胃癌組織中PTEN、p16的表達(dá)變化及意義

孫桂彬，楊景國，李永華，陳 哲，汪 威，韓櫻松

(北京市普仁醫(yī)院，北京100062)

腫瘤抑制基因與PTEN具有雙特異性磷酸酶活性，通過誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡等抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展，并能多途徑地抑制腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移。p16既是正常細(xì)胞周期的有效調(diào)控者，又是抑制腫瘤生長的關(guān)鍵因子。當(dāng)p16基因發(fā)生突變、缺失時，p16蛋白不能正常表達(dá)，使細(xì)胞增殖失控而發(fā)生癌變。本研究用利用免疫組化法對胃癌組織中的PTEN和p16蛋白進(jìn)行了檢測，觀察其表達(dá)變化并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2000～2008年北京市普仁醫(yī)院手術(shù)治療的胃癌患者78例，男55例，女23例;中位年齡58歲(29～76歲)。留取手術(shù)切除的所有胃癌組織，同時取正常胃黏膜組織21例(取自上述胃癌患者行胃切除的近側(cè)斷端胃黏膜，斷端均距癌組織5 cm以上，組織學(xué)檢查為正常胃黏膜)。所有病例手術(shù)前未接受化療、放療或免疫治療。

1.2 PTEN和p16蛋白的檢測 實(shí)驗所用鼠抗人PTEN多克隆抗體和p16單克隆抗體為美國Santa Cruz公司產(chǎn)品。SP染色試劑盒和DAB顯色劑購自北京中杉技術(shù)有限公司。標(biāo)本石蠟包埋后常規(guī)4 μm厚連續(xù)切片，每份均行HE染色和免疫組化SP染色，光鏡觀察。用已知陽性的胃癌切片作陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照。PTEN 蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)，呈淡黃色、棕黃色、棕褐色顆粒;p16蛋白定位于胞質(zhì)，呈淡黃色、棕黃色、棕褐色顆粒，且其著色強(qiáng)度高于背景非特異性染色。每份切片隨機(jī)選取5個高倍視野進(jìn)行觀察、計數(shù)。按細(xì)胞染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞數(shù)占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分比計分:細(xì)胞無染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;陽性細(xì)胞數(shù) ＜5%為0分、5% ～25%為1分、26% ～50%為2分、＞50%為3分。上述兩種評分相乘，乘積0為陰性(－)、1～3為弱陽性(+)、4～5為中度陽性(++)、≥6為強(qiáng)陽性(+++)，+、++、+++判為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較用χ2檢驗，相關(guān)關(guān)系分析用Speaman等級相關(guān)分析法。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織中 PTEN和p16蛋白的表達(dá) 胃癌組織中 PTEN和p16的蛋白陽性表達(dá)率分別為55.13%(43/78)、42.31%(33/78)，正常胃黏膜中分別為 95.24%(20/21)和 90.48%(19/21)，兩種組織中兩個指標(biāo)的陽性表達(dá)率相比，P均＜0.05。

2.2 PTEN和p16蛋白表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 胃癌組織中 PTEN的陽性表達(dá)與腫瘤直徑、Borrmann分型、分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)(P均＜0.05);p16蛋白的陽性表達(dá)與腫瘤Borrmann分型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均＜0.05)。詳見表1。

2.3 胃癌組織中PTEN和p16蛋白陽性表達(dá)的關(guān)系 在胃癌組織中PTEN和p16蛋白均呈陽性表達(dá)著25例，二者的表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.585，P＜0.01)。

表1 PTEN和p16蛋白表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

近年來的分子生物學(xué)研究表明，正常細(xì)胞增殖的調(diào)控信號大體上可分為促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入增殖周期并阻止其發(fā)生分化的正信號及抑制細(xì)胞進(jìn)入增殖周期并促進(jìn)其發(fā)生分化的負(fù)信號兩類。細(xì)胞內(nèi)存在的癌基因和抑癌基因?qū)?xì)胞的生長發(fā)育和終末分化就起著這樣的正負(fù)調(diào)控作用［1］。PTEN基因是具有雙重磷酸酶活性的抑癌基因，定位于人類染色體10q 23.3，全長約200 kb，由9個外顯子和8個內(nèi)含子組成。PTEN蛋白包括氨基端的磷酸酶結(jié)構(gòu)域、C2結(jié)構(gòu)域和羧基端結(jié)構(gòu)域［2］。起抑癌作用的主要結(jié)構(gòu)域是氨基端結(jié)構(gòu)域，其氨基端磷酸酶區(qū)域為主要的功能區(qū)，可以提高Caspase-3活性，使細(xì)胞周期停滯在G1期，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長和凋亡。Stambolic等［3］在缺失PTEN基因的小鼠細(xì)胞中導(dǎo)入過表達(dá)的PTEN，增加了其對紫外線照射、熱休克、輻射等因素誘導(dǎo)的凋亡敏感性。

