù)防研究）。

1.2 方法

1.2.1 抗兔腦炎原蟲(chóng)抗體的間接ELISA檢測(cè) 采用本課題組研究建立的對(duì)兔腦炎原蟲(chóng)病進(jìn)行特異診斷的間接ELISA檢測(cè)法，對(duì)79份陰性血清的檢測(cè)，其OD值平均為0.026（0.005～0.04），標(biāo)準(zhǔn)差為0.009，經(jīng)計(jì)算其95%正常值上限是0.044。同時(shí)對(duì)63份腦炎原蟲(chóng)的陽(yáng)性血清檢測(cè)，而這63份血清的OD值均在0.044以上（0.05～0.11）。因此，確定將被檢血清的OD值高于0.044者判為陽(yáng)性，等于或低于0.044者判為陰性。

1.2.2 尿沉渣的特殊染色對(duì)腦炎原蟲(chóng)的檢查 采取待檢兔的尿液（如果尿液中尿酸鹽含量較高，尿液混濁濃稠時(shí)，可用生理鹽水等比例混勻，室溫放置10min后再離心），經(jīng)3 000r／min離心10min后，棄去上清，用沉淀涂片，丙酮固定，經(jīng)革蘭和Goodpasture染色后鏡檢，如在脫落的腎小管上皮細(xì)胞中檢出腦炎原蟲(chóng)或假囊，就定為腦炎原蟲(chóng)陽(yáng)性。

1.2.3 治療用藥 首次按60mg／kg劑量的阿苯達(dá)唑直接口服給藥，此后每間隔12h按40mg／kg給藥1次，用藥7d停藥5d為一療程，連續(xù)治療三個(gè)療程。每一療程之后，均采取病兔的血液和尿液分別進(jìn)行ELISA檢測(cè)和尿液中腦炎原蟲(chóng)的檢查。

1.2.4 預(yù)防用藥 按50mg／kg劑量的阿苯達(dá)唑拌料飼喂，用藥7d間隔10d為一個(gè)預(yù)防期，連用兩個(gè)預(yù)防期，之后進(jìn)行血清抗體OD值檢測(cè)和尿沉渣的腦炎原蟲(chóng)檢查。

2 結(jié)果

2.1 感染種兔的治療結(jié)果

經(jīng)臨床檢查從種兔中檢出的腦炎原蟲(chóng)感染兔均為成年兔，治療時(shí)所使用的阿苯達(dá)唑劑量，比治療商品兔所使用的藥量高一些，經(jīng)過(guò)三個(gè)療程后，取得了較滿意的結(jié)果。

第一個(gè)療程后，病兔的OD值大多有不同程度的降低，其中以2號(hào)、3號(hào)、10號(hào)和15號(hào)的變化更為明顯，其OD值接近0.044。但7號(hào)和13號(hào)的OD值變化不明顯。尿沉渣檢查，除2號(hào)、3號(hào)、8號(hào)、10號(hào)和15號(hào)種兔未檢出蟲(chóng)體外，其他病兔均可檢出腦炎原蟲(chóng)。

第二個(gè)療程后，2號(hào)、3號(hào)、10號(hào)和15號(hào)病兔的OD值已低于0.044，即抗腦炎原蟲(chóng)抗體轉(zhuǎn)變?yōu)殛幮裕渌⊥玫腛D值也接近于0.044，但7號(hào)和13號(hào)病兔的OD值雖然有所降低，但仍然較高。尿沉渣檢查，除4號(hào)、7號(hào)和13號(hào)病兔的尿沉渣中仍能檢出少量蟲(chóng)體外，其他病兔的尿液中均未檢出腦炎原蟲(chóng)。

第三個(gè)療程后，除7號(hào)（母兔）和13號(hào)（母兔）病兔的血清抗體OD值仍為陽(yáng)性外，其他病兔的OD值均為陰性。尿沉渣檢查，全部病兔的尿液中均未檢出腦炎原蟲(chóng)。

