氨基葡萄糖與硫酸軟骨素復(fù)合片的制備

趙 軼 李亞軍

(河北聯(lián)合大學(xué)秦皇島分院 河北秦皇島 066000)

氨基葡萄糖(glucosamine)和硫酸軟骨素(chondroitin sulfate)是一類天然的氨基葡聚糖，廣泛存在于人和動(dòng)物軟骨、肌鍵和韌帶中，為關(guān)節(jié)軟骨的主要組成部分［1］。氨基葡萄糖和硫酸軟骨素在自然界中廣泛存在，主要從蝦蟹殼類海洋生物及動(dòng)物軟骨中提?。?］。越來(lái)越多的研究證明，氨基葡萄糖與硫酸軟骨素能刺激軟骨細(xì)胞合成膠原蛋白和蛋白多糖，促進(jìn)軟骨基質(zhì)的合成，抑制軟骨的降解。這類物質(zhì)不僅能延緩關(guān)節(jié)炎的發(fā)展，而且還能修復(fù)軟骨組織［3］。本研究將氨基葡萄糖與硫酸軟骨素制成復(fù)合片劑，測(cè)定了氨基葡萄糖與硫酸軟骨素制成復(fù)合片的溶出度，并研究復(fù)合片的抗炎作用。

1 材料與方法

1．1 儀器 TU1810紫外－可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用公司);ZQSP8旋轉(zhuǎn)壓片機(jī)(上海天祥制藥機(jī)械有限公司);FA－1004電子天平(上海精科天平廠);RCZ－8A智能藥物溶出儀(天津大學(xué)精密儀器廠);BJ－1型智能崩解時(shí)限儀(天津新天光分析儀器有限公司)。

1．2 藥品 氨基葡萄糖和硫酸軟骨素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所);氨基葡萄糖(濟(jì)南海得貝生物工程公司);硫酸軟骨素(上海道豐化工科技有限公司);羧甲基淀粉鈉(山東海祥生物工程有限公司);交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮(上海協(xié)泰化工有限公司);硬脂酸鎂(上海協(xié)泰化工有限公司);微晶纖維素(北京化學(xué)試劑公司);角叉菜膠(遼寧省藥物研究所);阿斯匹林腸溶片(石家莊康力藥業(yè)有限公司)。

1．3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康清潔級(jí)雄性SD大鼠，體質(zhì)量150～180g，購(gòu)于北京實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào):SCXK(京)2007－0001。

1．4 復(fù)合片中氨基葡萄糖與硫酸軟骨素含量測(cè)定 取2mL乙酰丙酮，加至50mL碳酸鈉溶液中即為乙酰丙酮試液。稱取對(duì)二甲氨基苯甲醛0．8g，加無(wú)水乙醇和12mol/L鹽酸各15mL，混勻即為對(duì)二甲氨基苯甲醛試液。稱取50mg咔唑溶于50mL 95%乙醇中即為咔唑試劑。精密稱取25mg干燥后的氨基葡萄糖對(duì)照品，置25mL量瓶中，加水定容，取5mL溶液置100mL量瓶中，定容后作為氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。取氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液 0．5、1．0、1．5、2．0、2．5、3．0mL 置 10mL 具塞試管中，加水定容至5mL，加1mL乙酰丙酮試液，置于沸水浴中乙?；?5min。冷卻后，加入3mL無(wú)水乙醇和1mL對(duì)二甲氨基苯甲醛試液60℃水浴1．5h，冷卻至室溫，測(cè)定反應(yīng)液在520nm處的吸收值，得直線回歸方程:Y=1．401X+0．04379，r=0．9997，線性范圍為25 ～125μg/mL。取硫酸軟骨素標(biāo)準(zhǔn)溶液 0．1、0．2、0．4、0．6、0．8、1．0mL，置于 10mL 帶塞試管中，并加水定容至 1mL。加6mL濃硫酸，混勻后置85℃溫浴20min，冷卻至室溫，加入0．2mL咔唑試劑，振搖，室溫放置2h，測(cè)定反應(yīng)液在530nm處的吸收值，得直線回歸方程:Y=1．152X+0．1173，r=0．9993，線性范圍為20～100μg/mL。

1．5 氨基葡萄糖與硫酸軟骨素復(fù)合片的制備 將氨基葡萄糖與硫酸軟骨素按質(zhì)量比5:4的比例混合再與輔料微晶纖維素混合過(guò)篩，綜合考慮片劑外觀和崩解時(shí)間2個(gè)因素，選擇聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纖維素鈉2種崩解劑聯(lián)合使用，加入5%的聚乙烯吡咯烷酮制成軟材，以20目篩制粒，80℃干燥4h，加入適量潤(rùn)滑劑硬脂酸鎂，混合均勻后在ZQSP8旋轉(zhuǎn)壓片機(jī)中壓片。復(fù)合片每片含主藥250mg。

