右酮洛芬氨丁三醇注射液的人體藥動(dòng)學(xué)研究

宋穎，賈艷艷，丁莉坤，鹿成韜，馮智軍，宋薇，文愛(ài)東（第四軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科，西安710032）

右酮洛芬氨丁三醇（Dexketoprofen trometamol）是非甾體抗炎藥酮洛芬右旋對(duì)映體的水溶性氨丁三醇鹽。右酮洛芬氨丁三醇注射液在許多歐洲國(guó)家已廣泛應(yīng)用，其主要適應(yīng)證為嚴(yán)重急性疼痛的對(duì)癥治療，包括術(shù)后疼痛和炎癥性疼痛，如術(shù)后疼痛、骨骼-肌肉疼痛和腎絞痛。產(chǎn)品可單獨(dú)用藥，或者在控制術(shù)后疼痛必要的情況下，在阿片類治療的基礎(chǔ)上作為輔助用藥。雖然國(guó)內(nèi)、外已有關(guān)于右酮洛芬氨丁三醇人體藥動(dòng)學(xué)的研究報(bào)道，但是關(guān)于注射劑在中國(guó)人體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究較少[1～3]。本研究用液-質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）法分別測(cè)定單劑量和多劑量給藥后健康受試者血漿中的右酮洛芬濃度，評(píng)價(jià)右酮洛芬氨丁三醇注射液在中國(guó)人群中的藥動(dòng)學(xué)特性，為在中國(guó)人群中開(kāi)展隨機(jī)、對(duì)照臨床研究的給藥方案提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

6410B型三級(jí)四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀，配有自動(dòng)進(jìn)樣器、液相色譜儀、柱溫箱、電噴霧電離離子源（ESI）及Agilent MassHunterWorkstation Software數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（美國(guó)Agilent公司）；AB135-S十萬(wàn)分之一天平（瑞士梅特勒公司）；XW 80A渦旋混合器（上海滬西分析儀器廠）；TGL16M型冷凍離心機(jī)（長(zhǎng)沙英泰儀器有限公司）。

1.2 試藥

右酮洛芬氨丁三醇注射液（德國(guó)Berlin-Chemie AG（Menarini Group），規(guī)格：50 mg∶2 mL，批號(hào)：02056）；右酮洛芬氨丁三醇對(duì)照品（德國(guó)Berlin-Chemie AG（Menarini Group），含量：100.0%）；內(nèi)標(biāo)：非布司他對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100650-200301）；甲醇為色譜純，醋酸銨、乙酸為分析純，試驗(yàn)用水為去離子水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜及質(zhì)譜條件

色譜條件：色譜柱：Diamonsil C18（2）（150 mm×2.1 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（水中含5 mmol·L－1醋酸銨、0.05%乙酸，68∶32）；流速：0.35 mL·min－1；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：8 μL。

質(zhì)譜條件：采用電噴霧離子源（ESI），負(fù)離子選擇性離子檢測(cè)（SIM）模式；右酮洛芬：[M-H]－離子，m/z253.1；內(nèi)標(biāo)（非布司他）：[M-H]－離子，m/z315.1；離子源參數(shù)：干燥氣溫度：350 ℃；干燥氣流速：12 L·min－1；噴霧氣壓力：40 psi；毛細(xì)管電壓：4 000 V。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確稱取右酮洛芬氨丁三醇對(duì)照品，用甲醇配制成濃度為206.6、103.3、51.65、20.66、2.066、0.516 5 μg·mL－1的右酮洛芬標(biāo)準(zhǔn)溶液。另準(zhǔn)確稱取非布司他對(duì)照品，用甲醇溶解配成濃度為20.12 μg·mL－1的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.3 血漿樣品的處理

于1.5 mL離心管中精密加入血漿樣品200 μL、內(nèi)標(biāo)（20.12 μg·mL－1非布司他）溶液25 μL，旋渦混勻。加入甲醇600 μL，渦旋混勻5 min，靜置5 min，于15 600 r·min－1離心10 min。吸取上清液轉(zhuǎn)移至自動(dòng)進(jìn)樣器樣品瓶，進(jìn)行LC-MS分析。

