不同企業(yè)非洛地平片的體外溶出度研究*

朱靜毅，尹 萌，孟月蘭

非洛地平是對血管有較高選擇性作用的二氫吡啶類鈣通道拮抗劑，可通過減少外周血管阻力而降低動脈血壓，在臨床上用于高血壓、心絞痛、充血性心衰的防治，因其療效確切，不良反應(yīng)較輕，且對各期高血壓均有效，臨床應(yīng)用十分廣泛，在國外被作為老年高血壓患者的首選藥。目前，全國范圍內(nèi)非洛地平片的生產(chǎn)企業(yè)7家，藥品批準(zhǔn)文號11個，各藥廠因生產(chǎn)工藝不同等因素，其產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量水平亦不相同。

溶出度試驗(yàn)是評價口服固體制劑內(nèi)在質(zhì)量的一個重要手段，多種pH值溶出介質(zhì)中溶出曲線的測定是先進(jìn)國家藥物評審評價機(jī)構(gòu)評價口服固體制劑內(nèi)在質(zhì)量的一個重要環(huán)節(jié)。由于非洛地平在丙酮、甲醇或乙醇中易溶，在水中幾乎不溶，《中國藥典》2010年版選用0.3%十二烷基硫酸鈉溶液為溶出介質(zhì)［1］。為了進(jìn)一步模擬人體內(nèi)環(huán)境，本實(shí)驗(yàn)參照日本“藥品品質(zhì)再評價”工程在溶出度研究中所擬定的模擬人體消化道內(nèi)體液的4種基本介質(zhì)［2］，采用《中國藥典》2010年版方法，對5家藥廠生產(chǎn)的非洛地平片的溶出度進(jìn)行測定，考察不同藥廠藥品的內(nèi)在質(zhì)量，為臨床用藥提供參考。

1 儀器、試劑與試藥

天大天發(fā)RCZ-8B型全自動取樣溶出系統(tǒng);日本島津LC20AB高效液相色譜儀，色譜柱：AlltimaTMC18(150 mm ×4.6 mm，5 μm);AG135 型電子分析天平(瑞士梅特勒公司)。

甲醇(色譜純)，乙腈(色譜純)，其他試劑均為分析純;水為超純水;對照品：非洛地平(由中國藥品生物制品檢定所提供，批號130452-200902);5家藥廠的非洛地平片均為市售品，見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性 依照高效液相色譜法(附錄ⅤD)測定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-乙腈-水(50∶15∶35)為流動相;流速為1.0 ml/min;檢測波長為238 nm;進(jìn)樣量20 μl。理論板數(shù)按非洛地平峰計算不低于3 500，非洛地平與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。

表1 5家不同藥廠的非洛地平片

2.2 測定方法的建立及驗(yàn)證

2.2.1 溶出介質(zhì)的配制 溶出介質(zhì)Ⅰ(水)：超純水(含0.02%吐溫 -80)。溶出介質(zhì)Ⅱ(pH 1.2鹽酸溶液)：取氯化鈉2.0 g，加水適量使溶解，加鹽酸7 ml，再加水稀釋至1 000 ml，即得(含0.02%吐溫-80)。溶出介質(zhì)Ⅲ(pH 4.0醋酸鹽緩沖液)：0.05 mol/L醋酸溶液 -0.05 mol/L 醋酸鈉溶液(16.4∶3.6)(含 0.02%吐溫-80)。溶出介質(zhì)Ⅳ(pH 6.8磷酸鹽緩沖液)：取磷酸二氫鉀3.4 g和無水磷酸氫二鈉3.55 g，加水適量使溶解后，定容至1 000 ml，再用水稀釋1倍，即得(含0.02%吐溫-80)。溶出介質(zhì)Ⅴ：0.3%十二烷基硫酸鈉溶液(見《中國藥典》2010年版)。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 稱取非洛地平對照品約10 mg，精密稱定，用甲醇定量稀釋制成20 μg/ml的對照品儲備液。精密量取一定體積對照品儲備液，分別用上述 5 種溶出介質(zhì)稀釋制成 0.2、1.0、2.0、5.0、10.0和20.0 μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。按上述色譜條件分別測定，得不同溶出介質(zhì)下的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，結(jié)果在0.2～20.020 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。在介質(zhì)Ⅰ～介質(zhì)Ⅴ中的回歸方程分別為：A=33 972 C-487.05(r=1.000 0)、A=33 856 C-1 032.19(r=0.999 9)、A=342 58 C-719.42(r=1.000 0)、A=34 737 C-629.53(r=1.000 0)和 A=35 564 C-231.82(r=1.000 0)。

