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    江蘇省實(shí)驗(yàn)兔球蟲感染情況調(diào)查研究

    2012-08-14 08:01:48宋鴻雁朱順星邵義祥
    動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展 2012年12期
    關(guān)鍵詞:艾美耳卵囊球蟲病

    宋鴻雁,朱順星,劉 春,邵義祥

    (南通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心 江蘇省開放性動物實(shí)驗(yàn)中心,江蘇南通226001)

    家兔是生物醫(yī)學(xué)研究中常用的實(shí)驗(yàn)動物,在免疫學(xué)研究、藥物研究、人類疾病模型等多個研究領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。近年來,我國十分重視實(shí)驗(yàn)動物科學(xué)的發(fā)展,逐步建立和完善了實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量監(jiān)測體系,包括實(shí)驗(yàn)兔在內(nèi)的實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量有了很大提高。然而,兔病仍是影響實(shí)驗(yàn)兔健康的巨大威脅。兔球蟲病是家兔最常見的危害最嚴(yán)重的疾病之一,是一類由艾美耳屬(Eimeria)的球蟲寄生于家兔肝膽管及腸上皮細(xì)胞內(nèi)而引起的寄生性原蟲病,流行非常普遍,世界各地均有發(fā)生。家兔球蟲病在臨床上以腹瀉、生長緩慢、消瘦為主要特征,引起較高的發(fā)病率和死亡率,幼兔感染率高達(dá)90%以上,病死率高達(dá)40%~70%[1]。

    多年來,國內(nèi)外學(xué)者對兔球蟲病進(jìn)行了相關(guān)研究[2-5],但目前,對兔球蟲病研究的廣度和深度均遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于禽球蟲病。僅有的一些流行病學(xué)資料也主要集中于對生產(chǎn)型兔場或散養(yǎng)兔的報(bào)道,報(bào)道顯示目前國內(nèi)兔球蟲感染非常普遍[6-10]。相對于商業(yè)用兔,實(shí)驗(yàn)兔球蟲感染情況的調(diào)查資料更加匱乏,周智君等[11]對湖南省部分地區(qū)實(shí)驗(yàn)兔寄生蟲病的情況進(jìn)行了調(diào)查,結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)兔球蟲檢出率為100%,這一結(jié)果令人不安。實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量直接影響科學(xué)研究實(shí)驗(yàn)結(jié)論及生物制品的質(zhì)量,越來越受到關(guān)注和重視,在現(xiàn)行的國家標(biāo)準(zhǔn)中球蟲被列為實(shí)驗(yàn)兔應(yīng)排除(除普通級外)的寄生蟲之一[12]。江蘇省聚集了多所高等院校、科研單位及制藥企業(yè),近年來實(shí)驗(yàn)兔用量大幅度增加,據(jù)了解,僅江蘇省蘇北地區(qū)某養(yǎng)殖公司年出欄科研、生物制藥用實(shí)驗(yàn)兔達(dá)200余萬只。但是,關(guān)于江蘇省實(shí)驗(yàn)兔球蟲感染情況的調(diào)查研究尚未見報(bào)道,本研究開展了江蘇省蘇北、蘇中、蘇南和南京地區(qū)主要實(shí)驗(yàn)兔供應(yīng)基地的實(shí)驗(yàn)兔球蟲感染情況的調(diào)查,為確保高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)動物,保證科學(xué)實(shí)驗(yàn)順利開展,對實(shí)驗(yàn)兔的球蟲感染情況進(jìn)行系統(tǒng)、全面的調(diào)查研究具有十分重要的意義。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 試劑 飽和食鹽水溶液,25g/L重鉻酸鉀。1.1.2 主要儀器設(shè)備 光學(xué)顯微鏡(OLYMPUS CX41),麥?zhǔn)嫌?jì)數(shù)板,40目、60目、80目和100目銅篩,電子天平,離心機(jī),恒溫培養(yǎng)箱。

    1.2 方法

    1.2.1 樣品采集 以江蘇省蘇北、蘇中、蘇南及南京地區(qū)的4個實(shí)驗(yàn)兔養(yǎng)殖供應(yīng)基地為調(diào)查對象,按照4個不同的地點(diǎn)編號為1、2、3、4,每個采樣點(diǎn)隨機(jī)采集15份新鮮糞樣,每個糞樣20g左右,將糞樣放入預(yù)先編號的采樣袋內(nèi),立即帶回實(shí)驗(yàn)室,放入4℃冰箱中保存。

