豬附紅細(xì)胞體病流行病學(xué)調(diào)查及不同藥物治療效果

趙駐軍，蔣祿峰，秦建華

（河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河北保定071001）

豬附紅細(xì)胞體（Eperythrozoon suis）是一種寄生于紅細(xì)胞表面或游離于血漿的病原體，主要引起豬的貧血、黃疸、高熱等，表現(xiàn)為仔豬虛弱和貧血、肥育豬生長(zhǎng)緩慢、母豬繁殖障礙、生產(chǎn)力下降等綜合性癥狀［1-2］。該病多呈隱性感染，不表現(xiàn)出臨床癥狀，但當(dāng)機(jī)體的抵抗力下降，其他病原菌混合感染時(shí)，造成機(jī)體死亡［3-5］。近幾年來(lái)附紅細(xì)胞體在保定市多個(gè)地區(qū)都有發(fā)生，因感染附紅細(xì)胞體或與附紅細(xì)胞體混合感染等多種疫病對(duì)生豬生產(chǎn)造成了很大損失。為了解保定市豬群中豬附紅細(xì)胞體感染情況，有效地防治該病，本研究對(duì)保定市部分地區(qū)不同規(guī)模的豬場(chǎng)進(jìn)行了本病的流行病學(xué)調(diào)查，篩選有效藥物進(jìn)行治療試驗(yàn)，為豬附紅細(xì)胞體病的防治提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器及藥品 Nikon光學(xué)顯微鏡（YS100）；貝尼爾，河北遠(yuǎn)征藥業(yè)生產(chǎn)，批號(hào)：100718；咪唑苯脲，蘭州正豐藥業(yè)公司生產(chǎn)，批號(hào)：100102；鹽酸多西環(huán)素，華北制藥集團(tuán)生產(chǎn)，批號(hào)：100408；磺胺間甲氧嘧啶，華北制藥集團(tuán)生產(chǎn)，批號(hào)：100615；土霉素，河北遠(yuǎn)征藥業(yè)生產(chǎn)，批號(hào)：100427。

1.1.2 血樣 2011年2月至2012年1月，選取唐縣、徐水縣、高碑店、滿城縣、清苑縣、容城縣等6個(gè)縣30個(gè)不同規(guī)模的豬場(chǎng)和20個(gè)散養(yǎng)戶，分別在春、夏、秋、冬不同的季節(jié)，隨機(jī)采集哺乳仔豬、斷奶仔豬、育肥豬、種母豬的靜脈血，共2 040份，加抗凝劑處理后于4℃保存。

1.2 方法

1.2.1 豬附紅細(xì)胞體病原學(xué)檢測(cè)

1.2.1.1 血液壓片鏡檢 取1滴抗凝豬血于載玻片上，再加入等量生理鹽水混勻后，蓋上蓋玻片鏡檢。

1.2.1.2 血液涂片染色鏡檢 取抗凝血涂片后以姬姆薩染色、鏡檢。

1.2.1.3 紅細(xì)胞溶解后鏡檢 經(jīng)血液壓片鏡檢和血液涂片染色鏡檢結(jié)果陽(yáng)性的血液，取1滴此抗凝血于載玻片上，再加1滴1mL／L稀鹽酸溶解紅細(xì)胞鏡檢。

1.2.1.4 碘制動(dòng)試驗(yàn) 經(jīng)血液壓片鏡檢和血液涂片染色鏡檢結(jié)果呈陽(yáng)性的血液，取1滴此抗凝血于載玻片上，再加入等量生理鹽水混勻后，于顯微鏡下觀察附紅細(xì)胞體的各種運(yùn)動(dòng)，而后再加1滴1g／L碘液，觀察其運(yùn)動(dòng)情況是否發(fā)生變化。

1.2.1.5 判斷標(biāo)準(zhǔn) 利用血液壓片和血液涂片染色鏡檢發(fā)現(xiàn)附紅細(xì)胞體的血樣，再用滴加鹽酸或碘液的方法進(jìn)一步確診，以提高附紅細(xì)胞體檢出的準(zhǔn)確性。

陽(yáng)性判定：對(duì)采集的每份血樣涂片，400倍鏡檢。檢查200個(gè)視野，在細(xì)胞上和血漿里只要查到1個(gè)附紅細(xì)胞體存在，此份樣本則判為陽(yáng)性；檢查不到附紅細(xì)胞體，此份樣品判為陰性。