Yang等［4］檢測了胃癌組織及鄰近正常胃黏膜組織、腸化生、不典型增生組織中的PTEN蛋白，結(jié)果顯示，正常胃黏膜組織及腸化生組織中PTEN蛋白表達(dá)的陽性率明顯高于不典型增生及胃癌組織。Sato等［5］發(fā)現(xiàn)，PTEN蛋白表達(dá)高低與胃癌的病理分級及預(yù)后有關(guān)，預(yù)后越差，惡性程度越高，PTEN蛋白表達(dá)水平越低。本研究結(jié)果顯示，PTEN在正常胃黏膜中的陽性表達(dá)率高于胃癌組織中的陽性表達(dá)率。提示PTEN蛋白失表達(dá)參與胃癌的發(fā)生有關(guān)，可作為胃癌發(fā)生的監(jiān)測指標(biāo)之一。本研究結(jié)果還顯示，組織分化程度高、惡性程度低者，PTEN蛋白表達(dá)的陽性率高;而PTEN蛋白失表達(dá)或弱陽性表達(dá)則多見于組織分化程度低、惡性程度高者。這可能與PTEN基因的失活導(dǎo)致其磷酸酶活性喪失，間接激活了絲裂原活化蛋白激酶信號通路有關(guān)［6］。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，PTEN蛋白的表達(dá)隨胃癌浸潤深度增加、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期的進(jìn)展而降低，說明PTEN蛋白失表達(dá)在胃癌的增殖、浸潤、轉(zhuǎn)移等過程中起到了促進(jìn)作用。郭強(qiáng)等［7］研究認(rèn)為，PTEN蛋白表達(dá)的缺失，導(dǎo)致癌細(xì)胞對凋亡信號的敏感性降低，致使腫瘤的生長速度增快。本研究結(jié)果顯示，PTEN蛋白的表達(dá)與腫瘤的大小也有相關(guān)性。

本研究結(jié)果顯示，胃癌組織中p16蛋白的陽性表達(dá)率明顯低于正常胃組織，在高、中分化胃癌中陽性表達(dá)率明顯高于低、未分化胃癌，說明p16蛋白的表達(dá)缺失與胃癌浸潤有關(guān)。p16蛋白在胃癌中表達(dá)率降低，提示p16基因表達(dá)缺失與胃癌發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，同時證明 p16為腫瘤抑制基因，與劉飛等［8］研究結(jié)果一致。胃癌組織中PTEN和p16蛋白的陽性表達(dá)呈正相關(guān)。有關(guān)PTEN和p16相互作用的分子機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。

［1］Tominaga O，Nita ME，Nagama H，et al.Expressions of cel cycle regulators in human colorectal cancer cel lines［J］.Jpn J Cancer Res，1997，88(9):855-860.

［2］Waite KA，Eng C.Protean PTEN:form and function［J］.Am J Hum Genet，2002，70(4):829-844.

［3］Stambolic V，Suzuki A，Pompa JL，et al.Negative regulation of PKB/AKT dependent cell survival by the tumor suppressor PTEN［J］.Cell，1998，95(1):29-39.

［4］Yang L，Kuang LQ，Zheng HC，et al.PTEN encoding product:a marker for tumorigenesis and progression of gastric carcinoma［J］.World J Gastroenterol，2003，9(1):35-39.

［5］Sato K，Tamura G，Tsuchiya T，et al.Analysis of genetic and epigenetic alteratens of the PTEN gene in gastric cancer［J］.Virchows Arch，2002，440(2):160-165.

［6］Gu J，Tamura M，Yamada KM.Tumor suppressor PTEN inhibits integrin and growth factor-mediated mitogen-activated-protein(MAP)kinase signaling pathways［J］.Cell Biol，1998，143(5):1375-383.

［7］郭強(qiáng)，孫曉霞，許亮.抑癌基因PTEN的表達(dá)與胃癌生物學(xué)行為及預(yù)后的關(guān)系［J］.中國誤診學(xué)雜志，2004，4(11):1776-1778.

［8］劉飛，章翔，曹衛(wèi)東，等.p16與PCNA表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤分級的相關(guān)性及意義［J］.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，1999，20(7):597-599.