圖1 復(fù)合片中氨基葡萄糖與硫酸軟骨素的溶出度曲線

1．6 氨基葡萄糖與硫酸軟骨素復(fù)合片的溶出度考察 取復(fù)合片樣品，按《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄ⅩC第一法測(cè)定片劑的溶出度［4］，以1 000mL的人工胃液為溶出介質(zhì)，采用槳法，轉(zhuǎn)速100r/min，溫度為37℃，依法對(duì)復(fù)合片進(jìn)行溶出度測(cè)定，每次取溶液2mL，濾過(guò)，取續(xù)濾液1mL，置10mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，依法測(cè)定氨基葡萄糖與硫酸軟骨素的含量，繪制溶出度曲線。見(jiàn)圖1。1．7 氨基葡萄糖與硫酸軟骨素復(fù)合片抗急性炎癥試驗(yàn)［5］SD大鼠50只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為5組，每組10只。分別為正常對(duì)照組(灌胃給予蒸餾水)、阿斯匹林陽(yáng)性藥物組(200mg/kg)、氨基葡萄糖與硫酸軟骨素復(fù)合片低劑量組(225mg/kg)，中劑量組(450mg/kg)，高劑量組(900mg/kg)3個(gè)受試物劑量組。經(jīng)口灌胃給藥，1次/d，連續(xù)給藥28天。第28天，各組大鼠均以角叉菜膠(1%)皮下注射于左后足趾中部，0．1mL/只。分別于注射角叉菜膠后1h、4h和6h運(yùn)用千分卡尺測(cè)量足趾腫脹厚度，讀數(shù)精確到0．02mm。同時(shí)右后足作為對(duì)照。計(jì)算足趾腫脹度(左右足趾厚度差)。

表1 大鼠給藥28天后足跖腫脹度(±s，n=10)

表1 大鼠給藥28天后足跖腫脹度(±s，n=10)

注:與正常對(duì)照組比較，▲P ＜0．05

足跖腫脹度(mm)1．74 ±0．64 2．50 ±0．77 2．64 ±0．41阿司匹林組 200 1．18 ±0．35▲ 2．02 ±0．37▲ 1．82 ±0．50▲低劑量組 225 1．37 ±0．28▲ 2．21 ±0．59▲ 2．14 ±0．72▲中劑量組 450 1．50 ±0．42▲ 1．85 ±0．67▲ 1．89 ±0．56▲高劑量組 900 1．48 ±0．32▲ 1．71 ±0．46▲ 1．32 ±0．42 1h 4h 6h對(duì)照組組別 劑量(mg/kg)▲

1．8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)均用SPSS 12．0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用方差分析及兩兩比較的q檢驗(yàn)方法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。見(jiàn)表1。

2 結(jié)果

氨基葡萄糖與硫酸軟骨素復(fù)合片溶出度結(jié)果顯示，復(fù)合片中的氨基葡萄糖與硫酸軟骨素40min之內(nèi)溶出度均超過(guò)70%，說(shuō)明復(fù)合片中氨基葡萄糖與硫酸軟骨素溶出速率較快，而且氨基葡萄糖較硫酸軟骨素溶出速率更快。給藥28天，注射角叉菜膠后1、4、6 h，阿司匹林陽(yáng)性藥物組、低、中、高劑量組均能抑制大鼠因角叉菜膠引起的急性炎癥(P＜0．05)。與阿司匹林陽(yáng)性藥物組比，氨基葡萄糖與硫酸軟骨素復(fù)合片低、中、高劑量組大鼠足趾腫脹度無(wú)顯著性差異(P＞0．05)。

3 討論

制備的氨基葡萄糖與硫酸軟骨素復(fù)合片符合《中國(guó)藥典》2010年版溶出度之規(guī)定。氨基葡萄糖與硫酸軟骨素復(fù)合片溶出速度均較快，因此將氨基葡萄糖與硫酸軟骨素制成復(fù)合片將會(huì)更好地發(fā)揮氨基葡萄糖與硫酸軟骨素的藥效。

［1］ 郭 亭，趙建寧．氨基葡聚糖和硫酸軟骨素在治療骨性關(guān)節(jié)炎中的應(yīng)用［J］．中國(guó)骨傷，2004，17(9):574

［2］ Silva FS，Yoshinari NH，Castro RR，et al．Combined glucosamine and chondroitin sulfate provides functional and structural benefit in the anterior cruciate ligament transection model［J］．Clin Rheumatol，2009，28(2):109

［3］ Poolsup N，Suthisisang C，Channark P，et al．Glucosamine long － term treatment and the progression of knee osteoarthritis systematic review of randomized controlled trials［J］．Ann Pharmacother，2005，39(6):1080

［4］ 中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典［S］．北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010．101

［5］ 傅 欣，林 霖，魏學(xué)磊，等．氨基葡萄糖和硫酸軟骨素聯(lián)合用藥對(duì)兔骨關(guān)節(jié)炎治療作用實(shí)驗(yàn)研究［J］．中國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)雜志，2008，27(5):588