益智藥材化學(xué)成分及質(zhì)量分析研究進(jìn)展

呂秀香，張連學(xué)，黃文華，余競光，郭寶林（.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，長春308；.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院/北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所，北京 0093）

益智是姜科植物益智Alpinia oxyphyllaMiq.的干燥成熟果實(shí)。始載于《本草拾遺》[1]，主產(chǎn)于海南、廣東、廣西等地，為海南地道藥材之一，也是我國四大南藥之一。在我國藥典中，作為果實(shí)的益智炮制成飲片時(shí)，去掉果殼，取種子，稱益智仁，因此“益智仁”名稱被用來指代果實(shí)（藥材）或種子（飲片），在應(yīng)用上是有混亂的。筆者在本綜述中為避免歧義，將指明各研究報(bào)道中的部位為果實(shí)或種子。

益智藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)簡單，2010年版《中國藥典》（一部）[2]中僅規(guī)定益智種子含揮發(fā)油不得少于1.0%（mL·g-1），而對(duì)于其中指標(biāo)性成分的含量限度暫無規(guī)定。

1 益智藥材化學(xué)成分研究

1.1 萜類化合物

益智中的萜類成分以倍半萜為主，其主要成分有圓柚酮（諾卡酮，Nootkatone）、香橙烯（Valencene）等；另外，還含有圓柚 醇（Nootkatol）、刺參酮（Oplopanone）、7-表-香科酮（7-Epi-teucrenone）、Oxyphyllol A、Oxyphyllol B、Oxyphyllol C、Isocyperol、Oxyphyllone A、Oxyphyllone B、Oxyphyllenone A、Oxyphyllenone B、Oxyphyllenodiol A、Oxyphyllenodiol B、Oxyphyllone E、Oxyphyllone F[3～9]等。

1.2 二苯庚烷類衍生物

從益智中分離到的二苯庚烷類化合物主要有益智酮甲（Yakuchinone A）、益智酮乙（Yakuchinone B）、益智醇（Oxyphyllacinol）、益智新醇（Neonootkatol）[9～13]。

1.3 黃酮類化合物

目前發(fā)現(xiàn)益智中的2個(gè)黃酮為白楊素（Chrysin）、楊芽黃素（Tectochrysin），另外還有1個(gè)為黃酮醇（Izalpinin）[6，7，9，11]。

1.4 其他成分

尚發(fā)現(xiàn)異香草醛（Isovanillin）[14]、原兒茶酸（Protocatechuic acid）[15]，以及甾醇類化合物[6]如β-胡蘿卜苷（Daucosterol）、β-谷甾醇（β-sitosterol）、胡蘿卜苷棕櫚酸酯（Daucosterol palmitate）等。另外，益智還含有多種微量元素、可溶性總糖、粗脂肪、脂肪酸、多種維生素、蛋白質(zhì)及氨基酸等[16～18]。

2 益智藥材化學(xué)成分含量研究

2.1 單一化學(xué)成分含量測定

2.1.1 圓柚酮 圓柚酮（Nootkatone）屬于雅檻藍(lán)烷（Eremophilane）系的雙環(huán)倍半萜酮，它在抗實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍、抑制脂多糖活化巨噬細(xì)胞中NO的產(chǎn)生、抑制由抗原引發(fā)的RBL-2H3細(xì)胞的脫落等方面具有顯著的活性[7]，為益智藥材的有效成分之一。李興華等[19]建立了高效液相色譜（HPLC）測定益智果實(shí)甲醇超聲提取物中圓柚酮含量的方法，并對(duì)海南省瓊海市、三亞市、瓊中縣、萬寧市、?？谑械葞讉€(gè)產(chǎn)地的益智藥材中圓柚酮的含量進(jìn)行了比較，各產(chǎn)地圓柚酮含量差異不大，在1.50～2.10 mg·g-1范圍之間。黃勤挽等[20]采用氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）聯(lián)用法分析益智種子鹽炙前后水蒸氣蒸餾法提取得到的揮發(fā)油成分，發(fā)現(xiàn)鹽炙前后圓柚酮相對(duì)含量無明顯變化，分別為12.11%、12.92%。

2.1.2p-聚傘花烴p-聚傘花烴（p-Cymene）具有祛痰、止咳及抑菌作用。常艷波等[21]采用氣相色譜（GC）法建立了以p-聚傘花烴為指標(biāo)的含量測定方法，并測定了4個(gè)不同批次的益智果實(shí)水蒸氣蒸餾法得到的揮發(fā)油中p-聚傘花烴的含量，發(fā)現(xiàn)含量略有差別，范圍為0.08%～0.12%。羅秀珍等[22]經(jīng)GC-MS分析，發(fā)現(xiàn)益智果實(shí)揮發(fā)油中p-聚傘花烴的含量最高，相對(duì)含量為44.87%。