隨后，將血清抗體OD值仍為陽(yáng)性的7號(hào)和13病兔剖檢，發(fā)現(xiàn)腎臟表面有大量凹陷，呈典型的間質(zhì)性腎炎變化（圖1），組織切片上可在局部腎小管間見(jiàn)有大量結(jié)締組織增生和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)（圖2），但腎小管上皮細(xì)胞中未檢出兔腦炎原蟲(chóng)。大腦組織病理組織學(xué)檢查，在大腦組織中檢出腦炎原蟲(chóng)包囊（圖3），腦組織中有較多的細(xì)胞性和增生性肉芽腫（圖4），但肉芽腫大多位于腦血管周圍或腦白質(zhì)內(nèi)。

圖1 腎表面有大量凹陷，為間質(zhì)性腎炎病變Fig.1 There were lots of pits on renal surface，that is interstitial nephritis lesions

圖2 腎小管間有大量結(jié)締組織增生淋巴細(xì)胞浸潤(rùn) （HE，100×）Fig.2 There was a large number of proliferation of connective tissue and infiltration of lymphocytes among renal tubules（HE，100×）

圖3 大腦組織中檢出腦炎原蟲(chóng)包囊（箭頭）（HE，100×）Fig.3 The cyst of Encephalitozoon cuniculi was checked out in cerebrum （arrow）（HE，100×）

圖4 位于腦組織中的細(xì)胞性肉芽腫 （HE，100×）Fig.4 There was a cellular granuloma found in brain tissue（HE，100×）

2.2 未感染種兔的預(yù)防結(jié)果

為了防止腦炎原蟲(chóng)的水平傳播，對(duì)ELISA檢測(cè)陰性的種兔用阿苯達(dá)唑進(jìn)行了預(yù)防研究。按照既定的預(yù)防給藥方法，經(jīng)過(guò)兩個(gè)預(yù)防期后，經(jīng)間接ELISA檢測(cè)，全部預(yù)防種兔的血清抗體OD值均低于0.044，即抗兔腦炎原蟲(chóng)抗體陰性反應(yīng)。尿沉渣特殊染色后光鏡檢查，未檢出兔腦炎原蟲(chóng)，部分種兔的尿沉渣做負(fù)染色后進(jìn)行電鏡檢查，也未檢出蟲(chóng)體。

3 討論

曾對(duì)商品獺兔治療研究證明，阿苯達(dá)唑?qū)δX炎原蟲(chóng)病具有良好的治療效果。因?yàn)楸舅幬锏乃幋鷦?dòng)力學(xué)和作用機(jī)理與兔腦炎原蟲(chóng)的結(jié)構(gòu)和寄生特點(diǎn)有關(guān)。據(jù)報(bào)道［7-10］，阿苯達(dá)唑吸收后在肝臟轉(zhuǎn)化為丙硫苯咪唑-亞砜才具有殺蟲(chóng)活性。該藥在組織器官的分布依次為肝臟、腎臟和肌肉。它還可透過(guò)血腦屏障到達(dá)腦組織，并在其中保持一定的濃度，而且其代謝產(chǎn)物在24h內(nèi)87%從尿排出，僅有13%從糞便排出。大量研究證明［11-15］，兔腦炎原蟲(chóng)侵害的靶器官主要是腎臟和腦組織，其次是肝臟和肺臟等。在腦炎原蟲(chóng)侵害的主要靶器官中，阿苯達(dá)唑藥物的濃度都很高，故可具有明顯的殺蟲(chóng)作用，起到良好的治療效果。但值得注意的是，當(dāng)腦炎原蟲(chóng)進(jìn)入腦組織，并引起腦組織損傷后，治療的效果就會(huì)受到影響。本研究經(jīng)三個(gè)療程治療后，7號(hào)和13號(hào)病兔的抗腦炎原蟲(chóng)抗體OD值一直呈陽(yáng)性反應(yīng)，經(jīng)剖檢后發(fā)現(xiàn)腦炎原蟲(chóng)已侵入腦組織并形成包囊和肉芽腫。

