銀屑寧膠囊對心得安致豚鼠銀屑病樣皮損IL－2、TNF－α水平的影響

劉俊峰 朱 璐 廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院（廣州510000）

銀屑病俗稱“牛皮癬”，中醫(yī)稱“白疕”，是一種慢性復(fù)發(fā)性炎癥性皮膚病。近年來中醫(yī)藥在銀屑病的治療中逐漸顯出優(yōu)勢，其具有改善病情，延緩復(fù)發(fā)，副作用小的特點。本實驗通過對豚鼠耳部外涂心得安乳膏誘發(fā)銀屑病模型的實驗研究，選用臨床有效制劑“銀屑寧膠囊”進(jìn)行干預(yù)，研究其可能的作用機(jī)制。

1.材料及方法 1.1 實驗材料 1.1.1 動物來源：清潔級豚鼠60只，雌雄各半，體重300g±50g，由西安交通大學(xué)實驗動物中心提供。動物合格證號：醫(yī)動字第08－019號。

1.1.2 實驗用藥：心得安片（鹽酸普萘洛爾片），10mg/片，國藥準(zhǔn)字：H61022221，由陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院制劑室配置成5%心得安乳劑備用。

銀屑寧膠囊（主要組成：生地、玄參、丹皮、赤芍、丹參、板藍(lán)根、土茯苓、烏蛇）由陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院提供。按照文獻(xiàn)方法[1]，遵照人與動物體重折算等效計量表，折算成豚鼠用量，用蒸餾水將藥物配制成生藥含量為0.22g/mL的藥液，冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

復(fù)方青黛膠囊（主要組成：青黛、馬齒莧、白芷、土茯苓、紫草、貫眾、蒲公英、丹參等），國藥準(zhǔn)字號Z20010157。用蒸餾水將藥物配制成生藥含量為0.44g/mL、0.22g/mL、0.11g/mL的藥液，冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3 主要試劑：IL－2試劑盒，由北京福瑞生物有限公司提供；TNF－α試劑盒，由北京福瑞生物有限公司提供。

1.1.4 主要實驗器材：GTZA型精密天平；BX－50奧林巴斯顯微鏡；TDL－45H低溫高速離心機(jī)，F(xiàn)M－2000全自動γ免疫計數(shù)器.

1.2 實驗方法 1.2.1 分組：將60只豚鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機(jī)分為6組，每組10只，A組：正常組，B組（模型組）、C組（復(fù)方青黛膠囊組，以下簡稱青黛膠囊組）、D組（銀屑寧大劑量組，以下簡稱銀大組）、E組（銀屑寧中劑量組，以下簡稱銀中組）、F組（銀屑寧小劑量組，以下簡稱銀小組）。

1.2.2 造模：按文獻(xiàn)方法[2]將5%心得安乳劑均勻涂于B、C、D、E、F組豚鼠雙側(cè)耳背皮膚（1cm2用藥0.3g，用玻璃棒涂勻），厚度約1.0mm，每日3次，連續(xù)2周。

1.2.3 給藥：造模完成后，A組、B組用生理鹽水灌胃，每次1mL，每日2次；C組灌服生藥含量為0.22g/mL復(fù)方青黛丸藥液，D、E、F組分別灌服0.44g/mL、0.22g/mL、0.11g/mL的銀屑寧藥液，1mL/次，每日2次，連續(xù)用藥4周。

1.2.4 觀察指標(biāo)：①肉眼觀察一般情況和豚鼠雙耳形態(tài)鏡下觀察。②治療4周后，手術(shù)切取各組豚鼠左側(cè)耳部標(biāo)本，光鏡下觀察病理變化。③采用放免法測定皮損IL－2、TNF－a水平。用藥4周后，手術(shù)切取各組豚鼠右側(cè)耳部標(biāo)本，用預(yù)冷生理鹽水沖洗，拭干，切取0.4g，放入有1.0mL生理鹽水的試管內(nèi)，用高速分散機(jī)以10000rpm勻漿2次，每次10s，勻漿后，用3500rmp離心15min，取上清液，用放免法測定IL－2、TNF－a的含量（由陜西中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院同位素室檢測）。

2 實驗結(jié)果 2.1 肉眼觀察 2.1.1 一般情況：空白組豚鼠精神好，反應(yīng)敏捷，好斗，毛發(fā)濃密有光澤，緊貼皮膚，飲食、二便正常。所有造模動物造模1周后均出現(xiàn)精神較差，反應(yīng)較空白組遲鈍，喜臥，進(jìn)食減少，毛發(fā)無光澤，易脫落。2周后造模動物上述癥狀加重并出現(xiàn)搔抓耳部現(xiàn)象。經(jīng)治療4周后銀屑寧膠囊大、中劑量組和復(fù)方青黛膠囊組豚鼠上述癥狀明顯減輕。

2.1.2 豚鼠雙耳形態(tài)：造模1周后，模型組動物耳背部涂藥部位毛發(fā)部分脫落無毛根，局部皮膚紅腫，觸之皮溫較正常組動物稍高。2周后紅腫加重，并覆有少量極細(xì)小銀白色鱗屑。正常組豚鼠雙耳毛發(fā)正常無脫落。用藥期間，模型組癥狀無明顯變化；銀屑寧膠囊大、中劑量組和復(fù)方青黛膠囊組治療組癥狀逐漸改善，四周后紅腫基本消失，鱗屑減少。