感染強(qiáng)度的判定［3-6］：每份血樣記數(shù)200個(gè)紅細(xì)胞，紅細(xì)胞感染率≤25%的判為＋；25%＜紅細(xì)胞感染率≤50%的判為＋＋；50%＜紅細(xì)胞感染率≤75%的判為＋＋＋；75%＜紅細(xì)胞感染率≤100%判為＋＋＋＋。

1.2.2 豬附紅細(xì)胞體感染率的檢測(cè) 采自上述不同豬群血樣2 040份，采用血液壓片鏡檢法檢測(cè)附紅細(xì)胞體感染率及感染強(qiáng)度。

1.2.3 不同生長(zhǎng)階段豬附紅細(xì)胞體感染率的檢測(cè)

采自上述保定市部分地區(qū)哺乳仔豬、斷奶仔豬、育肥豬、種母豬等不同生長(zhǎng)階段豬血樣2 040份，采用血液壓片鏡檢法檢測(cè)不同生長(zhǎng)階段豬附紅細(xì)胞體感染率及感染強(qiáng)度。

1.2.4 不同季節(jié)豬附紅細(xì)胞體感染率的檢測(cè) 采自上述不同季節(jié)豬血樣2 040份，采用血液壓片鏡檢法檢測(cè)附紅細(xì)胞體感染率及感染強(qiáng)度。

1.2.5 豬附紅細(xì)胞體垂直傳播檢測(cè) 隨機(jī)抽取感染與非感染的懷孕母豬各50頭，所生仔豬出生第1天、第5天采血，采用血液壓片鏡檢法進(jìn)行豬附紅細(xì)胞體病原檢驗(yàn)，檢測(cè)此病是否存在垂直傳播。

1.2.6 臨床治療試驗(yàn)

1.2.6.1 試驗(yàn)分組和治療方法 將附紅細(xì)胞體感染的斷奶仔豬隨機(jī)分為6組，每組為10頭。

第1組，用貝尼爾治療，劑量為5mL／頭，一次肌肉注射，連用7d。

第2組，用咪唑苯脲治療，劑量為3mL／頭，一次肌肉注射，連用7d。

第3組，用鹽酸多西環(huán)素治療，劑量為3 mL／頭，一次肌肉注射，連用7d。

第4組，用磺胺間甲氧嘧啶治療，劑量為5 mL／頭，一次肌肉注射，連用7d。

第5組，用土霉素治療，劑量為7mL／頭，一次肌肉注射，連用7d。

第6組，為對(duì)照組，不用任何藥物治療。

臨床治療試驗(yàn)期間，每日定時(shí)測(cè)體溫，并觀察各組豬的臨床表現(xiàn)如采食、飲水、精神狀態(tài)，是否發(fā)生貧血、黃疽以及腹瀉等；治療前和治療后第3天、第5天和第7天采血，鏡檢豬附紅細(xì)胞體，檢測(cè)感染強(qiáng)度在50%～75%（＋＋＋）的豬附紅細(xì)胞體的感染率。

1.2.6.2 療效判定 有效：臨床癥狀的減輕、附紅細(xì)胞體感染率降低。

治愈：臨床癥狀消失、病原學(xué)檢查結(jié)果陰性。

無(wú)效：癥狀未見(jiàn)好轉(zhuǎn)，附紅細(xì)胞體感染率無(wú)降低。

1.2.7 體外藥敏試驗(yàn) 取感染附紅細(xì)胞體（感染率90%以上）的抗凝豬血1滴于載玻片，分別滴加上述各種藥液1滴，混勻后立即在高倍鏡下觀察，計(jì)算豬附紅細(xì)胞體從紅細(xì)胞上脫落并在血漿中停止擺動(dòng)的時(shí)間。同時(shí)不加藥物做對(duì)照。觀察豬附紅細(xì)胞體對(duì)各種藥物的敏感程度。

判定標(biāo)準(zhǔn)：在5min內(nèi)使豬附紅細(xì)胞體從紅細(xì)胞上脫落并停止擺動(dòng)，判為敏感藥物；如在5min以上，則判定為不敏感藥物。

