2型糖尿病小鼠模型的建立及中藥舒糖寶治療效果的研究①

何勝 李文文 石麗娟 廖維芳 潘裕釗 朱曉瑩 張樹球

(右江民族醫(yī)學(xué)院重金屬與氟砷毒物研究實(shí)驗(yàn)室 廣西百色 533000)

糖尿病是以血糖升高為特征的全身代謝性疾病,臨床上主要分為1型和2型。1型又稱胰島素依賴型,由胰島素分泌障礙引起;2型又稱非胰島素依賴型,由胰島素受體缺陷引起。兩型的病因、發(fā)病機(jī)理和治療方法均不相同。它們的共同特征都是血糖升高。為研究糖尿病進(jìn)行模型的建立,常用的化學(xué)藥物四氧嘧啶、鏈佐霉素均是專一性的選擇性破壞胰島B細(xì)胞,一次性注射大劑量造成胰島素分泌障礙,血糖升高,所成的是1型糖尿病模型。本文先用高脂高糖飼養(yǎng)造成動(dòng)物血脂升高,再用小劑量的鏈佐霉素多次注射,使血糖升高,建立類似2型糖尿病,然后進(jìn)行治療,測(cè)定血糖和血脂含量。現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

1 試劑與方法

1.1 試劑與材料

鏈佐霉素,分析鈍,Sigma產(chǎn)品;檸檬酸、檸檬酸鈉,硫脲、飽和硼酸、鄰甲苯胺、冰乙酸、標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖,均為國產(chǎn)分析鈍。總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、尿素測(cè)定試劑盒,購自四川、成都邁克試劑公司。

表1 造模前后和治療前血糖含量比較(s)

表1 造模前后和治療前血糖含量比較(s)

注:方差分析:組間比較,造模后,與正常組比較,△△P＜0.01,治療前,與正常組比較,★★P＜0.01,造模后與治療前比較,稍有升高,正常組變化較小。組內(nèi)比較,模型組,與造模前比較,aP＜0.01,與造模后比較,bP＜0.01,治1組,與造模前比較,a P＜0.01,與造模后比較,bP＜0.01;治2組,與造模前比較,aP＜0.01,與造模后比較,bP＜0.01

組別 造模前(mmol/L)造模后(2d)(mmol/L)治療前(mmol/L)正常組 6.02±0.96 5.56±0.89 5.87±1.25模型組 5.89±1.24 (20.54±4.50)△△a (22.97±6.76)★★ab治1組 6.22±0.87 (19.66±6.77)△△a (23.44±10.57)★★ab治2組 6.20±1.16 (18.32±5.04)△△a (25.83±9.32)★★ab

表2 治療前、后血糖和尿糖含量比較(s)

表2 治療前、后血糖和尿糖含量比較(s)

注:方差分析:血糖:組間比較,治療前,與正常組比較,★★P＜0.01,治療后,與模型組比較,△△P＜0.01,與正常組比較,★★P＜0.01;組內(nèi)比較,模型組,與治療前比較,aP＜0.01;治1組雙和治2組舒, 與治療前比較,aP＜0.01;尿糖:治療前,與正常組比較,△△P＜0.01;治療后尿糖,與模型組比較,△△P＜0.01;與治2組比較,★★P＜0.01

組別 治療前血糖(mmol/L)治療后血糖(mmol/L)治療前尿糖(mmol/L)治療后尿糖(mmol/L)正常組 5.87±1.25 (5.62±1.23)△△ 3.59±1.61 (2.46±2.84)△△★★模型組 (22.97±6.76)★★ (26.37±6.39)★★a (275.9±55.10)△△ 335.15±128.38治1組 (23.44±10.57)★★ (18.33±9.86)△△★★a (227.13±83.05)△△ (80.53±27.53)△△★★治2組 (25.83±9.32)★★ (15.14±3.55)△△★★a (349.68±77.69)△△ 298.60±74.74

