四種維藥對常見呼吸道病毒作用的體外實驗研究

李際強 王懷振 買買提艾力·吐爾遜 李 黎 劉 妮 張奉學(xué)

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510120;2.新疆喀什地區(qū)第一人民醫(yī)院，新疆 喀什 844000;3.廣州中醫(yī)藥大學(xué)熱帶醫(yī)學(xué)研究所，廣東 廣州 510405)

維吾爾醫(yī)藥是祖國醫(yī)藥學(xué)不可分割的組成部分，也是伊斯蘭醫(yī)藥學(xué)的重要組成部分。幾千年來維吾爾族人民在防病治病的過程中，積累了豐富的經(jīng)驗，尤其是其在治療感冒方面，現(xiàn)已有多種維藥成藥上市，應(yīng)用于臨床顯示了較好的療效。隨著呼吸道傳染病的多發(fā)與流行，該類維藥是否可以用于治療病毒性呼吸道傳染病，除臨床研究外，尚需進一步提供實驗室依據(jù)。本文選取4種維藥進行體外抗常見呼吸道病毒的研究，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 材料

1.1 藥物來源:復(fù)方祖帕糖漿由喀什地區(qū)維吾爾醫(yī)院提供，為院內(nèi)制劑，產(chǎn)品批號:201201006;西帕依固齦液由新疆奇康哈博維藥有限公司提供，產(chǎn)品批號:11148;祖卡木顆粒由新疆奇康哈博維藥有限公司，產(chǎn)品批號:111053;感通丹(史秘感通丹)由新疆薩達凱特生物科技有限公司、奇康哈博制藥有限公司提供，產(chǎn)品批號:110906。實驗時將復(fù)方祖帕糖漿、西帕依固齦液取原液進行稀釋，祖卡木顆粒2.55g加純水5ml，史秘感通丹稱5.09g加純水5ml。煮沸半小時進行滅菌處理，1.5ml管分裝4℃冰箱，祖卡木顆粒冷卻后有大量黃色沉淀析出，再加熱不能溶解。

1.2 毒株與細胞:甲1型流感病毒、鼻病毒、腺病毒3型、呼吸道合胞病毒，均為廣州中醫(yī)藥大學(xué)熱帶醫(yī)學(xué)研究所病毒室凍存。甲1型流感病毒FM1株于狗腎細胞(MDCK)傳代，以細胞病變及雞紅血球血凝法來判斷其滴度;呼吸道合胞病毒long株引自美國典型培養(yǎng)物收藏中心(ATCC，VR-26)，并于人肺癌細胞(A549)中傳代擴增，并進行測定;腺病毒3型引進自ATCC(VR-3);鼻病毒R14型引進自ATCC(VR-284)均于人肺二倍體細胞(HEL)細胞上傳代，滴定與檢測，以上4種病毒均在35℃，5%CO2條件下培養(yǎng)。MDCK、HEL、A549等細胞均由廣州中醫(yī)藥大學(xué)熱帶醫(yī)學(xué)研究所病毒室凍存。

2 方法［1］

2.1 藥物毒性試驗:在96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每96孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔加入(5×104～2×103/ml)的細胞(HEL、MDCK、A549)，37℃ 5%CO2培養(yǎng)，待細胞長成單層后，分別加入不同濃度的4種藥物。逐日觀察細胞病變，培養(yǎng)4 d后則終止實驗，以細胞不出現(xiàn)病變的最小稀釋度為該藥對細胞無毒界限。試驗時設(shè)陽性藥對照、正常細胞對照。

2.2 藥物對病毒致細胞病變的體外抗病毒作用:分別加入無毒濃度下的4種藥物，分4個濃度，每濃度4孔。其中2孔作為藥物對照，2孔攻擊100 TC ID50的病毒，100μl/孔。33℃5%CO2培養(yǎng)，每天在倒置顯微鏡下觀察細胞病變(CPE)并記錄。試驗時設(shè)陽性藥對照、正常細胞對照及病毒對照。當病毒對照出現(xiàn)“++”時終止實驗。細胞出現(xiàn)病變的程度按以下6級標準記錄:一為細胞生長正常，無病變出現(xiàn);±為細胞病變少于整個單層細胞的10%;+為細胞病變約占整個單層細胞的25%;++為細胞病變約占整個單層細胞的50%;+++為細胞病變約占整個單層細胞的75%:++++為細胞病變約占整個單層細胞的75%以上。