    1.2.2 樣品卵囊檢查 用飽和鹽水漂浮法和Mc-Master′s法,逐份檢查感染情況和感染強(qiáng)度,并計(jì)算出感染率和克糞便卵囊數(shù)(OPG)。

    1.2.3 卵囊的收集與培養(yǎng) 采用飽和鹽水漂浮法收集球蟲卵囊,將糞樣加清水浸泡、搗碎,分別用40、60、80、100目銅篩過濾,將濾液以轉(zhuǎn)速3 000 r/min,離心10min,取沉淀加飽和鹽水混勻,靜置30min,以轉(zhuǎn)速3 000r/min,離心10min,取上清加5倍體積的水,再離心洗滌1次,收集沉淀,即為球蟲卵囊。將離心收集的球蟲卵囊加入25g/L的重鉻酸鉀,混勻,移至平皿中28℃恒溫培養(yǎng),每天吹打1次~2次,直到85%的卵囊孢子化為止,收集培養(yǎng)的球蟲卵囊,4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2.4 蟲種鑒定 顯微鏡下隨機(jī)觀察每個糞樣50個卵囊,對卵囊進(jìn)行拍照,用Sharp Capture軟件測定卵囊大小、計(jì)算形狀指數(shù),并觀察卵囊形態(tài)特征、顏色、卵膜孔的有無、內(nèi)外殘?bào)w的有無等,根據(jù)卵囊特征,參照文獻(xiàn)[1,13]進(jìn)行蟲種鑒別,計(jì)算出每種卵囊所占的百分比。

    2 結(jié)果

    2.1 江蘇地區(qū)實(shí)驗(yàn)兔球蟲感染率和感染強(qiáng)度

    本試驗(yàn)共調(diào)查了江蘇地區(qū)4個實(shí)驗(yàn)兔養(yǎng)殖供應(yīng)基地的兔糞樣60份,糞樣檢查發(fā)現(xiàn),4個基地實(shí)驗(yàn)兔感染率為100%。蘇北地區(qū)的實(shí)驗(yàn)兔球蟲OPG值最高,南京地區(qū)最低(表1)。

    表1 江蘇地區(qū)實(shí)驗(yàn)兔球蟲感染率和感染強(qiáng)度Table 1 The infection rate and intensity of coccidia in experimental rabbits in Jiangsu province

    2.2 各球蟲種類及檢出率

    從調(diào)查、鑒定結(jié)果來看,此次江蘇地區(qū)實(shí)驗(yàn)兔共檢出10種兔艾美耳屬球蟲,分別是斯氏艾美耳球蟲、穿孔艾美耳球蟲、中型艾美耳球蟲、大型艾美耳球蟲、梨型艾美耳球蟲、無殘艾美耳球蟲、盲腸艾美耳球蟲、腸艾美耳球蟲、小型艾美耳球蟲、黃艾美耳球蟲,且全部為混合感染(圖1)。最常見的球蟲是穿孔艾美耳球蟲,所占比例為27.97%,其次為無殘艾美耳球蟲,比例為15.08%,再次為腸艾美耳球蟲,比例為11.47%。其中蘇北地區(qū)優(yōu)勢種為無殘艾美耳球蟲(33.71%),蘇中地區(qū)優(yōu)勢種為腸艾美耳球蟲(23.88%),蘇南地區(qū)和南京地區(qū)和優(yōu)勢種均為穿孔艾美耳球蟲(48.77%、37.23%)(表2)。

    圖1 江蘇省10種艾美耳球蟲孢子化卵囊形態(tài)(400×)Fig.1 Representative sporulated oocysts of 10species of Eimeriafrom experimental rabbits in Jiangsu province(400×)

    表2 江蘇省實(shí)驗(yàn)兔各種球蟲感染百分比Table 2 The percentage of each coccidian species in experimental rabbits in Jiangsu province