2.2 總成分含量測定

2.2.1 揮發(fā)油 揮發(fā)油是益智的主要藥用組分，經(jīng)研究傳統(tǒng)的水蒸氣蒸餾法獲得的揮發(fā)油體積分?jǐn)?shù)約為0.7%～1.8%[23]，超臨界萃取獲得的揮發(fā)油為3.64%[24]。20世紀(jì)90年代以來，國內(nèi)學(xué)者對(duì)益智中的揮發(fā)油成分進(jìn)行了一些研究。黃勤挽等[20]采用GC-MS法對(duì)廣西產(chǎn)益智種子鹽炙前后水蒸氣蒸餾法提取得到的揮發(fā)油成分進(jìn)行對(duì)比研究。通過鑒定表明，益智仁揮發(fā)油中有68種化合物，鹽益智仁揮發(fā)油中有49種化合物，兩者共有的化合物有33種。益智仁鹽炙后揮發(fā)油的組分發(fā)生了較大變化，消失組分35個(gè)，特別是低沸點(diǎn)組分；增加組分16個(gè)，如生品中相對(duì)含量較高的α-愈創(chuàng)木烯（2.86%）在鹽炙品中未檢出，鹽炙品中相對(duì)含量較高的（-）-脫氫香橙烯（2.53%）在生品中未檢出。生品中含量較高的成分有圓柚酮（12.11%）、香橙烯（10.70%）、7-表-α-芹子烯（3.90%）、二環(huán)欖香烯（3.46%）、葎草烯環(huán)氧化物Ⅱ（3.22%）；鹽炙后含量較高的成分有圓柚酮（12.92%）、香橙烯（10.90%）、β-紫羅蘭酮（4.49%）、7-表-α-芹子烯（3.73%）、二環(huán)欖香烯（3.45%）。張文煥等[24]比較了水蒸氣蒸餾法和超臨界萃取法獲得的益智果實(shí)中揮發(fā)油的成分，前者以低沸點(diǎn)成分為多，最突出的是α-蓽澄茄烯，其相對(duì)含量前者為9.14%，后者為1.09%；后者以高沸點(diǎn)成分為多，其中圓柚酮的相對(duì)含量在后者為14.00%，前者則為5.12%。前者中含量較高的成分有香橙烯（13.62%）、十氫1，1，7-三甲基-4-亞甲基-1H-環(huán)丙烷［e］甘菊環(huán)（10.55%）、α-蓽澄茄烯（9.14%）、蛇麻烷-1，6-二亞乙基三胺-3-酯（6.73%）、喇叭茶醇（5.77%）、圓柚酮（5.12%）；后者中含量較高的成分有香橙烯（17.82%）、圓柚酮（14.00%）、十氫1，1，7-三甲基-4-亞甲基-1H-環(huán)丙烷［e］甘菊環(huán)（8.98%）、1，2-苯甲酸，單（2-乙基己基）-酯（5.94%）、4-乙酰氧基桉葉-11，（14）-二烯（5.28%）。2種不同方法制備的提取物的主要共有成分只有19個(gè)，但其在各自提取物中的相對(duì)含量相差較大，特別是桃金娘烯醛、α-蓽澄茄烯和圓柚酮的含量各相差約13倍、8.4倍和2.7倍。易美華等[25]采用GC-MS法分析鑒定了水蒸氣蒸餾法得到的益智果實(shí)（或種子不確定）及葉、莖中的揮發(fā)油，鑒定出益智果實(shí)（或種子）揮發(fā)油中的58種化合物（相對(duì)含量總和占93.54%）。這58種化合物中，益智葉只有14種相對(duì)應(yīng)（相對(duì)含量總和占29.21%），益智莖只有6種相對(duì)應(yīng)（相對(duì)含量總和占50.75%），表明益智莖、葉中的揮發(fā)油種類和相對(duì)含量與果實(shí)（或種子）相比差異很大。益智果實(shí)（或種子）中含量較高的成分順序?yàn)椋合愠认?.81%）、1，2，4，5-四甲基-苯（5.86%）、圓柚酮（5.35%）、十氫-1，1，7-三甲基-4-亞甲基-1H-環(huán)丙基甘菊環(huán)（1H-cyocloprop[e]azulene，decahydro-1，1，7-trimethyl-4-methylene，4.61%）、1-甲基-3-（1-甲乙基）-苯（3.05%）。羅秀珍等[22]經(jīng)GC-MS分析，發(fā)現(xiàn)益智果實(shí)經(jīng)水蒸氣蒸餾法得到的揮發(fā)油中相對(duì)含量較高的成分順序?yàn)閜-聚傘花烴（44.87%）、香橙烯（9.13%）、芳樟醇（Linalool，4.39%）、桃金娘醛（Myrtenal，3.90%）、β-蒎烯（β-Pinene，3.87%），另外圓柚酮含量為1.27%。林敬明等[26]用GC-MS法分析了超臨界萃取的益智果實(shí)揮發(fā)油成分，揮發(fā)油含量較高的成分順序?yàn)?βH，5α-Eremophila-1（10），11-Dien-2-one（6.65%）、香橙烯（6.10%）、姜酮（Zingiberone，4.40%）、桉油精（Eucalyptol，3.93%）。陳畫虹等[27]針對(duì)益智果實(shí)幾個(gè)部位的揮發(fā)油進(jìn)行GC-MS分析比對(duì)，發(fā)現(xiàn)益智種子、果皮、全果揮發(fā)油含量及油中主要成分均有顯著差異。其中低沸點(diǎn)成分果皮和全果較接近，高沸點(diǎn)成分種子和全果比較接近，而有趣的是，果皮中有8個(gè)相對(duì)含量大于3%的成分在全果中未檢出，如含量較高的成分有法呢烯（6.54%）、α-葎草烯（5.80%）、α-蓽澄茄烯（4.75%）、β-沒藥烯（4.28%）等；全果中含量較高的成分有4-異丙基甲苯（26.71%）、香橙烯（6.06%）、圓柚酮（4.57%）、Vulgarol B（2.73%）、牻牛兒烯（2.53%）；果皮中含量較高的成分有4-異丙基甲苯（14.38%）、法呢烯（6.54%）、二環(huán)（3，1，1）庚烯（6.49%）、α-葎草烯（5.80%）、4-甲基-1-異丙基環(huán)己烯-3-醇（4.86%）；種子中含量較高的成分有圓柚酮（14.42%）、香橙烯（14.00%）、牻牛兒烯（6.81%）、Vulgarol B（6.49%）、β-花柏烯（3.89%）等。因此，從各部位所含化學(xué)成分的質(zhì)量差異而言，臨床用藥應(yīng)當(dāng)按藥典法加以炮制后再入藥。

