不同貯藏條件對(duì)桃仁飲片酸敗度及苦杏仁苷含量的影響

蘭志瓊 盧先明 張麗娟 孫雪梅 蔣桂華

1.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川 成都 611137；2.石家莊四藥有限公司，河北 石家莊 050035

桃仁為薔薇科植物桃Prunus persica（L.）Batsch或山桃Prunus davidiana（Carr.）Franch.的干燥成熟種子[1]，為常用中藥，具有活血祛瘀、潤(rùn)腸通便之功效，用于經(jīng)閉、痛經(jīng)、癥瘕痞塊、跌撲損傷、腸燥便秘，是婦科要藥[2]。

同其他富含油脂的果實(shí)種子類飲片一樣，桃仁在貯藏中極易發(fā)生泛油、蟲蛀、霉變、變色等變質(zhì)現(xiàn)象。但是，目前桃仁的研究工作主要集中在化學(xué)成分及藥理學(xué)領(lǐng)域，貯藏養(yǎng)護(hù)的相關(guān)研究甚少，亟待加強(qiáng)這方面的研究工作，保障臨床用藥的安全性、有效性和穩(wěn)定性。桃仁等易泛油，飲片在貯藏中易產(chǎn)生酸敗現(xiàn)象，酸敗不僅導(dǎo)致藥材產(chǎn)生一定的毒性，同是還影響飲片中有效組分油酸和亞油酸的含量，故酸敗度是評(píng)價(jià)桃仁等易泛油飲片質(zhì)量的重要指標(biāo)；苦杏仁苷在《中國(guó)藥典》2005年版一部[1]196-197、《中藥學(xué)》[2]和日本漢方制劑規(guī)格試驗(yàn)法[3]中，均被規(guī)定為質(zhì)量評(píng)價(jià)的指標(biāo)成分。故本文初步考察2年貯藏期內(nèi)不同貯藏條件下桃仁飲片酸敗度及苦杏仁苷含量的變化規(guī)律，為進(jìn)一步開展其貯藏養(yǎng)護(hù)方法的研究提供一定的科學(xué)依據(jù)。同時(shí)，通過對(duì)桃仁飲片的貯藏養(yǎng)護(hù)的系統(tǒng)研究，為今后易泛油類飲片的貯藏養(yǎng)護(hù)研究及實(shí)踐奠定一定的基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

桃仁飲片于2008年4月30日購(gòu)自成都市荷花池中藥材市場(chǎng)，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院盧先明教授鑒定其原藥材為薔薇科植物桃Prunus persica（L.）Batsch的干燥成熟種子。

遠(yuǎn)紅外輻射干燥箱（上海陽光試驗(yàn)儀器有限公司，766-2），海爾臥式低溫設(shè)備冷柜（青島海爾股份有限公司，DB255-LT/100LT），真空干燥箱 （上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司，DZG-6090型），電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海實(shí)驗(yàn)儀器廠有限公司，202-2型），高效液相色譜儀及其配套工作站（美國(guó)Agilent公司，1100型），電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司，YP601N），紫外-可見分光光度儀 （上海天美科學(xué)儀器有限公司，UV1100）。

乙腈（色譜純，美國(guó)Fisher公司），水（超純水，Milipore制備），白酒（重慶江津牌60°高粱酒，重慶江津酒廠有限公司），其余試劑均為分析純。

苦杏仁苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110820-200403）。

2 方法與結(jié)果

2.1 不同貯藏條件

前期預(yù)實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明：預(yù)處理方法、溫度、對(duì)抗劑和包裝材料是影響桃仁飲片貯藏養(yǎng)護(hù)效果的主要因素。本文以正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)法來初步考察不同貯藏條件對(duì)桃仁飲片酸敗度及苦杏仁苷的影響。將藥材整理去雜質(zhì)，平均分為11組，每組1.5 kg。其因素水平設(shè)計(jì)見表1，具體分組見表2。

表1 桃仁貯藏條件因素水平表

遠(yuǎn)紅外干燥法：將桃仁藥材均勻平鋪于托盤中，厚度不超過10 mm，50℃下遠(yuǎn)紅外干燥處理10 h，冷卻備用。

60Co-γ輻照滅菌法：將藥材桃仁經(jīng)60Co-γ射線輻照30 min，輻射量8 kGy，處理后備用。

間歇冷凍法：將藥材用厚質(zhì)藥用聚乙烯薄膜封口袋包裝，放于海爾臥式低溫設(shè)備冷柜，溫度設(shè)為-20℃，冷凍5 d后取出，并常溫保存5 d，再放入冷柜中，冷凍5 d，取出，常溫保存。

常溫（21～30℃）：庫房自然放置。陰涼（11～20℃）：空調(diào)室。

低溫（0～10℃）：冰箱模擬冷庫。

明礬對(duì)抗同貯法：將明礬粉碎成小塊，與桃仁以1∶7的重量比混合并攪拌均勻，裝袋。

滑石對(duì)抗同貯法：將滑石粉碎成小塊，與桃仁以1∶7的重量比混合并攪拌均勻，裝袋。

酒精對(duì)抗同貯法：將預(yù)處理后的藥材，在敞口塑料箱內(nèi)鋪一層藥，用95%的酒精噴灑一層，每10 kg藥材用酒精250～400 μL。藥材要鋪薄，噴灑酒精要均勻。將噴灑后的藥物用手反復(fù)拌勻，然后裝袋。