3 結(jié)果

3.1 藥物的細胞毒性試驗結(jié)果見表1:藥物在以下表中濃度時對細胞無毒性，在該濃度以上表現(xiàn)為細胞空泡，破碎等毒性特征。

表1 藥物在不同細胞上最大無毒濃度結(jié)果

3.2 藥物對病毒致細胞病變的體外抗病毒作用:史秘感通丹在無毒濃度50mg/ml下能完全抑制流感病毒甲型FM1株，西帕依固齦液在無毒濃度1:200倍稀釋時能完全抑制腺病毒3型所致病變，復(fù)方祖帕糖漿、祖卡木顆粒分別在無毒濃度1:300、15.94mg/ml下能完全抑制呼吸道合胞病毒。其中抗流感病毒A型FM1株、腺病毒實驗重復(fù)2次，結(jié)果與表2一致。

表2 4種維藥不同濃度對4種呼吸道病毒致病變的抑制作用

4 討論

維吾爾族醫(yī)藥在治療感冒等常見病方面積累了較豐富的經(jīng)驗，目前已出現(xiàn)較多的上市藥物。為了明確該類維藥是否具有抗常見呼吸道病毒作用，我們對多種維藥進行了體外抗病毒篩選，結(jié)果表明部分維藥顯示了較好的體外抗病毒作用。

感通丹，全稱為史秘感通丹，由甘草根、神香草、薄荷、大葉破布木等藥物組成，用于寒、熱引起的各種普通感冒、流行性感冒，臨床癥狀表現(xiàn)為頭痛、發(fā)熱、噴嚏、流涕、鼻塞、咽喉痛、全身酸痛乏力、食欲不振、咳嗽等。感通丹在無毒濃度50mg/ml下能完全抑制流感病毒A型FM1株，表明了其良好的抗流感病毒作用。

西帕依固齦液是新疆維吾爾醫(yī)學(xué)研究所在維吾爾醫(yī)學(xué)傳統(tǒng)秘方基礎(chǔ)上研制的漱口制劑，主要成分為沒食子。該藥物在臨床及實驗室研究中均表現(xiàn)出較好的抗細菌及抗真菌的作用［2-3］，但未見其抗病毒方面的研究，我們研究發(fā)現(xiàn)，西帕依固齦液在無毒濃度1:200倍稀釋時能完全抑制腺病毒3型所致病變，因此，該藥具一定的抗菌、抗病毒作用。

復(fù)方祖帕糖漿為新疆喀什地區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院的院內(nèi)制劑，由神香草、新疆園棗、鐵線厥、葫蘆巴、甘松、香沒藥樹子、茴香根皮、芹菜根、騖尾根、小茴香等藥物組成，具有潤肺、納氣、止咳等作用，應(yīng)用于肺炎、支氣管炎及感冒等。本研究表明，復(fù)方祖帕糖漿在1:300無毒濃度下能完全抑制呼吸道合胞病毒。

祖卡木顆粒由山柰、睡蓮花及罌粟殼等藥味的提取物組成，具有調(diào)節(jié)異常氣質(zhì)、清熱、發(fā)汗、通竅等作用，用于感冒咳嗽，發(fā)熱無汗，咽喉腫痛，鼻塞流涕等。臨床報道表明，其治療兒童普通感冒快速有效，而且安全［4］。本研究表明，祖卡木顆粒在15.94mg/ml無毒濃度下能完全抑制呼吸道合胞病毒。

以上維藥顯示了一定的體外抗病毒作用，尤其是史秘感通丹抗流感病毒甲1型作用明顯，需進一步深入探討該藥物的抗流感病毒的作用機理。

［1］富杭育，盧長安，賀玉琢，等.清肺飲抗小鼠流感病毒性肺炎的實驗研究［J］.中華實驗和臨床病毒學(xué)雜志，1996，10(4):381

［2］李婷，吳佩玲，閆亮.含漱西帕依固齦液或H202對牙體治療中細菌性氣霧的影響［J］.實用口腔醫(yī)學(xué)雜志，2010，26(4):556-557

［3］李澤慧，聶晶，鐘良軍，等.西帕依固齦液和沒食子體外抗白色念珠菌的活性測定［J］.中華老年口腔醫(yī)學(xué)雜志，2010，8(3):148-149

［4］楊錫明.祖卡木顆粒治療兒童感冒的臨床療效及安全性［J］.中國當代醫(yī)藥，2010，17(3):79