2 結(jié)果

2.1 豬附紅細(xì)胞體原學(xué)檢測(cè)結(jié)果

2.1.1 血液壓片鏡檢結(jié)果 血液壓片鏡檢可見(jiàn)紅細(xì)胞上有大量圓形小體存在，多為環(huán)形、球形、短桿形、豆點(diǎn)狀、桿狀、月牙狀、串珠狀的小體，附著于紅細(xì)胞表面單個(gè)或成團(tuán)寄生。暗視野下有較強(qiáng)的折光性，外圍有白環(huán)。該小體姬姆薩染色為紫紅色。嚴(yán)重感染病例的每個(gè)紅細(xì)胞上附紅細(xì)胞體可達(dá)十幾個(gè)，紅細(xì)胞猶如布滿突起的蓖麻球。附紅細(xì)胞體在血漿中呈游離狀，常作擺動(dòng)、扭轉(zhuǎn)，翻滾、上升、下降等運(yùn)動(dòng)；一旦附著在紅細(xì)胞上后，則停止運(yùn)動(dòng)。運(yùn)動(dòng)中以個(gè)體小者顯得最活潑。紅細(xì)胞被附紅細(xì)胞體感染在50%以內(nèi)的，紅細(xì)胞變形為齒輪狀的居多；感染在50%以上的，紅細(xì)胞出現(xiàn)多形態(tài)、星芒狀；紅細(xì)胞感染在100%的，紅細(xì)胞變形以星芒狀為主。

2.1.2 血液涂片染色鏡檢結(jié)果 血液涂片經(jīng)姬姆薩染色后觀察可見(jiàn)，感染附紅細(xì)胞體的紅細(xì)胞邊緣不整齊，呈鋸齒狀，表面有許多圓形、橢圓形或月牙形病原體，附紅細(xì)胞體被染成淡紫色，紅細(xì)胞上附紅細(xì)胞體的個(gè)數(shù)從1個(gè)到20個(gè)以上不等，呈鏈狀或串錢狀排列。

2.1.3 紅細(xì)胞溶解后鏡檢結(jié)果 將感染奶牛血液滴于載玻片上，加入1mL／L的稀鹽酸溶解紅細(xì)胞，鏡檢，可見(jiàn)游離的蟲(chóng)體增多，且運(yùn)動(dòng)加強(qiáng)。

2.1.4 碘制動(dòng)試驗(yàn)鏡檢結(jié)果 感染病豬血液懸滴鏡檢，可見(jiàn)附紅細(xì)胞體做擺動(dòng)、扭動(dòng)、上下翻滾等運(yùn)動(dòng)，滴加1g／L碘液后，附紅細(xì)胞體停止運(yùn)動(dòng)。此時(shí)，即使用或生理鹽水洗滌后，附紅細(xì)胞體活動(dòng)力也不恢復(fù)，也不被碘著色。碘制動(dòng)試驗(yàn)鏡檢結(jié)果表明，分離的病原為豬附紅細(xì)胞體［7］。

2.2 豬附紅細(xì)胞體感染率檢測(cè)結(jié)果

對(duì)保定市6個(gè)縣2 040份樣品進(jìn)行血液學(xué)鏡檢，豬附紅細(xì)胞體感染率檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 保定市豬附紅細(xì)胞體感染結(jié)果Table 1 Infection situation of Eperythrozoon suis in pigs in Baoding

由表1可知，豬附紅細(xì)胞體的平均感染率為74.25%。附紅細(xì)胞體感染在保定地區(qū)豬群中廣泛存在，在不同規(guī)模豬場(chǎng)均有不同程度的感染。

2.3 不同生長(zhǎng)階段豬附紅細(xì)胞體感染率檢測(cè)結(jié)果

哺乳仔豬、斷奶仔豬、育肥豬、種母豬等不同生長(zhǎng)階段豬附紅細(xì)胞體感染情況見(jiàn)表2。感染頭數(shù)由表2可知，不同發(fā)育階段的豬均有感染，斷奶仔豬感染率最高為82.9%，其次是哺乳仔豬，育肥豬和種母豬偏低，但各生長(zhǎng)階段之間感染率差異不顯著（P＞0.05）。

2.4 不同季節(jié)豬附紅細(xì)胞體感染率檢測(cè)結(jié)果

不同季節(jié)豬附紅細(xì)胞體感染率檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 不同年齡豬附紅細(xì)胞體感染率Table 2 The Eperythrozoon suis infection rate in different ages of pigs

表3 不同季節(jié)豬附紅細(xì)胞體感染率檢測(cè)結(jié)果Table 3 Detecting results of Eperythrozoon suis infection in different seasons