2.2 酸敗度檢查

2.2.1 油脂的提取 取桃仁20 g，研碎成粗粉，置索氏提取器中，加正己烷50 μL，置水浴上加熱回流2 h，放冷，用3號(hào)垂熔漏斗濾過，濾液置水浴上（約55℃）減壓回收溶劑至盡，即得。

2.2.2 酸敗度測(cè)定方法 按《中國(guó)藥典》2005年版ⅨP酸敗度測(cè)定法[1]附錄59分別測(cè)定各組酸值和羰基值。結(jié)果見表3、4。

由表3、4實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，在2年貯藏期內(nèi)，隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，各組桃仁飲片的酸值和羰基值均呈現(xiàn)明顯的上升趨勢(shì)。其中，第1、7、10、11組飲片酸敗最為明顯，24個(gè)月后其酸值均高達(dá)7.0以上，特別是第11組，其酸值已超過藥典限量規(guī)定 （10.0）；各組羰基值貯藏2年后雖均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，但第10、11組升高趨勢(shì)特別明顯，已超過7.80。

表2 桃仁貯藏養(yǎng)護(hù)條件實(shí)驗(yàn)研究分組

表3 貯藏期間桃仁酸值測(cè)定結(jié)果

表4 貯藏期間桃仁羰基值測(cè)定結(jié)果

2.3 苦杏仁苷含量測(cè)定[1]

2.3.1 色譜條件 色譜柱 Hypersil ODS2（4.6 mm×150 mm，5μm），檢測(cè)波長(zhǎng)為 210 nm，柱溫度為 25℃，流動(dòng)相為乙腈-水（11∶89），流速1 μL/min，理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取苦杏仁苷對(duì)照品適量，置10 μL的容量瓶中，加甲醇溶解，并定容至刻度，配制成含苦杏仁苷0.5 mg/μL的對(duì)照品溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備 取干燥的桃仁藥材粉末約0.2 g，精密稱定，置50 μL帶塞錐形瓶中，加甲醇約20 μL，超聲提取30 min，放至室溫后，濾過，用甲醇于25 μL的容量瓶中定容。0.45μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 樣品測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定。按外標(biāo)法計(jì)算苦杏仁苷含量。見表5。

表5 貯藏期間桃仁苦杏仁苷含量測(cè)定結(jié)果（%）

由表5實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，用于貯藏研究的桃仁飲片苦杏仁苷含量為2.27%，達(dá)到《中國(guó)藥典》2005年版的要求（不低于1.5%）。在2年貯藏期內(nèi)，隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，各組桃仁飲片的苦杏仁苷含量均呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。其中，第8、9組飲片苦杏仁苷含量降低趨勢(shì)相對(duì)較慢，貯藏18個(gè)月，其苦杏仁苷含量仍然合格。第1、3、7、10、11組飲片降低最為明顯，貯藏2年后甚至降至0.30%以下。

3 討論

在2年貯藏期間，隨著貯藏時(shí)間的推移，各貯藏條件下，桃仁飲片的酸值和羰基值均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，而苦杏仁苷含量呈現(xiàn)明顯的下降趨勢(shì)。其中，尤以麻袋或紙箱包裝、常溫條件下貯藏的的桃仁藥材（第1、7、10、11組）其變化趨勢(shì)最為明顯。而以真空包裝或低溫條件下貯藏的桃仁飲片（第8、9組）其酸敗程度較輕，苦杏仁苷含量降低較慢?？梢?，桃仁飲片應(yīng)以真空包裝，在低溫條件下貯藏；同時(shí)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明桃仁飲片的有效使用年限亟待研究。

貯藏2年后，經(jīng)磷化鋁熏蒸的桃仁飲片（第11組）的酸值和苦杏仁苷均未達(dá)到《中國(guó)藥典》2005年版標(biāo)準(zhǔn)?？梢?，目前常用的化學(xué)養(yǎng)護(hù)法對(duì)貯藏桃仁飲片效果較差，且該方法會(huì)污染中藥及貯藏環(huán)境，應(yīng)予以淘汰。亟待通過系統(tǒng)的科學(xué)研究，尋找適宜桃仁等富含油脂易泛油中藥飲片安全、綠色、有效的貯藏新方法，保證該類中藥臨床用藥的有效性、安全性和可控性。

本文僅研究了桃仁飲片2年貯藏期內(nèi)桃仁飲片酸敗度及苦杏仁苷含量的變化規(guī)律，接下來的研究應(yīng)體現(xiàn)在延長(zhǎng)貯藏時(shí)間，增加研究對(duì)象，建立飲片性狀、藥效學(xué)、安全性及貯藏成本等多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)系統(tǒng)上，篩選桃仁、苦杏仁、郁李仁、柏子仁等富含油脂易泛油類中藥飲片的適宜包裝貯藏方法及條件，為臨床提供安全、有效、質(zhì)量穩(wěn)定的中藥。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

[2]張廷模.中藥學(xué)[M].北京：高等教育出版社，2002：265.

[3]原田正敏．漢方生藥制劑品質(zhì)評(píng)價(jià)[M]．東京：廣川書店株式會(huì)社，1992：76．