    3 討論

    本試驗(yàn)共調(diào)查了江蘇省蘇北、蘇中、蘇南及南京地區(qū)4個實(shí)驗(yàn)兔基地的兔球蟲感染情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn),均有球蟲感染,感染率為100%,且均為多種球蟲的混合感染,此結(jié)果與文獻(xiàn)[3,14]報(bào)道的甘肅、安徽地區(qū)養(yǎng)殖的商業(yè)兔球蟲感染情況一致。據(jù)資料報(bào)道在不同地方的種類不完全一致,本次調(diào)查共查出10種艾美耳球蟲,分別是斯氏艾美耳球蟲、穿孔艾美耳球蟲、中型艾美耳球蟲、大型艾美耳球蟲、梨型艾美耳球蟲、無殘艾美耳球蟲、盲腸艾美耳球蟲、腸艾美耳球蟲、小型艾美耳球蟲、黃艾美耳球蟲,其中最常見的球蟲是穿孔艾美耳球蟲,所占比例為27.97%,其次為無殘艾美耳球蟲,比例為15.08%,再次為腸艾美耳球蟲,比例為11.47%。本次調(diào)查出的10中兔艾美耳球蟲種類與文獻(xiàn)[10]對國內(nèi)14個省兔場球蟲感染調(diào)查結(jié)果一致,Jing F等[10]報(bào)道國內(nèi)流行率最高的球蟲種類為穿孔艾美耳球蟲,其次為中型艾美耳球蟲,再次為大型艾美耳球蟲、無殘艾美耳球蟲、腸艾美耳球蟲。而馬永華等[3]報(bào)道甘肅蘭州地區(qū)發(fā)現(xiàn)了12種兔球蟲,除以上10種艾美耳球蟲,還報(bào)道了松林艾美耳球蟲和新兔艾美耳球蟲,程寶艷還報(bào)道了報(bào)道安徽肥西地區(qū)發(fā)現(xiàn)那格浦耳艾美耳球蟲[14]。

    本次調(diào)查中,蟲種鑒定是從形態(tài)學(xué)方面進(jìn)行的,為了保證球蟲類型鑒定結(jié)果真實(shí)可靠,應(yīng)當(dāng)結(jié)合分子生物學(xué)手段,與形態(tài)學(xué)鑒定相結(jié)合,這樣獲得的數(shù)據(jù)才更加可靠。Cere N等[15]根據(jù)球蟲的基因特性鑒別球蟲,Oliveira U C等[16]運(yùn)用PCR方法鑒別了11種兔艾美耳球蟲,這些方法的運(yùn)用有利于從分子水平鑒定蟲種。

    現(xiàn)行的國家標(biāo)準(zhǔn)《實(shí)驗(yàn)動物寄生蟲學(xué)等級及監(jiān)測》,規(guī)定艾美耳球蟲為清潔級兔必要時檢測項(xiàng)目,要求為陰性,而SPF級兔必須檢測艾美耳球蟲,要求為陰性。隨著實(shí)驗(yàn)兔的用量越來越多,應(yīng)用范圍越來越廣泛,國家對實(shí)驗(yàn)兔質(zhì)量控制要求也會越來越高。此次調(diào)查的江蘇地區(qū)實(shí)驗(yàn)兔球蟲的感染率高達(dá)100%,且全部為混合感染,究其原因可能有以下幾個方面:首先,飼養(yǎng)管理不科學(xué),衛(wèi)生消毒制度不規(guī)范,造成病原能夠長時間存活在舍內(nèi),因而兔群長期持續(xù)感染;其次,不能選用正確的藥物進(jìn)行治療和預(yù)防,這樣不利于對球蟲病的控制,藥物濫用或誤用還會增強(qiáng)球蟲的耐藥性,從而難以徹底地消除該病。兔球蟲感染通常呈亞臨床癥狀,兔外觀正常,但可能導(dǎo)致飼料轉(zhuǎn)化率下降,生長受阻,影響各項(xiàng)生理指標(biāo),作為教學(xué)與科研用的試驗(yàn)兔更是可能會影響試驗(yàn)數(shù)據(jù)。鑒于此次調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)兔普遍感染艾美耳球蟲,因此,為確保提供高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)兔,保證科學(xué)實(shí)驗(yàn)順利開展,采取科學(xué)的防治措施防控兔球蟲病的發(fā)生具有十分重要的意義。

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