高效液相色譜－蒸發(fā)光散射檢測器法測定鹽酸金剛烷胺片中鹽酸金剛烷胺含量

裴 璐，張愛兵

(河北省唐山市藥品檢驗所，河北 唐山 063000)

鹽酸金剛烷胺片主要用于治療帕金森綜合征藥物誘發(fā)的錐體外系疾病，也用于預(yù)防A型流感病毒所引起的呼吸道感染，其在紫外及可見光區(qū)均無吸收。對于鹽酸金剛烷胺片的含量測定方法，2005年版《中國藥典(二部)》采用高氯酸非水滴定法[1]，2010年版《中國藥典(二部)》采用的電位滴定法[2]，操作煩瑣，前處理樣品取樣量較大。有報道采用酸性染料比色法[3]、滴定法[4]、高效液相色譜法[5－6]、示波極譜法[7]等測定鹽酸金剛烷胺含量。筆者采用高效液相色譜－蒸發(fā)光散射檢測器法測定鹽酸金剛烷胺片的含量，快速、簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好。

1 儀器與試藥

Waters e2695高效液相色譜系統(tǒng);Alltech 2000ES ELSD檢測器;Empower色譜工作站;Sartorius BP211D型電子天平。鹽酸金剛烷胺對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100426－200301);鹽酸金剛烷胺片(0.1 g)為市售，水為純化水，乙腈為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Aglient BDS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈 －水(70∶30)，流速:0.5mL/min，柱溫:30℃，進樣量:10μL;漂移管溫度:95℃，霧化氣體為空氣，載氣流速:2.5 L/min。在該色譜條件下，理論板數(shù)不低于4000。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜－蒸發(fā)光散射檢測器法色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取鹽酸金剛烷胺對照品10.12 mg，置100 mL容量瓶中，加流動相溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品貯備液。取鹽酸金剛烷胺片20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉0.08475 g(約相當(dāng)于鹽酸金剛烷胺50 mg)，置50 mL容量瓶中，加流動相振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL置50 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。同時配制不含主藥的陰性空白溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密量取 2.2項下的對照品貯備液2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0 mL，分別置 10 mL 量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制得系列對照品溶液，按上述色譜條件進樣測定，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=3.736×106X －2.3496×104，r=0.9996(n=6)。結(jié)果表明，鹽酸金剛烷胺質(zhì)量濃度在 40.92 ～143.22 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果峰面積的 RSD為0.7%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:精密量取同一供試品溶液10 μL，分別于0，4，8，12，16，20，24 h 時進樣測定。結(jié)果峰面積的 RSD 為 0.8%(n=7)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗:按2.2項下方法制備供試品溶液6份，進樣測定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計算。結(jié)果平均標(biāo)示含量為99.6%，RSD 為 0.6%(n=6)。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量鹽酸金剛烷胺片細(xì)粉9份，精密加 2.26 g/L 的對照品溶液 4.0，5.0，6.0 mL，按 2.2 項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進樣測定。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測定

取5批不同廠家樣品，按上述方法測定。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(百分標(biāo)示量，n=5)

3 討論

鹽酸金剛烷胺在水或乙醇中易溶[2]。經(jīng)試驗，鹽酸金剛烷胺片在水中能很好溶解，但水的沸點高，對漂移管的溫度要求高，因此溶劑選擇與流動相比例一致的乙腈、水能夠有效地改善樣品霧化溫度，達(dá)到檢出率高的效果。為使測定結(jié)果準(zhǔn)確，方法的重現(xiàn)性好，對被測樣品質(zhì)量溶度進行選擇，分別配制 0.05，0.1，0.2 g/L 的供試品溶液進行測定。根據(jù)鹽酸金剛烷胺的峰面積及靈敏度，選擇0.1 g/L為宜。

現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[2]采用容量法測定。試驗中發(fā)現(xiàn)，該操作步驟煩瑣，而文中建立的高效液相色譜－蒸發(fā)光散射檢測器法簡便、快速、準(zhǔn)確。

鹽酸金剛烷胺，分子結(jié)構(gòu)中無共軛雙鍵，因而在紫外光區(qū)無吸收，最大吸收波長為195 nm，用紫外方法測定時存在基線漂移不穩(wěn)、不宜檢測等缺點。蒸發(fā)光檢測器基線平穩(wěn)，試驗中對霧化載氣流量和漂移管溫度進行優(yōu)化，用高效液相色譜－蒸發(fā)光散射檢測器法測定鹽酸金剛烷胺的含量，獲得較好的結(jié)果。

試驗中，考察了乙腈－0.06%三氟醋酸流動相系統(tǒng)，基線不容易平穩(wěn)，同時三氟醋酸為揮發(fā)性酸，腐蝕性強，不利于環(huán)保;以乙腈－水(70∶30)流動相時系統(tǒng)出峰時間快，峰面積穩(wěn)定。

試驗中考察了 Aglient BDS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)、Thermo BDS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)、Phenomsil BDS C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)不同廠家的3根色譜柱，發(fā)現(xiàn)不同品牌的色譜柱峰面積穩(wěn)定，重現(xiàn)性良好。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:538.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:716.

[3]姜德長，何選林，秦旭東.鹽酸金剛烷胺片的含量測定[J].中國藥業(yè)，2006，15(15):44.

[4]涂 瓊，吳澄清，盧慶紅.雙相滴定法測定金剛烷胺合劑的含量[J].兒科藥學(xué)雜志，2004，10(4):45.

[5]修 虹，黃榕珍，付梅春.HPLC－ELSD法測定復(fù)方氨酚烷胺膠囊中鹽酸金剛烷胺及對乙酰氨基酚的含量[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2006，7(1):23.

[6]李士敏，王 偉.液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法測定大鼠血漿中鹽酸金剛烷胺濃度及體內(nèi)藥動學(xué)研究[J].藥物分析雜志，2007，27(1):66.

[7]宋宏春，王 偉，楊永明.示波極譜法測定鹽酸金剛烷胺及其制劑的含量[J].藥物分析雜志，1993，13(6):401.