烏頭赤石脂丸對(duì)寒凝胸痹大鼠損傷心肌和血液粘度的作用研究*

戴啟剛，汪受傳

(南京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，江蘇南京 210046)

《金匱要略·胸痹心痛短氣病》篇云:“心痛徹背，背痛徹心，烏頭赤石脂丸主之?！睘躅^赤石脂丸方由蜀椒、制川烏、制附子、干姜、赤石脂按2∶1∶1∶1∶2組成，因方中烏頭、附子、蜀椒、干姜均為辛溫大熱，故主治陽(yáng)氣不足，陰寒痼結(jié)心下之胸痹［1－3］。前期實(shí)驗(yàn)研究表明，其能減輕異丙腎上腺素所致的大鼠心肌的損傷程度，對(duì)缺血心肌有保護(hù)作用，其模型類似于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)之冠心病、心絞痛，與寒凝胸痹證型的吻合度不高［4］。本實(shí)驗(yàn)擬以冰水游泳加注射垂體后葉素復(fù)制大鼠陽(yáng)虛寒凝胸痹模型，在模證相合的前提下，通過(guò)描記心電圖，檢測(cè)血清CK、LDH、全血及血漿粘滯度，觀察心肌組織病理學(xué)變化，探討烏頭赤石脂丸對(duì)寒凝胸痹大鼠的作用及可能機(jī)制。

1 材料與儀器

1.1 動(dòng)物、藥品、試劑

SD大鼠，雌雄各半，體重 (200±20)g，由南京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(滬)2007－0005;烏頭赤石脂丸 (具體制備方法同前期研究，見(jiàn)文獻(xiàn)［4］)，購(gòu)于南京中醫(yī)藥大學(xué)門(mén)診部，符合《中國(guó)藥典》 (2010版)一部規(guī)定;復(fù)方丹參滴丸，天津天士力制藥股份有限公司，批號(hào):20061208;垂體后葉素，上海第一生化藥業(yè)有限公司，批號(hào):040301;血清CK、LDH試劑盒，南京建成生物有限公司，批號(hào):20090826、20091127。

1.2 儀器

BL－420E+生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司;TP1020自動(dòng)脫水機(jī)、RM2135型切片機(jī)、DMLS2光學(xué)顯微鏡，德國(guó)LEICA公司產(chǎn)品;Tissue－Tek TEL組織包埋中心，日本SAKURA公司產(chǎn)品;CS－VI型攤片烤片機(jī)，湖北孝感宏業(yè)醫(yī)用儀器有限公司;SA－6000自動(dòng)血流變測(cè)試儀，北京賽科希德科技發(fā)展有限公司;752型分光光度計(jì)，上海分析儀器廠。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組

72只SD大鼠，隨機(jī)分為6組:正常對(duì)照組，模型組，復(fù)方丹參滴丸組 (給藥量相當(dāng)于人體等效劑量72.9mg/kg)，烏頭赤石脂丸低、中、高劑量組 (給藥量分別相當(dāng)于人體等效劑量的1/3即0.63 g/kg、1倍即 1.89g/kg、3倍即 5.67g/kg)。每組12只。

2.2 動(dòng)物模型的制備、描記心電圖

［5－6］并結(jié)合預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果建立如下模型:正常對(duì)照組、模型組大鼠灌胃生理鹽水2mL，其余各組灌胃相應(yīng)藥物2mL，每日1次，連續(xù)2周。除正常對(duì)照組外，其余各組大鼠每日灌胃30 min后，于0℃冰水中游泳5 min。于末次游泳結(jié)束后，大鼠以戊巴比妥鈉按35 mg/kg劑量腹腔注射麻醉，大鼠背位固定在鼠臺(tái)上，并與生物信號(hào)采集系統(tǒng)相接，描記Ⅱ?qū)?lián)心電圖;除正常對(duì)照組外，其余各組動(dòng)物腹腔注射垂體后葉素 (20 U/kg)造模，描記30 min內(nèi)Ⅱ?qū)?lián)心電圖變化，如見(jiàn)ST段上抬、J點(diǎn)抬高則表示造模成功。

2.3 采血、取心室

各組大鼠于注射垂體后葉素24h后，用戊巴比妥鈉麻醉，頸總動(dòng)脈采血 (所采血分3份，2份抗凝、1份不抗凝)，并迅速取下心臟，剪去心房及結(jié)締組織，保留心室，作病理學(xué)檢查。

2.4 血清CK、LDH及血液粘稠度的測(cè)定

將不抗凝血室溫下靜置2h待其凝固后以3000 r·min－1速度離心10min，取血清，化學(xué)比色法測(cè)定血清CK、LDH含量;一份抗凝血以同樣方法離心，取血漿與另一份抗凝血全血一同留置檢測(cè)粘稠度。