2.1.3 鏡下觀察：光鏡下正常組豚鼠耳背皮膚可見菲薄的角質(zhì)層，顆粒層約1～3層，棘層細(xì)胞約3～5層，基底層為單層柱狀細(xì)胞，表皮突平坦；毛細(xì)血管擴(kuò)張不明顯；真皮淺層稀疏散在的淋巴細(xì)胞浸潤。模型組鏡下均可見到不同程度的角化過度、棘層肥厚，乳突內(nèi)有炎細(xì)胞浸潤，部分標(biāo)本見到了廣泛或灶狀角化不全，顆粒層變薄或消失。表皮突延伸呈棒狀，乳突上伸呈杵狀變，毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血。血管周圍可見單一核及多形核細(xì)胞浸潤。治療后銀屑寧膠囊大、中劑量組和復(fù)方青黛膠囊組皮損組織病理明顯改善。

2.2 皮損組織內(nèi)IL－2水平的檢測 從表1可知：與正常組比較，模型組IL－2含量明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組相比，青黛膠囊組、銀大組、銀中組IL－2含量均降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；青黛膠囊組、銀大組、銀中組之間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 皮損組織中IL－2含量測定結(jié)果

2.3 皮損組織中TNF－α含量測定 從表2可知：與正常組相比，模型組TNF－α含量明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組相比，青黛膠囊組、銀大組、銀中組含量均降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；青黛膠囊組、銀大組、銀中組之間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

表2 皮損組織中TNF－α含量測定結(jié)果

3 討 論 Gaylard[3]等用心得安涂藥于豚鼠皮膚，造成皮膚角化過度，角化不全和棘層肥厚等銀屑病樣皮損，此方法已被國內(nèi)學(xué)者多次重復(fù)，證實在豚鼠皮膚引起銀屑病樣皮損具有可重復(fù)性。此外，該病理改變在不接受心得安乳劑刺激的情況下能維持2周不消退[4]。在銀屑病的發(fā)病過程中，T細(xì)胞的活化及其引起的后續(xù)免疫炎癥反應(yīng)是銀屑病發(fā)生和發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。以Th為主的T淋巴細(xì)胞是主要的炎癥細(xì)胞，Th細(xì)胞可分成兩個亞群Thl和Th2，在銀屑病的研究中證實了Thl細(xì)胞占優(yōu)勢，針對Th1細(xì)胞超強(qiáng)作用下的IL－2，TNF－α分泌，參與了疾病的發(fā)生和發(fā)展過程，作為暴露的病理性靶位因子而成為抗銀屑病藥物治療的作用靶位[5，6]。

本實驗研究中經(jīng)過銀屑寧膠囊治療后模型皮損中IL－2、TNF－α的水平含量明顯降低，銀屑寧膠囊發(fā)揮作用的可能機(jī)制是通過抑制Thl細(xì)胞的超強(qiáng)作用，降低IL－2和TNF－α的分泌水平，一定程度上有利于促進(jìn)Thl/Th2兩個亞群的平衡，進(jìn)而降低了由于失衡產(chǎn)生的免疫炎性反應(yīng)造成銀屑病的病理損害。

尋常型銀屑病早期發(fā)病以血熱為主，早期合理的清熱解毒涼血，病情會順勢而消[7]。銀屑寧膠囊由生地、玄參、丹皮、赤芍、丹參、板藍(lán)根、土茯苓、烏蛇等組成，是在已故著名老中醫(yī)郭仲軻教授治療銀屑病經(jīng)驗方“生元飲”的基礎(chǔ)上，結(jié)合現(xiàn)代藥理研究成果及多年臨床經(jīng)驗研制而成，全方具有涼血活血，清熱解毒，疏風(fēng)止癢之功。本實驗主要從細(xì)胞因子水平研究了該藥治療銀屑病的機(jī)制，結(jié)果研究表明銀屑寧膠囊可能降低皮損組織IL－2、TNF－a的含量，這可能是銀屑寧膠囊治療銀屑病的機(jī)制之一。

[1]施新猷.醫(yī)用實驗動物學(xué)[M].西安：陜西科技出版社，1989：152.

[2]黃 畂，張淑芝，孫 令.心得安涂藥造成豚鼠耳部銀屑病樣病理變化[J].中華皮膚科雜志，1991，24（2），96－97.

[3]Garlarde PM.Psoriasiform changes in guinea－pig skin form propranolol[J].clin Exper Dermatol，1978，3（3）：157－160.

[4]王懿娜，方 紅，張幸國，等.紫杉醇溶液外用治療豚鼠耳部銀屑病樣病理改變的療效觀察[J].中華皮膚科雜志，2004，37（3）：156158.

[5]Caldarola G，De Simone C，Carbone A，Tulli A，Amerio P，F(xiàn)eliciani C.TNFalpha and its receptors in psoriatic skin，before and after treatment with etanercept[J].Int J Immunopathol Pharmacol，2009，22（4）：961－6.

[6]施惠娟，周 茹，金少舉，等.氧化苦參堿對銀屑病小鼠模型血清中IL－2、IL－10、TNF－α水平的影響[J].華西藥學(xué)雜志，2010，25（4）：418－420.

[7]趙振波.銀屑病中醫(yī)治療體會[J].陜西中醫(yī)，2009，30（1）：124.