表3 血清總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、尿素含量比較(s)

表3 血清總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、尿素含量比較(s)

注:方差分析:總膽固醇(TC),與治2組比較,△P＜0.05,尿素,與正常組比較,△P＜0.05,△△P＜0.01

組別 總膽固醇(TC)(mmol/L)甘油三脂(TG)(mmol/L)尿素(mmol/L)正常組 (2.27±0.43)△ 0.92±0.24 7.50±1.19模型組 2.59±0.69 0.90±0.26 (11.37±3.09)△治1組 (2.63±0.56)△ 1.19±0.34 (11.91±2.15)△△治2組 3.32±0.84 1.32±0.47 (12.04±2.08)△

圖1 正常組腎

圖2 模型組腎

圖3 治療1組腎

圖4 治療2組腎

1.2 藥品

舒糖寶,用酸荔枝、番石榴、沙田柚等果類提取制成,由本院海爾福研制中心提供。鹽酸二甲雙胍,購自市內(nèi)藥店。

1.3 動(dòng)物

48只小白鼠,昆明種,雌雄各半,健康,鼠齡2個(gè)月,由學(xué)院動(dòng)物室提供。

1.4 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

用學(xué)院動(dòng)物室提供的標(biāo)準(zhǔn)飼料,加豬油、白砂糖、水一起攪拌,做成飯團(tuán)狀喂養(yǎng)36只小白鼠1個(gè)月。然后造模,先用鏈佐霉素[3],按40mg/(kg·d-1),用0.1mol/L檸檬酸緩沖液(pH4.0)溶解后進(jìn)行腹腔注射,每天1次,連續(xù)5d。測(cè)定造模后2d血糖,再加用四氧嘧啶,按100mg/kg腹腔注射1次,測(cè)定48h,(2d的血糖)。造模組分成3組:模型組,治1組,治2組,每組12只。另設(shè)正常組(12只)。按成人劑量折算計(jì),蒸餾水溶解后灌胃,每日1次。治2組用舒糖寶治療,每鼠取舒糖寶原液0.2mL加蒸餾水稀釋至0.4mL灌胃,每日1次。治療20d。測(cè)定治療后血糖。收集治療前、后尿液,測(cè)定尿糖。實(shí)驗(yàn)結(jié)束,從眼球取血,測(cè)定TG、TC和尿素。

1.5 測(cè)定方法

血糖,用鄰甲苯胺微量法測(cè)定,從小鼠尾巴取全血20uL,按文獻(xiàn)操作[1]。TC用COD-CE-PAP法測(cè)定;TG用GPO-PAP法測(cè)定;尿素,用脲酶波氏法測(cè)定;具體操作按試劑盒說明書。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)用SSTP軟件(上?？萍汲霭嫔?.00版本)統(tǒng)計(jì),方差分析,Q檢驗(yàn)。結(jié)果用(s)表示。

2 結(jié)果

(1)造模前、后血糖含量測(cè)定結(jié)果。結(jié)果顯示,組內(nèi)前、后比較,造模組造模后血糖含量明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P＜0.01;治療前比造模后尚進(jìn)一步升高。組間比較,造模組血糖含量明顯高于正常組,見表1。

(2)治療前、后血糖和尿糖含量測(cè)定結(jié)果。結(jié)果顯示,血糖:組間比較,治療前、后正常組均明顯低于其他3組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P＜0.01;組內(nèi)前、后比較,模型組,治療后明顯高于治療前,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P＜0.01;治1組和治2組,治療后明顯低于治療前,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P＜0.01;尿糖治療前、后正常組均明顯低于其他3組,治療后治療組均降低,模型組升高,見表2。

(3)治療后血清總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、尿素含量測(cè)定結(jié)果。結(jié)果顯示,總膽固醇(TC)治2組明顯高于正常組和治1組;尿素正常組明顯低于其他3組,見表3。