由表3可見(jiàn)，豬附紅細(xì)胞體感染一年四季均可發(fā)生，其中夏季7、8、9月感染率最高86.67%，其次是秋季、春季，冬季稍低。

2.5 豬附紅細(xì)胞體垂直傳播檢測(cè)結(jié)果

感染附紅細(xì)胞體的懷孕母豬所生仔豬在出生第1天、第5天采血，病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 豬附紅細(xì)胞體垂直傳播檢測(cè)結(jié)果Table 4 Results of vertical transmission of Eperythrozoon suis infection

由表4可見(jiàn)，陽(yáng)性母豬所產(chǎn)的仔豬第1天附紅 細(xì)胞體陽(yáng)性率為56%，在出生第5天陽(yáng)性率為61%，而陰性母豬所產(chǎn)仔豬在第1天感染率為0，陰性母豬所產(chǎn)仔豬陽(yáng)性率為2%。結(jié)果表明，豬附紅細(xì)胞體在母豬仔豬間存在垂直傳播。

2.6 治療試驗(yàn)結(jié)果

2.6.1 附紅細(xì)胞體感染率檢測(cè)結(jié)果 用藥前及用藥后第3天、5天、7天血樣壓片鏡檢，檢測(cè)附豬紅細(xì)胞體（感染強(qiáng)度＋＋＋）的感染率，附紅細(xì)胞體（感染強(qiáng)度＋＋＋）轉(zhuǎn)陰率結(jié)果見(jiàn)表5。

由表5可知，第1、2、3、4、5組豬附紅細(xì)胞體（感染強(qiáng)度＋＋＋）檢出率由治療前的最高值83.20%降到3.2%。治療后7d轉(zhuǎn)陰率分別為92.86%、94.88%、96.15%、95.78%、93.79%。與治療前相比，其差異極顯著（P＜0.01）。對(duì)照組第6組附紅細(xì)胞感染率有上升趨勢(shì)。治療后各藥物組的轉(zhuǎn)陰率明顯提高。

表5 附紅細(xì)胞體感染轉(zhuǎn)陰率檢測(cè)結(jié)果Table 5 The results of negative conversion rates of Eperythrozoon suis in pigs

2.6.2 臨床治療療效 不同藥物對(duì)斷奶仔豬附紅 細(xì)胞病的治療效果見(jiàn)表6。

表6 不同藥物對(duì)豬附紅細(xì)胞體病的治療效果Table 6 Therapeutic effect of different drugs on porcine eperythrozoonosis

由表6可知，用貝尼爾、咪唑苯脲、鹽酸多西環(huán)素、磺胺間甲氧嘧啶、土霉素這幾種藥物治療均有療效，其中第3組用鹽酸多西環(huán)素治療治愈率最高，達(dá)到80%。

2.7 體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果

豬附紅細(xì)胞體對(duì)各種藥物的敏感性檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 豬附紅細(xì)胞體藥敏試驗(yàn)結(jié)果Table 7 Drug sensitivity test results of Eperythrozoon suis

由表7可知，對(duì)照組與各藥物試驗(yàn)組之間，附紅細(xì)胞體從紅細(xì)胞上脫落的時(shí)間、在血漿中停止活動(dòng)的時(shí)間差異均極顯著（P＜0.01）；鹽酸多西環(huán)素組和貝尼爾組差異極顯著（P＜0.01）；磺胺間甲氧嘧啶組和貝尼爾組差異顯著（P＜0.05）；其他組差異不顯著（P＞0.05）。

3 討 論

本次調(diào)查的6個(gè)縣區(qū)豬附紅細(xì)胞體的感染率均達(dá)到68.75%以上，其結(jié)果與國(guó)內(nèi)其他報(bào)道基本一致［8-9］。保定市部分縣區(qū)豬附紅細(xì)胞體平均感染率為74.25%，各縣之間病感染率差異不顯著（P＞0.05）。表明附紅細(xì)胞體的感染在保定地區(qū)豬群中廣泛存在，該病已給當(dāng)?shù)仞B(yǎng)豬業(yè)發(fā)展造成了較大的影響，因此，應(yīng)采取有效措施，預(yù)防和控制豬附紅細(xì)胞體病的發(fā)生和流行。