益智藥材揮發(fā)油成分的含量研究報(bào)道較多，就水蒸氣蒸餾法和超臨界萃取法獲得的揮發(fā)油，不同研究者的GC-MS研究結(jié)果中給出的主成分及其含量多少存在一定的差異性。其中對(duì)于圓柚酮、香橙烯等一些共性成分，可考慮作為益智的質(zhì)量控制指標(biāo)性成分，值得進(jìn)一步深入研究。

2.2.2 總黃酮 吳德玲等[28，29]以AlCl3-NaNO2-NaOH顯色，采用紫外分光光度法（以蘆丁為對(duì)照品）測定了益智藥材中總黃酮的含量，對(duì)海南、廣東、廣西、市售益智果實(shí)樣品以及益智不同藥用部位（種子和果殼）樣品的石油醚脫脂后80%乙醇回流提取液中總黃酮含量進(jìn)行了測定。發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的益智果實(shí)中總黃酮含量差異較大，海南和廣東的果實(shí)樣品中總黃酮含量比較接近，在7.65～9.85 mg·g-1范圍之間，而廣西的果實(shí)樣品中總黃酮含量較高，在14.15～15.12 mg·g-1范圍之間，市售果實(shí)樣品（產(chǎn)地及采收時(shí)間不詳）總黃酮含量達(dá)58.69 mg·g-1；另外，益智種子中總黃酮含量（12.2 mg·g-1）高于果殼（9.5 mg·g-1）。由于AlCl3-NaNO2-NaOH顯色（蘆丁為對(duì)照）的紫外分光光度法測定總黃酮方法存在疑義[30]，目前發(fā)現(xiàn)的益智中的黃酮類主要是黃酮，有可能不顯色，因此上述結(jié)果也許不能真正評(píng)價(jià)其中的黃酮類化合物的真實(shí)含量。