2.2.3 精密度試驗(yàn) 取“2.2.2”項(xiàng)下各介質(zhì)制備的濃度為 0.2、5.0 和 20.0 μg/ml的非洛地平對照品溶液，分別重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，RSD均＜1.0%。

2.2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.2.2”項(xiàng)下各介質(zhì)制備的濃度為 0.2、5.0 和 20.0 μg/ml的非洛地平對照品溶液，分別在0、1、2、4、8、12 和 24 h 進(jìn)樣，測定峰面積，結(jié)果表明5種溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD均＜2.0%。

2.2.5 回收率試驗(yàn) 取已知含量的各廠家非洛地平片10片(2.5 mg規(guī)格取20片)，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量，分別用5種介質(zhì)溶解并定容成10 μg/ml的樣品溶液。分別取對照品儲備液2.0、2.5和3.0 ml至10 ml量瓶中，各精密加入樣品溶液5 ml，用相應(yīng)介質(zhì)稀釋至刻度，制備成低、中、高3種濃度的供試品溶液，每種濃度制備3份。照“2.1”項(xiàng)下方法測定，計算加樣回收率，結(jié)果A廠非洛地平回收率均在99.02% ～101.18%，B廠非洛地平回收率均在 98.25% ～101.83%，C廠非洛地平回收率均在 98.57% ～101.69%，D廠非洛地平回收率均在 98.31% ～101.24%，E廠非洛地平回收率均在 98.33% ～101.07%，RSD 均 ＜2.0%。

2.3 溶出度測定及結(jié)果 分別取“2.2.1”項(xiàng)下的溶出介質(zhì) 1 000 ml，采用《中國藥典》方法［1］，轉(zhuǎn)速為 50 r/min，將5 批樣品隨機(jī)取樣 6 片，分別在 5、10、15、30、45、60、90、120、180、240 和 360 min 吸取溶出液 3 ml，同時補(bǔ)充同體積空白溶出介質(zhì)，其間，當(dāng)連續(xù)兩點(diǎn)溶出率均＞85%，且差值在5%以內(nèi)時，試驗(yàn)則可提前結(jié)束。照“2.1”項(xiàng)下方法測定，計算不同時間的累積溶出率，溶出曲線見圖1。

2.4 數(shù)據(jù)處理及分析 采用美國FDA推薦使用的相似因子法［3-5］。從溶出曲線可以看出，A廠家在上述5種介質(zhì)中均具有較高和較穩(wěn)定的溶出率，故將其作為參比制劑，評價其余4家藥廠產(chǎn)品的相似性。若供試制劑與參比制劑的溶出曲線間相似因子50≤f2≤100，可判斷為兩者相似。統(tǒng)計分析結(jié)果見表2。

表2 其他各藥廠制劑的值

由表2可以看出，C藥廠制劑與A藥廠制劑在5種介質(zhì)中溶出曲線均相似，D藥廠制劑與A藥廠制劑在參照日本“藥品品質(zhì)再評價”采用的4種介質(zhì)方法下均相似，但在《中國藥典》2010年版規(guī)定的方法下不相似，B藥廠和E藥廠制劑與A藥廠制劑僅在其中一個溶出介質(zhì)中相似，其余均不相似，說明A藥廠、C藥廠和D藥廠生產(chǎn)的非洛地平片質(zhì)量水平相似，但B藥廠和E藥廠與上述3個藥廠制劑的質(zhì)量水平有顯著差異。