在本次豬附紅細(xì)胞體流行病學(xué)調(diào)查中，不同發(fā)育階段的豬均可感染附紅細(xì)胞體，斷奶仔豬感染率最高可達(dá)82.9%。仔豬斷奶階段可因母子分離、飼料、環(huán)境等變化，使其存在較多的應(yīng)激因素，過(guò)度的應(yīng)激刺激會(huì)造成仔豬免疫力低下，對(duì)附紅細(xì)胞體病原的易感性增高，甚至繼發(fā)其他條件致病菌感染，因此，此階段應(yīng)高度重視疫病的預(yù)防工作［10］。從季節(jié)分析可知，一年四季均可發(fā)生豬附紅細(xì)胞體病，其中夏季7、8、9月發(fā)病率較高，最高可達(dá)86.67%，其次是秋季、春季，而冬季發(fā)病率相對(duì)較低，這說(shuō)明附紅細(xì)胞體感染發(fā)病率受昆蟲(chóng)活動(dòng)影響，昆蟲(chóng)是重要的傳播媒介，因夏季是昆蟲(chóng)孳生繁殖季節(jié)，故發(fā)病率較高［11］。感染附紅細(xì)胞體的懷孕母豬，所生仔豬出現(xiàn)附紅細(xì)胞體陽(yáng)性率較高，說(shuō)明豬附紅細(xì)胞體存在垂直傳播。

從體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果可知，抗血液原蟲(chóng)藥物、抗生素類藥物等對(duì)豬附紅細(xì)胞體都具有良好的殺滅作用［12］，其中鹽酸多西環(huán)素的效果最好；在臨床治療試驗(yàn)中也證明這些藥物對(duì)豬附紅細(xì)胞體病治療效果顯著。但是，不同藥物治療對(duì)豬附紅細(xì)胞體感染率的轉(zhuǎn)陰效果不一，鹽酸多西環(huán)素轉(zhuǎn)陰效果最好，其次是磺胺間甲氧嘧啶，因此臨床上可將鹽酸多西環(huán)素作為治療豬附紅細(xì)胞體病的首選藥物。

［1］ 韓一超，焦福林，張玉換，等.豬附紅細(xì)胞體病流行病學(xué)調(diào)查［J］.山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006，34（4）：73-75.

［2］ Li W，Du N，Xu B，et al.Alteration of integrin-associated protein（CD47）on experimental porcine eperythrozoonosis［J］.Vet Res Commun，2008，32（5）：411-418.

［3］ 劉永夏，劉建柱，成子強(qiáng)，等.應(yīng)用重組 MSG1蛋白檢測(cè)豬附紅細(xì)胞體抗體的ELISA檢測(cè)方法的建立［J］.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，44（21）：4508-4515.

［4］ Hoelzle K，Peter S，Sidler M，et al.Inorganic pyrophosphatase in uncultivable hemotrophic mycoplasmas：identification and properties of the enzyme from Mycoplasma suis［J］.Microbiology，2010，10（1）：194-202.

［5］ Hoelzle L E.Haemotrophic mycoplasmas：Recent advances in Mycoplasma suis［J］.Vet Microbiol，2008，130：215-226.

［6］ 秦建華，楊鵬華，劉占民，等.舍飼小尾寒羊附紅細(xì)胞體病的流行病學(xué)調(diào)查［J］.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，27（1）：86-88.

［7］ 華修國(guó)，李宏全，嚴(yán)麗華，等.犬附紅細(xì)胞體病診斷方法的研究［J］.上海農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，1998，15（4）：251-255.

［8］ 方素芳，崔 平.河北省豬附紅細(xì)胞體病的流行病學(xué)調(diào)查［J］.河北北方學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，23（1）：39-40.

［9］ 許耀臣，王達(dá)軍，陳愛(ài)林，等.豬附紅細(xì)胞體病流行病學(xué)調(diào)查及防治［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2001，37（3）：14-15.

［10］ 拜廷陽(yáng)，趙德明，吳志明，等.豬附紅細(xì)胞體病診斷與防控［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2010，31（8）：106-109.

［11］ 李子平，王 鵬，胡自然，等.冀西北地區(qū)奶牛附紅細(xì)胞體病的流行病學(xué)研究［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（27）：16803-16804，16925.

［12］ 姜富成，劉聚祥，王克寧，等.豬附紅細(xì)胞體培養(yǎng)方法及藥敏試驗(yàn)研究［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011，32（7）：39-44.