以前的研究證明［7-9］，對(duì)腦炎原蟲(chóng)病的治療，用藥量一定要足，否則影響治療效果。這主要是由于腦炎原蟲(chóng)是細(xì)胞內(nèi)寄生蟲(chóng)之故。當(dāng)腦炎原蟲(chóng)寄生于細(xì)胞內(nèi)時(shí)，存在于組織液中的藥物很難發(fā)揮有效的殺蟲(chóng)作用，只有當(dāng)細(xì)胞破壞后腦炎原蟲(chóng)從細(xì)胞內(nèi)釋出，才能與藥物充分接觸而被殺滅。因此，存在于細(xì)胞間液中的藥物必須經(jīng)常保持較高的濃度，隨時(shí)將從細(xì)胞中釋出的腦炎原蟲(chóng)殺滅。如果組織液中的藥物濃度不高，達(dá)不到殺蟲(chóng)的濃度，那么釋放到組織間的蟲(chóng)體就會(huì)重新侵入新的細(xì)胞而開(kāi)始新的生命周期，使疾病得以持續(xù)，不斷引起組織的損傷。據(jù)報(bào)道［7-10］，阿苯達(dá)唑代謝產(chǎn)生的殺蟲(chóng)成分，丙硫苯咪唑-亞砜在血液中的半衰期為8.5h～10.5h。因此，為了維持強(qiáng)大的殺蟲(chóng)濃度，必須及時(shí)給藥，不可使血中藥物濃度降低。本研究證明，間隔12h給藥一次，收到了良好的治療效果。本研究的用藥劑量比商品兔的（30mg／kg）要高，這主要與成齡兔較幼齡兔的耐受力大、種兔的感染時(shí)間長(zhǎng)、腎臟等靶器官的病損較重有關(guān)。毒理試驗(yàn)表明，阿苯達(dá)唑的毒性小，在體內(nèi)無(wú)蓄積作用，安全范圍廣。試驗(yàn)給小鼠口服阿苯達(dá)唑的LD50大于800mg／kg，犬口服最大耐受量在400mg／kg以上。本次研究雖然比一般的用藥劑量高，但治療期間病兔未出現(xiàn)任何明顯的副作用，治療效果好。

大量研究證明［2-5］，腦炎原蟲(chóng)即可在動(dòng)物與動(dòng)物之間進(jìn)行水平傳播，也可通過(guò)母體胎盤(pán)而傳染給子代，即垂直傳播。因此，兔場(chǎng)一旦感染了兔腦炎原蟲(chóng)，很難徹底清除。本研究用藥物對(duì)有患病兔場(chǎng)的種兔進(jìn)行了藥物預(yù)防，主要目的在于防止垂直傳播，保證由種兔產(chǎn)生的后代未感染腦炎原蟲(chóng)。通過(guò)兩個(gè)預(yù)防期后，雖然這些種兔還是在被污染過(guò)的兔場(chǎng)飼養(yǎng)，但臨床檢查均呈腦炎原蟲(chóng)陰性反應(yīng)。這說(shuō)明阿苯達(dá)唑有良好的預(yù)防效果，用藥物可以防止腦炎原蟲(chóng)的感染。但在污染過(guò)腦炎原蟲(chóng)的兔場(chǎng)，還要注意水平傳播所造成的危害。雖然種兔是單籠飼養(yǎng)的，水平傳播的機(jī)會(huì)較少，但也不能忽視飼養(yǎng)用具和周圍環(huán)境對(duì)種兔飼養(yǎng)的影響。水平傳播所涉及的面較廣，包括與家兔直接接觸或間接接觸的方方面面。因此，為了徹底根除本病，用藥物進(jìn)行預(yù)防僅僅是一種輔助措施，更重要的是一定要制定有效衛(wèi)生防疫措施，搞好周圍的環(huán)境衛(wèi)生，特別是定期給兔舍、兔籠和飼養(yǎng)用具消毒，對(duì)兔排出的廢棄物，要及時(shí)清掃，堆積發(fā)酵，借以消滅隨糞尿排出體外的腦炎原蟲(chóng)。只有及時(shí)治療病兔（特別對(duì)有病的種兔，一定要堅(jiān)決淘汰，杜絕垂直傳播的可能），積極預(yù)防受到威脅的兔，定期消毒和搞好環(huán)境衛(wèi)生，才能從被污染的兔場(chǎng)逐漸根除本病。

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