2.2.3 多糖 汪金玉等[31]采用以果糖為參照，測定280 nm波長處吸收度的紫外分光光度法測定了海南陳水地區(qū)等6個(gè)產(chǎn)區(qū)2007年產(chǎn)益智種子和果殼中低聚糖的含量。提取方法為95%乙醇超聲提取至無糖反應(yīng)的藥渣，再用40%乙醇超聲提取，提取物用濃鹽酸水解。6批藥材中益智果殼中低聚糖含量（1.28%～2.48%）明顯高于種子（0.50%～1.14%）。吳德玲等[28，32]采用苯酚-硫酸法以葡萄糖為對(duì)照品分析測定了海南五指山、澄邁、屯昌，廣東雷州半島，廣西南寧，安徽亳州藥材市場等不同來源益智藥材果實(shí)以及不同藥用部位（益智種子和果殼）樣品80%乙醇回流提取液中多糖的含量。結(jié)果表明，不同來源的益智果實(shí)中多糖含量差異不大，含量范圍為8.03%～8.62%；另外，益智種子（8.25%）中多糖含量高于益智果殼（4.66%）。兩份研究給出的多糖（低聚糖）含量差別很大，其原因?yàn)椴糠謥碜杂诓煌奶崛》椒ǎ糠謥碜杂诓煌瑴y定方法，因此，益智中的多糖含量狀況還有待確認(rèn)。

3 HPLC指紋圖譜

李文兵等[33]以圓柚酮為對(duì)照品，洗脫條件為乙腈-水系統(tǒng)（乙腈濃度5%～100%），檢測波長為260 nm，對(duì)益智種子鹽炙前后經(jīng)甲醇索氏提取方法制備得到的提取液中的化學(xué)成分進(jìn)行對(duì)比研究，發(fā)現(xiàn)益智鹽炙后有2個(gè)小色譜峰出現(xiàn)，其他較為一致，詳見圖1。

圖1 益智仁鹽炙前后指紋圖譜比較

吳德玲等[28]以芍藥苷為內(nèi)標(biāo)，乙腈-0.05%磷酸水梯度洗脫，檢測波長230 nm，比較了益智不同藥用部位間（種子、果殼、全果）的HPLC指紋圖譜（見圖2），發(fā)現(xiàn)種子和果殼的成分相差較大，益智全果和種子的峰形相近，對(duì)各色譜峰化合物的確認(rèn)和質(zhì)量評(píng)價(jià)還有待于進(jìn)一步研究。

4 小結(jié)

益智主產(chǎn)地為海南，其藥材質(zhì)量比較穩(wěn)定。益智藥材（全果）和飲片（種子）由于使用部位的差別，在化學(xué)成分上存在一定的差異性。由于益智或益智仁名稱指代藥用部位使用較為混亂，使得結(jié)果匯總和分析存在困難。炮制加工前后的揮發(fā)油成分有較為明顯的變化，在臨床應(yīng)用時(shí)需要加以注意。

益智是藥食同源的品種，應(yīng)用很廣泛，其揮發(fā)油成分的含量研究報(bào)道較多，其他不同類型成分如總黃酮、多糖、特征性及單一性成分的含量研究報(bào)道較少，且不夠完善。益智中的圓柚酮、香橙烯含量較高，也較為穩(wěn)定，可以考慮作為益智質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分。其他成分分析指標(biāo)和質(zhì)量控制方法均有待深入研究。正確和準(zhǔn)確的分析方法對(duì)于藥材的質(zhì)量控制至關(guān)重要，因此益智的含量分析和質(zhì)量控制方面的工作有待深入開展。

圖2 益智不同藥用部位的HPLC比較

[1]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典（下冊(cè)）[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1986：1 957.

[2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：273.

[3]Shoji N，Umeyama A，Asakawa Y，et al.Structural determination of nootkatol，a new sesquiterpene isolated fromAlpinia oxyphyllapossessing calcium-antagonistic activity[J].J Pharm Sci，1984，73（6）：843.

[4]徐俊駒，譚寧華，曾廣智，等.益智仁中2個(gè)新的降倍半萜[J].中國天然藥物，2010，8（1）：6.

[5]Xu JJ，Tan NH，Xiong J，et al.Oxyphyllones A and B，novel sesquiterpenes with an unusual 4，5-secoeudesmane skeleton fromAlpiniaoxyphylla[J].ChinChemLett，2009，20（8）：945.

[6]劉 楠，于新宇，趙 紅，等.益智仁化學(xué)成分研究[J].中草藥，2009，40（1）：29.

[7]Morikawa T，Matsuda H，Toguchida I，et al.Absolute stereostructures of three new sesquiterpenes from the fruit ofAlpinia oxyphyllawith inhibitory effects on nitric oxide production and degranulation in RBL-2H3 cells1[J].J Nat Prod，2002，65（10）：1 468.