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：在空白血漿中分別加入右酮洛芬氨丁三醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制成相當(dāng)于血藥濃度為0.010 33、0.051 65、0.206 6、0.826 4、2.066、5.165、10.33、20.66 μg·mL－1的含藥血漿，按“2.3”項(xiàng)下方法操作，并進(jìn)行LC-MS分析，記錄色譜。計(jì)算右酮洛芬峰面積（As）和內(nèi)標(biāo)峰面積（Ai）的比值f（f＝As/Ai）。以峰面積比值（f）對(duì)血藥濃度（x）作權(quán)重回歸計(jì)算，結(jié)果右酮洛芬的線性方程為f＝－0.000 548 1x×0.206 2（r＝0.997 8，權(quán)重系數(shù)w＝1/c2）。結(jié)果表明，右酮洛芬血藥濃度在0.010 33～20.66 μg·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，定量下限為0.010 33 μg·mL－1。

圖1 LC-MS圖譜A.空白血漿；B.右酮洛芬對(duì)照品；C.內(nèi)標(biāo)；D.空白血漿+右酮洛芬對(duì)照品+內(nèi)標(biāo)；E.0.17 h血漿樣品Fig 1 LC-MS ChromatogramsA.blank plasma；B.dexketoprofen control；C.IS；D.blank plasma+dexketoprofen control+IS；E.plasma sample at 0.17 h

2.4.2 專屬性：在選定的液-質(zhì)條件下，各組分不受血漿中內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。右酮洛芬的出峰時(shí)間在2.9 min左右，內(nèi)標(biāo)的出峰時(shí)間在3.6 min左右，LC-MS圖譜見(jiàn)圖1。

2.4.3 精密度和準(zhǔn)確度：分別配制右酮洛芬低、中、高（0.025 83、1.033、16.53 g·mL－1）3種濃度的標(biāo)準(zhǔn)含藥血漿，每個(gè)濃度平行配制5份，按“2.3”項(xiàng)下方法操作。依上述方法，連續(xù)3 d測(cè)定，每日隨行一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，記錄色譜圖。計(jì)算右酮洛芬面積As和內(nèi)標(biāo)峰面積Ai的比值f，代入隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求得樣品的實(shí)測(cè)濃度，考察日內(nèi)和日間精密度。采用第1天的數(shù)據(jù)，將f代入隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算所得濃度和加入濃度的比值即為準(zhǔn)確度（相對(duì)回收率），結(jié)果詳見(jiàn)表1。

表1 精密度及回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝5）Tab 1Results of precision and recovery tests（n＝5）

2.4.4 提取回收率：分別取低、中、高3種濃度的右酮洛芬血漿樣本各3份，以經(jīng)過(guò)提取所得的色譜峰面積與標(biāo)準(zhǔn)溶液未經(jīng)提取直接進(jìn)樣所得的色譜峰面積之比，來(lái)考察樣品的提取回收率，結(jié)果詳見(jiàn)表1。

2.4.5 樣品穩(wěn)定性：考察了右酮洛芬3種濃度（0.025 83、1.033、16.53 μg·mL－1）樣品分別在即刻、4.5 h后、反復(fù)凍融3次和－40℃放置49 d，進(jìn)樣分析的穩(wěn)定性、結(jié)果所有樣品的RSD均＜15%，即表明右酮洛芬血漿樣品穩(wěn)定性良好。

2.5 試驗(yàn)對(duì)象

12名健康受試者參加本項(xiàng)研究，男、女各半，年齡33～40歲，體重50～64.5 kg，無(wú)煙酒嗜好。試驗(yàn)前經(jīng)病史詢問(wèn)、體格檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查未發(fā)現(xiàn)異常。受試者無(wú)藥物過(guò)敏史和藥物依賴史，無(wú)精神病史以及其他慢性病史，2周內(nèi)未服任何藥物。受試期間禁煙、酒、茶及含咖啡因的飲料，統(tǒng)一清淡飲食。受試者試驗(yàn)前均簽署知情同意書(shū)。本試驗(yàn)經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過(guò)。