2.5 組織形態(tài)學(xué)觀察

將大鼠左心室置于10%福爾馬林液中固定，乙醇脫水，石蠟包埋，5μm厚組織切片，蘇木素－伊紅 (HE)染色，光鏡下觀察心肌細(xì)胞損傷程度。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 動(dòng)物標(biāo)本的脫落

本實(shí)驗(yàn)共分6組，每組12只SD大鼠。在造模過(guò)程中除正常對(duì)照組外，其余各組均有大鼠死亡，死亡數(shù)目及死亡率分別為:模型組死亡5只 (死亡率41.7%);烏頭赤石脂丸低、中、高劑量組分別為 4只 (死亡率 33.3%)、3只 (死亡率25.0%)、2只 (死亡率16.7%);復(fù)方丹參滴丸組為3只 (死亡率25.0%)。其中模型組死亡率最高，烏頭赤石脂丸低、中、高劑量組死亡率漸次下降，藥物干預(yù)組大鼠的死亡率低于模型組。

3.2 烏頭赤石脂丸對(duì)大鼠心電圖Ⅱ?qū)?lián)J點(diǎn)改變的影響

各組心電圖Ⅱ?qū)?lián)J點(diǎn)位移如表1所示。模型組J點(diǎn)抬高值最高，與對(duì)照組相比，P＜0.01，表明造模成功;烏頭赤石脂丸中、高劑量組及復(fù)方丹參滴丸組與模型組相比，P＜0.01，表明烏頭赤石脂丸中、高劑量組對(duì)寒凝胸痹大鼠的心肌損傷有明顯的治療作用，能改善心肌損傷;但各治療組與對(duì)照組相比，P＜0.01，表明其療效在心電圖改善方面還不能使之恢復(fù)到正常。

表1 烏頭赤石脂丸對(duì)寒凝胸痹大鼠心電圖Ⅱ?qū)?lián)J點(diǎn)位移影響 ()

表1 烏頭赤石脂丸對(duì)寒凝胸痹大鼠心電圖Ⅱ?qū)?lián)J點(diǎn)位移影響 ()

注:與正常對(duì)照組相比，＊＊P＜0.01，*P＜0.05;與模型組相比，▲▲P ＜0.01，▲P ＜0.05。

3.3 心肌酶譜LDH、CK水平的改變

心肌受損后，細(xì)胞破裂，釋放出其中的CK、LDH進(jìn)入血液中，故檢測(cè)血中CK、LDH，常作為評(píng)判心肌受損程度的指標(biāo)。各實(shí)驗(yàn)組檢測(cè)結(jié)果如表2。與正常對(duì)照組相比，模型組大鼠的血清CK、LDH水平明顯提高 (P＜0.01)，造模成功;與模型組相比，烏頭赤石脂丸高、中劑量組及復(fù)方丹參滴丸組大鼠血清CK、LDH水平明顯減輕 (P＜0.05);而烏頭赤石脂丸低劑量組雖能減低血清CK、LDH水平，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.4 烏頭赤石脂丸對(duì)寒凝胸痹大鼠心肌病理學(xué)改變的影響

心肌壞死程度按參照文獻(xiàn) ［7］分級(jí):0級(jí):無(wú)壞死;Ⅰ級(jí):點(diǎn)狀，局灶壞死;Ⅱ級(jí):≥2個(gè)灶壞死;Ⅲ級(jí):≥3個(gè)灶壞死;Ⅳ級(jí):大片彌散性壞死。各組間的差異用秩和檢驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3。烏頭赤石脂丸中、高劑量組與模型組相比，P＜0.01，表明其能明顯減輕心肌損害;但與正常對(duì)照組相比，P＜0.01，表明其療效在心肌損害改善方面還不能使之恢復(fù)到正常。

表2 烏頭赤石脂丸對(duì)寒凝胸痹大鼠血清LDH、CK水平的影響 ()

表2 烏頭赤石脂丸對(duì)寒凝胸痹大鼠血清LDH、CK水平的影響 ()

注:與正常對(duì)照組相比，＊＊P＜0.01;與模型組相比，▲P＜0.05。

表3 寒凝胸痹大鼠心肌病理學(xué)改變

3.5 全血及血漿粘度的檢測(cè)

各組大鼠全血及血漿粘度改變?nèi)绫?。模型組不同切變率的全血及血漿粘度最高，與對(duì)照組相比，P＜0.01或＜0.05，表明存在著顯著差別;各治療組與模型組相比，P＜0.01或＜0.05，表明烏頭赤石脂丸能降低寒凝胸痹大鼠的全血或血漿粘度，改善血液流變學(xué)。由此可推測(cè)，烏頭赤石脂丸可能通過(guò)降低寒凝胸痹大鼠的血液粘稠度，增加血液流速，提高心肌供血而實(shí)現(xiàn)對(duì)心肌的保護(hù)作用的。