[8]Muraoka O，F(xiàn)ujimoto M，Tanabe G，et al.Absolute stereostructuresofnovelnorcadinane and trinoreudesmane-type sesquiterpenes with nitric oxide production inhibitory activity fromAlpinia oxyphylla[J].Bioorg Med Chem Lett，2001，11（16）：2 217.

[9]羅秀珍，余競光，徐麗珍，等.中藥益智化學(xué)成分的研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，2000，35（3）：204.

[10]Shoji N，UmeyamaA，Takemoto T，et al.Isolation of a cardiotonic principle fromAlpinia oxyphylla[J].Planta Med，1984，50（2）：186.

[11]張起鳳，羅仕德，王惠英，等.中藥益智仁化學(xué)成分的研究[J].中草藥，1997，28（3）：131.

[12]Itokawa H，Aiyama R，Ikuta A.A pungent principle fromAlpinua oxyphylla[J].Phytochemistry，1982，21（3）：241.

[13]Itokawa H，Aiyama R，Ikuta A.A pungent diarylheptanoid fromAlpinia oxyphylla[J].Phytochemistry，1981，20（4）：769.

[14]徐俊駒，譚寧華，曾廣智，等.益智仁化學(xué)成分的研究[J].中國中藥雜志，2009，34（8）：990.

[15]Guan S，Bao M，Jiang B，et al.Protective effect of protocatechuic acid fromAlpinia oxyphyllaon hydrogen peroxide-induced oxidative PC12 cell death[J].Europ J Pharm，2006，538：73.

[16]徐鴻華，鄧沛峰，林 勵(lì)，等.我院引種栽培“南藥”及其部分品種的藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)[J].廣州中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1991，8（21）：231.

[17]梁本恒，伍建東，劉闖飛.益智的微量元素含量[J].中國中藥雜志，1990，15（4）：38.

[18]汪錦邦，付晴鷗，喬太生，等.益智果實(shí)的成分分析[J].中國中藥雜志，1990，15（8）：44.

[19]李興華，胡昌江，李文兵，等.益智藥材中圓柚酮含量的高效液相色譜法測定[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2010，21（1）：49.

[20]黃勤挽，胡昌江，李興迎，等.益智仁鹽炙前后揮發(fā)油成分對(duì)比研究[J].中國藥業(yè)，2008，17（5）：3.

[21]常艷波，黃 凌，朱 毅，等.氣相色譜法測定益智揮發(fā)油中p-聚傘花烴的含量[J].藥物分析雜志，2009，29（8）：1 333.

[22]羅秀珍，余競光，徐麗珍，等.中藥益智揮發(fā)油化學(xué)成分[J].中國中藥雜志，2001，26（4）：262.

[23]王寧生，黃天來，劉啟德，等.益智仁揮發(fā)油成分的分析[J].中藥材，1991，14（6）：38.

[24]張文煥，陳 健，黃惠華，水蒸氣蒸餾和超臨界CO2萃取對(duì)中藥益智揮發(fā)油萃取的比較[J].現(xiàn)代食品科技，2007，23（8）：43.

[25]易美華，肖 紅，梁振益.益智仁、葉、莖揮發(fā)油化學(xué)成分的對(duì)比研究[J].中國熱帶醫(yī)學(xué)，2004，4（3）：339.

[26]林敬明，賀 巍，吳 忠，等.益智揮發(fā)油成分的GC-MS分析[J].中藥材，2000，23（8）：448.

[27]陳畫虹，朱文姬，王冰潔.益智不同部位揮發(fā)油成分分析[J].中藥材，1999，22（9）：460.

[28]吳德玲，金傳山，寇婉青，等，益智不同藥用部位成分的比較研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2007，13（4）：1.

[29]吳德玲，金傳山，劉金旗，等，益智仁中總黃酮含量測定[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，24（6）：38.

[30]郭亞健，范 莉，王曉強(qiáng)，等.關(guān)于NaNO2-Al（NO3）3-NaOH比色法測定總黃酮方法的探討[J].藥物分析雜志，2002，22（2）：97.

[31]汪金玉，陳 康，林 勵(lì)，等，益智不同部位低聚糖的含量測定[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2009，23（1）：40.

[32]吳德玲，金傳山，馬 凱，等，益智仁中多糖的含量測定[J].安徽醫(yī)藥，2007，11（3）：218.

[33]李文兵，胡昌江，李興華，等，益智仁鹽炙前后指紋圖譜對(duì)比研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2010，21（2）：305.