2.6 給藥和取樣

12名健康受試者。第1天進(jìn)行50 mg單劑量靜脈滴注的人體藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)；經(jīng)過(guò)7 d清洗期，第8～10天進(jìn)行50 mg多劑量靜脈滴注的人體藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)。分別于第8、9、10天給藥前采集穩(wěn)態(tài)谷濃度血樣，第1、10天給藥前抽取空白血樣約4 mL，在靜脈滴注開(kāi)始后10、20、30、35、40、50 min及1、1.5、2、3、4、6、8、10、12 h時(shí)分別采集靜脈血約4 mL。分離血漿，置－80℃冰箱保存待測(cè)。

2.7 數(shù)據(jù)處理

采用WinNonLin 6.2軟件，根據(jù)本試驗(yàn)所測(cè)得的血藥濃度繪制藥-時(shí)曲線，選擇非房室模型，計(jì)算各個(gè)體的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。

12名受試者靜脈滴注右酮洛芬氨丁三醇注射液后，主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表2（注：AUC單劑量中代表AUC0～∞，多劑量中代表AUCss），其平均藥-時(shí)曲線見(jiàn)圖2。

表2 12名健康受試者分別單劑量、多劑量給藥后右酮洛芬的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Tab 2 Main pharmacokinetic parameters of dexketoprofen in 12 healthy volunteers after single and multiple doses administration

3 討論

本試驗(yàn)建立的LC-MS法可檢測(cè)血漿樣品中右酮洛芬的濃度。本方法快速、靈敏、專屬性強(qiáng)，可以滿足低濃度藥物測(cè)定及藥動(dòng)學(xué)研究的需要。

12名中國(guó)健康受試者靜脈滴注右酮洛芬氨丁三醇注射液后，主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)在多劑量給藥后4次可以達(dá)到穩(wěn)態(tài)，穩(wěn)態(tài)血藥濃度波動(dòng)度（DF）為6.5±0.8。與單劑量給藥相比，多劑量給藥后血漿中右酮洛芬的t1/2、tmax均無(wú)顯著性差異。CL和Vd有顯著性差異，表明多劑量給藥后CL和Vd增加，致多劑量給藥后cmax、AUC均比單劑量給藥有所降低，此結(jié)論與國(guó)外報(bào)道相一致[2]。蓄積常數(shù)計(jì)算[4，5]結(jié)果表明在多劑量給藥過(guò)程中，右酮洛芬在健康受試者體內(nèi)無(wú)明顯蓄積現(xiàn)象。

圖2 12名受試者單劑量給藥后血漿中右酮洛芬的平均藥-時(shí)曲線Fig 2 Mean plasma concentration-time curves of dexketoprofen in 12 healthy volunteers after a single dose administration

[1]Valles J，Artigas R，Crea A，et al.Clinical pharmacokinetics of parenteral dexketoprofen trometamol in healthy subjects[J].Methods Find Exp Clin Pharmacol，2006，28（SupplA）：7.

[2]黃 英，余 勤，梁茂植，等.高效液相色譜法測(cè)定人血漿中酮洛芬濃度[J].藥物分析雜志，2000，20（1）：99.

[3]Kaye CM，Sankey MG，Holt JE，et al.A high-pressure liquid chromatographic method for the assay of ketoprofen in plasma and urine，and its application to determining the urinary excretion of free and conjugated ketoprofen following oral adminastration of orudis to man[J].Br J Clin Pharmac，1981，11（4）：395.

[4]Meineke I，Gleiter HG.Assessment of drug accumulation in the evaluation of pharmacokinetic data[J].The Journal of Clinical Pharmacology，1998，38（8）：680.

[5]Colburn WA.Estimating the accumulation of drugs[J].Journal of Pharmaceutical Sciences，1983，72（7）：833.