(4)腎病理形態(tài)研究結(jié)果。結(jié)果顯示,正常組:腎小體大小正常,腎小囊壁、邊界清析可見。腎小管細(xì)胞無空泡和壞死和排列及結(jié)構(gòu)正常,無出血、腫狀、空泡和壞死現(xiàn)象(圖1)。模型組:腎小體數(shù)量減少,腎小體邊界不清楚,腎小囊壁有斷裂現(xiàn)象,腎小管細(xì)胞腫狀、空泡和壞死,腎間質(zhì)有出血現(xiàn)象(圖2)。治療1組:腎組織病理改變好轉(zhuǎn),腎小管細(xì)胞和排列及結(jié)構(gòu)基本正常,腫狀、空泡和壞死現(xiàn)象減少(圖3)。治療2組:腎組織基本正常,腎小體數(shù)量增多,腎小囊壁、臟層邊界清析,腎小管細(xì)胞腫狀、空泡和壞死病理改變明顯好轉(zhuǎn)(圖4)。

3 討論

(1)造模小鼠血糖明顯升高,平均都在15mmol/L以上,且明顯高于正常組。表明造模是成功的。文獻(xiàn)普遍認(rèn)為血糖高于11.1mmol/L以上為造模成功[2]。因此可用于實(shí)驗(yàn)治療。本次是采用鏈佐霉素多次中劑量連續(xù)腹腔注射,比起覃藝用一次性注射鏈佐霉素血糖升高較好[5],一次性血糖升高不夠高,不理想,用于實(shí)驗(yàn)治療較難對(duì)照比較。一般平均在15mmol/L以上較好,但最高血糖達(dá)30mmol/L以上,又容易死亡。

(2)治療后,標(biāo)準(zhǔn)藥物對(duì)照組[3]鹽酸二甲雙胍組(治1組)血糖從(23.44±10.57)降至(18.33±9.86),舒糖寶治2組血糖從(25.83±9.32)降至(15.14±3.55),雖然沒有降至正常,但降的幅度都較大,說明有較好的治療效果。對(duì)照組正常組前后變化不大,模型組沒有降低反而升高了。

(3)尿糖測(cè)定結(jié)果表明,在治療前,模型組、治1組、治2組尿糖都明顯高于正常組(P＜0.01),治療后,治1組下降最明顯,治2組也有一定程度下降,模型組不降反而有升高。尿糖結(jié)果與血糖結(jié)果是一致的。正常組也測(cè)出少量尿糖,其原因不清楚。

(4)總膽固醇(TC):治2組明顯高于正常組和治1組;甘油三脂(TG)沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異,據(jù)臨床所見,部分糖尿病人可見總膽固醇和甘油三脂升高,這是糖代謝障礙導(dǎo)致脂類代謝障礙的結(jié)果[4],但并非一定出現(xiàn),僅部分病人,以甘油三脂升高多些;尿素正常組明顯低于其它3組(P＜0.01),顯示高血糖可能造成腎臟損害,這與腎臟病理形態(tài)損害相一致,也與臨床所見相一致,但后3組之間尚未出現(xiàn)顯著性差異,原因尚待進(jìn)一步探討。

[1]安乙敏.生化檢驗(yàn)學(xué)[M].成都:四川科學(xué)技術(shù)出版社出版,1990:68.

[2]黃松.糖尿病動(dòng)物模型研究現(xiàn)狀及進(jìn)展[J].廣西醫(yī)學(xué),2002,24(1):46～47.

[3]趙世華,趙文娟,閻勝利,等.吡格列酮和二甲雙胍治療2型糖尿病的對(duì)照研究[J].天津醫(yī)藥,2004,32(8):463～465.

[4]錢榮立.糖尿病與血脂異常[J].中國糖尿病雜志,2000,10(2):125.

[5]覃藝,張樹球,郭厚基,等.舒糖寶對(duì)STZ造模2型糖尿病小鼠生化指標(biāo)的影晌[J].實(shí)用糖尿病雜志,2005,1(5):21～23.