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    促進(jìn)大鼠傷口愈合中藥組方的篩選

    2012-08-08 12:23:34于文會陸子音韓名書
    關(guān)鍵詞:生肌膏血竭藥膏

    于文會,張 潔,陸子音,韓名書,康 欣

    (東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院,哈爾濱 150030)

    中藥外用治療創(chuàng)傷,具有控制局部感染、保護(hù)創(chuàng)面、加快創(chuàng)傷愈合和增加創(chuàng)口愈合強(qiáng)度的作用[1]。中藥在治療疾病時,使用復(fù)方,很少用單味中藥,這是傳統(tǒng)的用藥方法,臨床效果顯著。為了篩選中藥復(fù)方制劑促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的作用,試驗(yàn)選取血竭、乳香、沒藥等13味中藥,根據(jù)活血化瘀、防腐生肌、消腫止痛、燥濕斂瘡等組成原則,組成三個藥方,根據(jù)其對創(chuàng)傷的愈合率、外周血液及抑菌等指標(biāo)的影響,篩選出適合臨床應(yīng)用的中藥方劑,為獸醫(yī)臨床外用中藥的開發(fā)和應(yīng)用提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 中藥

    血竭、乳香、沒藥、紫草、冰片、煅石膏等13味藥物(購自哈爾濱藥材公司),象皮生肌膏(由天津達(dá)仁堂京萬紅有限公司生產(chǎn))。

    1.1.2 實(shí)驗(yàn)動物

    Wistar大鼠60只,體重(250±25)g,購自哈爾濱醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物繁殖中心。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 中藥組方及制劑

    Ⅰ號藥方:血竭、乳香、紫草、冰片、煅石膏等;Ⅱ號藥方:血竭、乳香、沒藥、大黃、冰片、煅石膏等;Ⅲ號藥方:血竭、乳香、沒藥、黃柏、冰片、煅石膏等。

    生肌膏的制備參考創(chuàng)傷膏的加工工藝[2]。滅菌后4℃冰箱保存。

    1.2.2 試驗(yàn)分組及用藥方法

    Wistar大鼠(250±25)g 50只,隨機(jī)分五組,每組10只,中藥組分為A組、B組、C組,陽性對照組(D)和空白對照組(E)。用乙醚麻醉后,在大鼠背部兩側(cè)剃毛,用自制打孔器造圓形缺損創(chuàng),缺損創(chuàng)損傷至筋膜深層。傷口直徑2 cm。造模后的大鼠分籠飼養(yǎng),A組、B組、C組分別在傷口上涂Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏、Ⅲ號藥膏,每天1次;D組在傷口涂象皮生肌膏,每天1次;E組在傷口涂2%碘酊,每天1次。

    1.2.3 一般觀察

    用藥后1、3、7、14 d,觀察大鼠的傷口愈合情況,并計算傷口的愈合率。

    1.2.4 外周血白細(xì)胞、血小板的檢測

    用藥后各組大鼠斷尾采血50 μL,用全自動血球計數(shù)儀計檢測白細(xì)胞數(shù)、血小板的數(shù)量。

    1.2.5 血液中透明質(zhì)酸(HA)含量的檢測

    用藥后1、3、7、14 d,大鼠眼球采血,分離血清。采用放射免疫分析法,以第二抗體作為分離劑。按照試劑盒說明書操作方法檢測血清中透明質(zhì)酸的含量。

    1.2.6 體外抑菌試驗(yàn)

    將Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏、Ⅲ號藥膏、象皮生肌膏分別均勻地涂于直徑為1.0 cm的滅菌的濾紙片上。用無菌鑷子取藥敏紙片貼在接種細(xì)菌平板表面。每個平板分別貼上涂有Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏、Ⅲ號藥膏、象皮生肌膏濾紙片,濾紙片每張紙片間距不少于25 mm,紙片中心距平皿邊緣不少于15 mm。在37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。以抑菌環(huán)直徑(cm)評定其抗菌作用(根據(jù)K-B瓊脂法,加以改良)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同中草藥組方對大鼠傷口愈合影響

    由表1可見,創(chuàng)傷后的3d,各組之間愈合率差異不顯著;但在7d、14d,Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏、Ⅲ號藥膏、象皮膏與未給中藥(空白對照)組相比,創(chuàng)傷愈合率均有顯著增加,Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏與未給中藥(空白對照)組相比,差異顯著(P<0.05);Ⅲ號藥膏、象皮膏與未給中藥(空白對照)組相比,差異極顯著(P<0.01)。表明在創(chuàng)傷愈合率方面,Ⅲ號藥膏、象皮膏優(yōu)于Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏。

    表1 不同組在3、7、14 d創(chuàng)面愈合率比較Table 1 Wound healing rate in different groups (%)

    2.2 不同中草藥組方對大鼠外周血液白細(xì)胞的影響

    由表2可見,實(shí)驗(yàn)1 d,各組之間白細(xì)胞數(shù)量差異不顯著(P>0.05)。3~14d,大鼠外周血白細(xì)胞,Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏、Ⅲ號藥膏、象皮膏與不給中藥(空白對照)組相比,均差異顯著(P>0.05)或差異極顯著(P<0.01)。表明Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏、Ⅲ號藥膏及象皮膏均能誘導(dǎo)外周血白細(xì)胞增加,有利于創(chuàng)口的炎性凈化。

