犬呼吸道致病菌藥敏試驗

張曉遠

（北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院，北京 房山 102442）

隨著抗生素的廣泛應(yīng)用，引起犬呼吸道感染的致病細菌對常規(guī)抗生素耐藥性逐漸增強。為了更好的指導(dǎo)臨床用藥，我們分別在2006年度（23例）和2009年度（30例）對部分患病犬進行咽部采集分泌物、細菌培養(yǎng)和藥敏試驗，以探求犬呼吸道致病菌的耐藥性變化。

1 材料與方法

1.1 試驗樣本選擇 樣本犬均為北京市動物醫(yī)院臨床病例，且具有明顯咳嗽、流涕（膿性或漿液性）、體溫升高等臨床癥狀，同時全血細胞計數(shù)檢查表現(xiàn)為嗜中性粒細胞顯著升高等感染血象，X線檢查顯示肺內(nèi)滲出樣影像。

1.2 培養(yǎng)基 一次性中國藍瓊脂培養(yǎng)基、一次性MH瓊脂培養(yǎng)基、一次性血瓊脂培養(yǎng)基、一次性麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，均購自天津金章科技發(fā)展有限公司（批號：2400002-7）。

1.3 藥敏紙片 頭孢拉定、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、頭孢噻肟、慶大霉素、阿米卡星、氨芐西林，均購自北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司（批號：12000053）。

1.4 咽部分泌物采集 使用一次性無菌棉拭子進行咽部深層（咽后壁）采樣。棉拭子盡量避免口腔和舌黏膜。同時，采集鼻液進行革蘭染色，大致觀察所含細菌性質(zhì)。

1.5 細菌培養(yǎng) 將取得的病料接種于普通營養(yǎng)肉湯，置37℃恒溫箱培養(yǎng)24h。將菌液進行革蘭染色，選擇與痰液中性質(zhì)相近的細菌，以無菌的棉棒沾取分別均勻涂布于中國藍瓊脂培養(yǎng)基、MH瓊脂培養(yǎng)基、血瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，倒置于37℃恒溫箱培養(yǎng)1h。

1.6 藥敏試驗 采用紙片擴散法。待培養(yǎng)基表面干燥后，將藥敏試紙貼于涂菌的表面，置37℃恒溫箱培養(yǎng)18～24h。依抑菌圈的大小來判斷細菌的敏感性。

1.7 判讀標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)2004年美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會（NCCLS）標(biāo)準(zhǔn)判讀［1］。分別將細菌對藥物的耐受程度分為敏感、中介和耐藥3個層次。

2 結(jié)果

2.1 2006年度共有15例培養(yǎng)出革蘭陽性菌、21例培養(yǎng)出革蘭陰性菌，并進行藥敏試驗，其結(jié)果見表1、表2。

表1 2006年度咽拭子藥敏試驗結(jié)果-革蘭陽性菌 （%）

表2 2006年度咽拭子藥敏試驗結(jié)果-革蘭陰性菌 （%）

根據(jù)表中統(tǒng)計結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)：15例革蘭陽性菌中50%以上對氧氟沙星、環(huán)丙沙星、頭孢噻肟、阿米卡星敏感；70%以上對氨芐西林、慶大霉素耐藥；21例革蘭陰性菌中50%以上對氧氟沙星、環(huán)丙沙星、頭孢噻肟、慶大霉素、阿米卡星均敏感。

2.2 2009年度共有17例培養(yǎng)出革蘭陽性菌、29例培養(yǎng)出革蘭陰性菌，并進行藥敏試驗，其結(jié)果見表3.、表4。

表3 2009年度咽拭子藥敏試驗結(jié)果-革蘭陽性菌 （%）

上述結(jié)果說明，17例革蘭陽性菌對7種試驗用藥耐藥性達到50%以上，而29例革蘭陰性菌對氧氟沙星耐藥性為48.3%，對其他6種藥物耐藥性達到50%以上。

表4 2009年度咽拭子藥敏試驗結(jié)果-革蘭陰性菌 （%）

3 討論

3.1 在2個年度犬咽拭子細菌培養(yǎng)中，我們發(fā)現(xiàn)半數(shù)以上病例（13／23，16／30）同時培養(yǎng)革蘭陽性致病菌和革蘭陽性陰性菌，犬呼吸道的細菌感染多為混合感染。這可能與呼吸道生理環(huán)境、細菌的“二次感染”和耐藥菌株的出現(xiàn)有關(guān)。

3.2 比較試驗中，2006年度肺部感染犬咽拭子藥敏試驗結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)2009年度所分離細菌對同種藥物的藥物耐藥率呈明顯增高（P＜0.5）。分析其原因，與抗生素使用的指征不明確、不恰當(dāng)?shù)亩喾N抗生素聯(lián)用、抗生素使用周期過長等有關(guān)?？股氐牟缓侠硎褂?，可誘導(dǎo)新的耐藥株產(chǎn)生［2］，從而使細菌耐藥率呈逐年升高。

3.3 藥敏試驗后抗菌藥物的合理選擇，是提高抗感染效果的關(guān)鍵步驟之一。在獸醫(yī)臨床實踐過程中，藥敏試驗通常在日常治療無效時進行，絕大多數(shù)醫(yī)師會根據(jù)藥敏試驗結(jié)果進行藥物調(diào)整。然而，張騫峰等人［3］曾在人醫(yī)中研究發(fā)現(xiàn)，藥敏試驗后臨床上進行抗菌藥物調(diào)整和未做調(diào)整的比例近似。這可能與人醫(yī)臨床藥敏試驗多在治療初期進行有關(guān)。同時，也提示我們細菌的培養(yǎng)結(jié)果可能與臨床表現(xiàn)不符。

3.4 紙片法藥敏試驗是指導(dǎo)臨床合理用藥的有效方法，可以避免盲目用藥，減少不必要的損失。但藥敏試驗是定性試驗，同時會受到多種因素的影響，從而使其結(jié)果不能準(zhǔn)確反應(yīng)藥物的真實敏感程度［4］。因此充分了解紙片法藥敏試驗的各種影響因素，熟練操作技能，對提高藥敏試驗的準(zhǔn)確性有很大的意義。

盡快明確致病原，并采取有針對性的治療措施，是治療細菌感染性疾病的關(guān)鍵。因而，病原微生物的分離培養(yǎng)和藥敏試驗是非常重要的實驗室方法，是選擇合適治療策略的科學(xué)依據(jù)。

［1］許宏濤，張秀珍.2004年美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會藥敏試驗判斷標(biāo)準(zhǔn)［J］.中國臨床藥理學(xué)雜志，2005，21（4）：318-320.

［2］沈磊磊，虞耀土，張忠杰，等.細菌分離培養(yǎng)和藥敏試驗對獸醫(yī)臨床用藥的指導(dǎo)意義［J］.浙江畜牧獸醫(yī)，2008（2）：30-31.

［3］張騫峰，孫增先，孫曉，等.藥敏試驗后抗菌藥物的選擇分析［J］.抗感染藥學(xué)，2009，6（1）：40-42.

［4］雷變蘭，周玉武.分析藥敏試驗影響因素指導(dǎo)臨床用藥［J］.山西農(nóng)業(yè)，2006（23）：14-15.