表4 寒凝胸痹大鼠全血及血漿粘度改變()

表4 寒凝胸痹大鼠全血及血漿粘度改變()

注:與正常對(duì)照組相比，＊＊P ＜0.01，*P ＜0.05;與模型組相比，▲▲P ＜0.01，▲P ＜0.05)

4 討論

《內(nèi)經(jīng)》首載“胸痹”， 《靈樞·本臟》云:“肺大則多飲，善病胸痹、喉痹、逆氣”。胸痹因病位不同分為心痹和肺痹，張仲景認(rèn)為胸痹病主要指心痹，其在《金匾要略·胸痹心痛短氣病》指出:“胸痹之病喘息，咳唾，胸背痛，短氣”，“胸痹不得臥，心痛徹背”。由此可見(jiàn)，胸痹主要指胸部悶痛，甚則胸痛徹背，氣短喘息不得臥為主癥的一種疾病。7版《中醫(yī)診斷學(xué)》將胸痹分型分為4型:寒凝心脈、氣滯心脈、痰阻心脈、瘀阻心脈。烏頭赤石脂丸主治陽(yáng)氣不足，寒凝心脈之胸痹。

心肌缺血損傷時(shí)，將影響缺血區(qū)的心室生物電復(fù)極的正常進(jìn)行，在心電圖相關(guān)導(dǎo)聯(lián)上發(fā)生ST－T段的異常改變，J點(diǎn)為ST段的起點(diǎn)，其改變可作為心肌缺血的心電圖觀察指標(biāo)。由于心肌細(xì)胞發(fā)生腫脹，細(xì)胞膜的完整性受到破壞，膜對(duì)蛋白酶的通透性增加，CK、LDH由細(xì)胞內(nèi)釋出增加，使血清中酶含量增加，是評(píng)判心肌受損程度的指標(biāo)。烏頭赤石脂丸可降低寒凝胸痹大鼠心電圖Ⅱ?qū)?lián)J點(diǎn)的抬高;改善大鼠血清CK、LDH水平;病理形態(tài)學(xué)上顯示能減輕心肌組織的缺血損傷程度，表明烏頭赤石脂丸對(duì)冰水游泳結(jié)合垂體后葉素誘發(fā)寒凝胸痹大鼠缺血損傷心肌有保護(hù)作用。

血液粘度增高可使血流阻力增加，血流速度減慢，會(huì)誘導(dǎo)血小板的粘附聚集形成血栓，從而加重?fù)p傷心肌的缺血。烏頭赤石脂丸降低寒凝胸痹大鼠的全血或血漿粘度，改善其血液流變學(xué)。提示烏頭赤石脂丸能減輕寒凝胸痹大鼠心肌缺血損傷程度，可能通過(guò)改善血液的粘稠度達(dá)到保護(hù)目的，具體機(jī)制需進(jìn)一步深入研究。

［參考文獻(xiàn)］

［1］徐光華，張學(xué)山，黃展，等.烏頭赤石脂湯合丹參注射液治療急性心肌梗死的療效觀察 ［J］.新中醫(yī)，2001，33(9):30－31.

［2］王旭東.探析烏頭赤石脂丸的臨床運(yùn)用［J］.中醫(yī)函授通訊，1993，11(5):2－3.

［3］黃漢超，周鳳嬌.烏頭赤石脂湯治療不穩(wěn)定型心絞痛的臨床觀察［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2007，23(5):1032－1034.

［4］戴啟剛，汪受傳，王忠山，等.烏頭赤石脂丸對(duì)異丙腎上腺素所致大鼠心肌損傷的保護(hù)作用［J］.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，34(11):755－758.

［5］閆娟娟，高文遠(yuǎn).黃芪桂枝五物湯對(duì)胸痹陽(yáng)虛寒凝證大鼠的心電圖和血清酶的影響 ［J］.上海中醫(yī)藥雜志，2009，43(1):75－77.

［6］韋敏，沈健，許惠琴.乳舒改善微循環(huán)和血液流變學(xué)的作用研究 ［J］.云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，29(5):20－23.

［7］Bertinchant J P，Robert E，Polge A，et al.Comparison of the diagnostic value of cardiac troponinⅠand T determinations for detecting early myocardial damage and the relationship with histological findings after isoprenaline－induced cardiac injury in rats ［J］.Clin Chim Acta，2000，298(122):13－28.