    2.3 不同中草藥組方對大鼠外周血液血小板的影響

    由表3可見,在試驗(yàn)1 d,各中藥組的大鼠外周血小板數(shù)與未給中藥(空白對照)組相比,血小板數(shù)差異不顯著(P>0.05)。但在試驗(yàn)3~14 d, Ⅲ號藥膏、象皮膏優(yōu)于Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏。表明Ⅲ號藥膏和象皮膏更利于創(chuàng)傷愈合過程的止血。

    表 2 外周血液白細(xì)胞數(shù)量的動態(tài)變化(n=5)(X±S)細(xì)胞數(shù)(×109個·mL-1)Table 2 Dynamic changes of white blood cell count in the peripheral blood

    表 3 外周血液血小板數(shù)量的動態(tài)變化(n=5)(X±S)細(xì)胞數(shù)(×1012個·mL-1)Table 3 Dynamic changes of blood platelet count in the peripheral blood

    2.4 不同中草藥組方對血清中透明質(zhì)酸含量影響

    由表4可以看出,試驗(yàn)1 d,各中藥組的大鼠血液透明質(zhì)酸含量與未給中藥(空白對照)組相比,血小板數(shù)差異不顯著(P>0.05)。但用藥后3~14 d,透明質(zhì)酸含量變化是:Ⅲ號藥膏、象皮膏優(yōu)于Ⅱ號藥膏;Ⅱ號藥膏優(yōu)于Ⅰ號藥膏。表明Ⅲ號藥膏和象皮生肌膏更有利于創(chuàng)傷發(fā)生后肉芽組織的增生。

    2.5 不同中藥組方的抑菌效果

    從表5抑菌結(jié)果看,Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏、Ⅲ號藥膏、象皮生肌膏對常見的化膿菌大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌、綠膿桿菌均有不同的抑菌效果,抑菌效果最好的是Ⅲ號藥膏。

    表5 不同中藥組方的體外抑菌效果Table 5 Effect on vitrro bacteriostasis experiment of various Chinese medicines complex prescription

    3 討論與結(jié)論

    創(chuàng)傷愈合是目前獸醫(yī)外科領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)、難點(diǎn),中藥在促進(jìn)創(chuàng)傷愈合方面有獨(dú)特效果。方中的紫草、當(dāng)歸、白芷蒲、公英、三七等中藥在一些促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的方中出現(xiàn)[3-4]。通過試驗(yàn),Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏、Ⅲ號藥膏與象皮生肌膏在創(chuàng)面治療過程中,均具有保持創(chuàng)面濕潤、肉芽組織出現(xiàn)的早、生長快等現(xiàn)象;14 d創(chuàng)面完全愈合,留下疤痕的僅小,傷口愈合的周圍有新毛長出。三組藥方中均有血竭,血竭能顯著促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖,促進(jìn)創(chuàng)傷愈合[5]。通過三個中藥組方療效比較,效果最好的為Ⅲ號藥膏。

    在創(chuàng)傷修復(fù)過程中,創(chuàng)傷感染是影響創(chuàng)傷修復(fù)的重要因素。體外抑菌試驗(yàn),Ⅲ號藥膏對綠膿桿菌抑菌效果最好,對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌有抑菌效果;而象皮生肌膏僅對金黃色葡萄球菌有明顯的抑菌效果。這與連翹對金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌均有顯著抑菌作用有關(guān)[6],與蒲公英對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌抑菌作用有關(guān)[7]。外周白細(xì)胞增多是最常見的炎癥反應(yīng)。外周血白細(xì)胞的聚集,能夠促進(jìn)創(chuàng)傷的炎性凈化。三組藥膏均有不同程度的誘導(dǎo)高白細(xì)胞和血小板向外周血集聚的作用。

    透明質(zhì)酸在創(chuàng)傷修復(fù)中能夠促進(jìn)組織快速生長重要的細(xì)胞外基質(zhì),透明質(zhì)酸有利于細(xì)胞的運(yùn)動和增殖,具有提高修復(fù)組織中Ⅲ型膠原含量的作用,而Ⅲ型膠原含量越高,瘢痕形成越少[8]。透明質(zhì)酸具有高粘彈性,通過調(diào)節(jié)細(xì)胞的通透性,降低血管異常高通透性,阻止病原微生物的入侵[9]。肉芽組織基質(zhì)中富含透明質(zhì)酸,這種富含透明質(zhì)酸的基質(zhì)可促進(jìn)細(xì)胞遷移到暫時性受損的基質(zhì)中,促進(jìn)細(xì)胞增殖和肉芽組織基質(zhì)的形成[10]。從空白對照組和各用藥組創(chuàng)面滲液中透明質(zhì)酸含量的動態(tài)變化看,各組均呈先上升繼而下降的趨勢。Ⅰ號藥膏、Ⅱ號藥膏、Ⅲ號藥膏與象皮生肌膏的透明質(zhì)酸含量繼續(xù)上升且上升明顯,下降緩慢。表明用藥組均能提高透明質(zhì)酸含量并維持較高水平的作用趨勢,能夠有效地促進(jìn)肉芽組織的增生,調(diào)節(jié)炎性反應(yīng),促進(jìn)創(chuàng)傷愈合。

    試驗(yàn)通過對A組、B組、C組、D組大鼠的外周雪白細(xì)胞、血小板、透明質(zhì)酸及體外抑菌試驗(yàn)進(jìn)行綜合分析,表明Ⅲ號藥膏對創(chuàng)傷愈合效果最好。

    [1] 侯建明,藍(lán)進(jìn),高益槐.銀耳多糖局部應(yīng)用對大鼠創(chuàng)傷愈合的影響[J].實(shí)用醫(yī)藥雜志,2007,24(8):965-967.

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