圖1 5家藥廠的非洛地平片在不同溶出介質(zhì)中的溶出曲線

3 討論

3.1 增溶劑種類及濃度的選擇，參考日本橙皮書，非洛地平在pH 1.2鹽酸溶液、pH 4.0醋酸鹽緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液和水中的溶解度(37℃)分別為0.000 72、0.000 79、0.000 68 和 0.000 58 mg/ml，在上述四種溶液分別含 0.5%吐溫 -80中的溶解度(37 ℃)分別為 0.19、0.22、0.21 和 0.22 mg/ml。故本實(shí)驗(yàn)選擇吐溫-80作為增溶劑，同時，分別加入不同濃度吐溫 -80(0.02%、0.05%、0.1%、0.5%)對樣品進(jìn)行測試，結(jié)果表明加入0.02%和0.05%吐溫-80結(jié)果相似，所以選擇0.02%吐溫-80作為溶出介質(zhì)。

3.2 由不同溶出介質(zhì)的溶出曲線可以看出：按照《中國藥典》2010年版的方法，除D藥廠外，其余藥廠的非洛地平片在45 min時的累積溶出量均超過80%;參照日本“藥品品質(zhì)再評價”采用的4種介質(zhì)，各藥廠的非洛地平片在45 min時的累積溶出量僅為30%～60%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于國外產(chǎn)品(45min溶出量均達(dá)80%以上)的溶出量，說明國外生產(chǎn)的非洛地平片制劑工藝與國產(chǎn)藥品不相同，并不適于作為國產(chǎn)非洛地平片的參比制劑。故本試驗(yàn)采用國產(chǎn)制劑之間相似度的比較，以A藥廠作為參比制劑，考察各企業(yè)產(chǎn)品的相似程度。

3.3 有文獻(xiàn)報道［6］，采用乙腈-甲醇-磷酸鹽緩沖液為流動相分別考察4家不同藥廠非洛地平片在參照日本“藥品品質(zhì)再評價”采用的4種溶出介質(zhì)中的體外溶出情況，并與《中國藥典》2005年版規(guī)定的非洛地平片溶出方法進(jìn)行比較，結(jié)果4個廠家非洛地平片在《中國藥典》(2005年版)方法下均相似，在其他介質(zhì)中均不相似。通過實(shí)驗(yàn)比較可以看出，《中國藥典》2010年版規(guī)定的非洛地平片溶出方法更為合理，色譜系統(tǒng)更為簡單，且該溶出介質(zhì)對各企業(yè)產(chǎn)品溶出度有較好的區(qū)分作用。

3.4 按照《中國藥典》2010年版的方法，D藥廠的非洛地平片在45 min時的累積溶出量僅為55%，主要由于該企業(yè)產(chǎn)品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為《國家食品藥品監(jiān)督管理局新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》第三十八冊，溶出度測定以“0.1 mol/L鹽酸溶液-異丙醇(3∶2)”為溶出介質(zhì)，異丙醇的使用，提高了藥物的溶解度，增加了藥物的溶出速率，但建議該廠家改進(jìn)生產(chǎn)工藝，按照新版藥典標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)。

3.4 非洛地平口服吸收完全并經(jīng)歷廣泛的首過代謝，主要由肝臟代謝、消除，這種代謝為一級動力學(xué)過程，代謝速率與其血漿濃度成正比。因此，臨床應(yīng)用非洛地平產(chǎn)品時，應(yīng)根據(jù)不同產(chǎn)品的不同動力學(xué)特征結(jié)合患者的實(shí)際病情選擇應(yīng)用，包括價格因素，保證用藥的安全、有效、經(jīng)濟(jì)。

1 中國藥典.二部.2010：454，455

2 謝沐風(fēng).簡介日本“藥品品質(zhì)再評價”工程——溶出度研究系列.中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2005，6(6)：42

3 俞慧群，卓開華.6廠家多潘立酮片的溶出度考察.中國藥師，2010，13(1)：74

4 江瑩，江明，胡敏，等.不同廠家艾司唑侖片的體外溶出度比較.醫(yī)藥導(dǎo)報，2011，30(3)：358

5 吳啉，李慧義，丁麗霞，等.國產(chǎn)尼莫地平片的溶出度比較.藥物分析雜志，2009，27(3)：195

6 戴幼琴，毛榮榮.4家藥廠的非洛地平片溶出度比較.藥學(xué)實(shí)踐雜志，2009，27(3)：195