高效液相色譜法測定胃痛舒片中甘草苷含量

靳茂禮，趙艷普，王潤彪，郭 毅

(1.河北省石家莊市食品藥品檢驗(yàn)所，河北 石家莊 050031;2.河北省藥品檢驗(yàn)所，河北 石家莊 050011)

胃痛舒片收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》(第十四冊(cè))，由豬胃黏膜、厚樸、海螵蛸、顛茄浸膏、甘草等5味藥組方，具有健脾和胃、理氣止痛的功效，用于脾胃虛弱引起的胃脘脹痛、嘈雜吞酸、消化性潰瘍和慢性胃炎等癥[1]。現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有海螵蛸的理化鑒別，不能有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，筆者經(jīng)試驗(yàn)研究，建立了胃痛舒片中甘草、厚樸的薄層色譜鑒別及甘草酸的高效液相色譜(HPLC)含量測定方法[2]。現(xiàn)繼續(xù)以甘草中黃酮類成分甘草苷作為定量指標(biāo)，研究建立了測定甘草苷含量的高效液相色譜法，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Aglient 1200型高效液相色譜儀(四元泵、紫外檢測器、自動(dòng)進(jìn)樣器);胃痛舒片由河北金興制藥廠提供;甘草苷對(duì)照品(購自中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為111610－200604);陰性樣品自制;乙腈為色譜純，水為去離子水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Shimadzu VP －ODS柱(150 mm ×6.0 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈－0.5%冰醋酸(18∶82);檢測波長:276 nm;流速:1 mL/min;柱溫為室溫;進(jìn)樣量:10 μL。在此條件下，樣品中甘草苷與其他成分分離良好，保留時(shí)間適中，見圖1。

2.2 溶液制備

圖1 高效液相色譜圖

取甘草苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取0.3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇溶液25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用70%甲醇溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取不含甘草的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):精密吸取2.2項(xiàng)下3種溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液色譜中，在與甘草苷對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間相應(yīng)位置無干擾，見圖1。

線性關(guān)系考察:精密吸取不同量的對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀，測定峰面積。以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=4.4496+1781.6 X，r=0.9999。結(jié)果表明，甘草苷進(jìn)樣量在0.0375－3.748 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，分別于 0，1，4，8，14，24 h時(shí)進(jìn)樣1次，測定峰面積。結(jié)果的 RSD=0.59%(n=6)，表明供試品溶液至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品，分別精密稱取0.3 g，共取6份，依法制備供試品溶液，分別測定含量。結(jié)果的 RSD=1.1%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知含量的胃痛舒片樣品(甘草苷含量5.06 mg/g)0.15 g，分別精密加入一定質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，依法測定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測定

取8批樣品，按上述方法測定，含甘草苷最低為0.65 mg/片，最高為2.48 mg/片，含量差異較大，結(jié)果見表2。

表1 甘草苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

表2 樣品含量測定結(jié)果(mg/片)

3 討論

以流動(dòng)相作溶劑，在200～350 nm波長范圍內(nèi)測定了甘草苷對(duì)照品的紫外光譜圖，結(jié)果在217，276，311 nm波長處有最大吸收，參照2005年版《中國藥典(一部)》甘草項(xiàng)下的測定方法，確定276 nm為測定波長。

參照文獻(xiàn)[3－4]，以乙腈－0.5%冰醋酸(18∶82)作流動(dòng)相，供試品溶液色譜分離良好，流動(dòng)相配制簡單，保留時(shí)間適中。曾嘗試用甲醇－0.5%冰醋酸(18∶82)作流動(dòng)相，結(jié)果未有效分離。

取本品，分別以甲醇、乙醇、70%甲醇、50%甲醇、30%甲醇作為提取溶劑，依法測定，結(jié)果以70%甲醇和以50%甲醇做提取溶劑結(jié)果相近，考慮到50%甲醇過濾速度較慢，選定70%甲醇作為提取溶劑。取本品，以70%甲醇溶液作為提取溶劑，分別超聲提取 20，30，40 min，測得含量分別為 2.41，2.58，2.47 mg/片，確定超聲時(shí)間為30 min。

分別采用不同牌號(hào)的色譜柱，如 Shimadzu VP－ODS柱(150 mm ×6.0 mm，5 μm)、Capcell PAK C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)、Waters C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)對(duì)同一批樣品進(jìn)行測定，結(jié)果都能分離完全，含量測定結(jié)果基本一致，表明該方法有良好的耐用性。

不同批號(hào)樣品的含量結(jié)果差異較大，表明所投原料甘草的質(zhì)量不一，2005年版《中國藥典(一部)》甘草項(xiàng)下已收載了甘草苷的含量測定，但該品種現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)并無相應(yīng)控制手段，從一定程度上降低了對(duì)原料甘草的質(zhì)量控制。該方法的建立可對(duì)胃痛舒片的質(zhì)量控制提供有效技術(shù)支持。

[1]WS3－B－2741－97.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第十四冊(cè))[S].

[2]趙艷普，李冬梅，袁 浩，等.胃痛舒片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2008，25(5):431 －434.

[3]猶 衛(wèi)，王 敏，馬天俊.HPLC法測定復(fù)方甘草合劑中甘草苷的含量[J].資源開發(fā)與市場，2005，21(6):491－492.

[4]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:59－60.