通便玉蓉丸治療非酒精性脂肪肝及高脂血癥的實(shí)驗(yàn)研究＊

閆曙光 周永學(xué) 惠 毅 成都中醫(yī)藥大學(xué)（成都 610075）

脂肪肝是由多種原因引起的肝細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積和脂肪變性為特征的病理狀態(tài)。近年來(lái)脂肪肝的發(fā)病主要與肥胖的高發(fā)密切相關(guān)，肥胖與脂肪肝的關(guān)系比飲酒與脂肪肝的關(guān)系更為密切［1］。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)肥胖導(dǎo)致的脂肪肝60%都是由營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩引起的［2］。目前對(duì)非酒精性脂肪肝的治療以合理飲食和增加體力運(yùn)動(dòng)為主的生活方式的干預(yù)較為有效，但依從性不夠。臨床上尚缺乏較滿意的抗脂肪肝藥，已報(bào)道的考來(lái)烯胺、煙酸肌醇酯、苯扎貝特、吉非羅齊等藥物雖然可以從不同環(huán)節(jié)抑制脂肪肝，但不良反應(yīng)多、療程長(zhǎng)，故臨床應(yīng)用受到限制。我們?cè)谂R床應(yīng)用通便玉蓉丸治療便秘的同時(shí)，發(fā)現(xiàn)該藥治療非酒精性脂肪肝以及高脂血癥療效顯著，為了進(jìn)一步驗(yàn)證其治療作用，我們對(duì)該藥治療非酒精性脂肪肝及高脂血癥進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。

1 材 料 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性SD大鼠66只，體重80～120g清潔級(jí)，由西安交大醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物的飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)在陜西中醫(yī)學(xué)院清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室。

1.2 儀器 低溫冰箱：日本三洋公司；低溫4℃離心機(jī)：上海第三儀器廠；LD－10001型電子天平：沈陽(yáng)龍騰電子稱(chēng)量?jī)x器有限公司；721分光光度計(jì)：上海第三儀器廠；奧林巴斯顯微鏡（Imager A1Zeiss）。OET－200半自動(dòng)生化分析儀：北京尚精光電技術(shù)有限公司。

1.3 藥物 通便玉蓉丸：陜西中醫(yī)學(xué)院制藥廠制備，批號(hào)：20101001，通便玉蓉丸每克含生藥1.977g，用時(shí)將藥粉與蒸餾水配制成所需濃度的混懸液。東寶肝泰：通化東寶藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：100114，用時(shí)將藥片研磨后用蒸餾水配制成所需濃度的混懸液。

1.4 試劑和試劑盒 游離脂肪酸（FFA）、超氧化物歧化酶（SOD）蛋白測(cè)定試劑盒購(gòu)于南京建成生物醫(yī)學(xué)工程研究所；總膽固醇（TC）試劑盒：上海榮盛生物技術(shù)有限公司；甘油三脂（TG）試劑盒：溫州津瑪生物科技有限公司；膽固醇：湖南祁東縣同信生化廠；10%水合氯醛：陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院制劑研究中心。

2 方 法 2.1 動(dòng)物模型的建立和給藥 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機(jī)分為正常組、模型組、東寶肝泰組、通便玉蓉丸大、中、小劑量組，每組10只。正常組普通飼料喂養(yǎng)，余高脂飼料喂養(yǎng)，配方根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［3］進(jìn)行改進(jìn)（普通飼料77%、膽固醇1%、豬油20%、花生5%、奶粉5%、白糖2%），喂養(yǎng)16周后，每組隨機(jī)抽取1只，取肝臟，可見(jiàn)大鼠肝臟體積增大，呈淡黃色，觸之有油膩感。鏡下見(jiàn)肝細(xì)胞腫大變圓，胞漿疏松，內(nèi)含大的脂肪滴，將細(xì)胞核擠壓向胞膜，確定造模成功（見(jiàn)圖2）。開(kāi)始灌胃給藥，正常組：生理鹽水10mL／kg／d，模型組：生理鹽水10mL／kg／d，大劑量組：通便玉蓉丸混懸液3.67g／kg／d，中劑量組：1.83g／kg／d，小劑量組：0.915g／kg／d，東寶肝泰組：東寶肝泰混懸液0.45g／kg／d，給藥30d。給藥期間除正常對(duì)照組外，其余各組繼續(xù)給予高脂飲食，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

2.2 樣本的采集與檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物禁食12h，10%水合氯醛麻醉，心臟采血，4000轉(zhuǎn)／分離心15min清液，檢測(cè)血清TG、TC、FFA含量。取肝臟，稱(chēng)重后計(jì)算肝指數(shù)。肝組織制成10%的組織勻漿，測(cè)勻漿TC、TG、SOD，取部分肝組織4%甲醛固定。做病理切片行病理組織學(xué)檢查。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 3.1 一般情況 各組高脂飲食喂養(yǎng)大鼠10周后反應(yīng)較正常組遲鈍，毛色發(fā)黃，失去光澤，喜扎堆，懶動(dòng)且攝食量逐漸減少。灌胃給藥后通便玉蓉丸大、中、小劑量組在灌胃兩天后均出現(xiàn)不同程度的稀便，其中以大劑量組最為明顯，約3周后稀便逐漸消失，但便質(zhì)軟，含水量增多。

3.2 各組實(shí)驗(yàn)大鼠血清膽固醇、甘油三酯、游離脂肪酸的變化 表1顯示：模型組與正常組比較血清甘油三脂、膽固醇和游離脂肪酸濃度升高且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），符合高脂血癥的發(fā)病特點(diǎn)。各給藥組與模型組比較，通便玉蓉丸大、中劑量組能降低血清TG、TC和FFA水平且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05，通便玉蓉丸小劑量組能降低血清TC、FFA水平且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。通便玉蓉丸大、中劑量組的降血脂作用最強(qiáng)。東寶肝泰對(duì)血清TG、TC和FFA的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠血清膽固醇、甘油三酯、游離脂肪酸含量的影響

3.3 各組大鼠肝組織勻漿甘油三酯、膽固醇、超氧化物歧化酶的變化 表2表明：模型組大鼠肝臟勻漿TG、TC含量明顯高于正常組，超氧化物歧化酶水平低于正常組，且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），符合非酒精性脂肪肝的特點(diǎn)。與模型組比較，通便玉蓉丸大、中劑量以及東寶肝泰均能明顯降低肝組織內(nèi)TG、TC水平且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），通便玉蓉丸小劑量則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。通便玉蓉丸大劑量及東寶肝泰能顯著增加肝組織內(nèi)SOD活性（P＜0.05），通便玉蓉丸中、小劑量則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與東寶肝泰組比較，通便玉蓉丸大、中劑量能更有效降低肝內(nèi)TG、TC含量且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。通便玉蓉丸大劑量組升高肝內(nèi)SOD活性的作用于東寶肝泰組相當(dāng)（P＞0.05）。

表2 對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠肝組織勻漿甘油三脂、膽固醇、超氧化物歧化酶含量的影響

圖1

圖2

圖3

圖4

圖5

圖6

3.4 各組大鼠給藥前后體重以及肝指數(shù)變化 表3表明，各組大鼠在治療前體重均明顯高于正常組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），符合肥胖特征。灌胃給藥后與模型組相比，通便玉蓉丸大、中劑量體重明顯降低且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），通便玉蓉丸大、中、小劑量組，東寶肝泰肝指數(shù)明顯降低且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與東寶肝泰組比較，通便玉蓉丸大劑量體重明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；通便玉蓉丸大、中劑量肝指數(shù)降低顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表3 治療前后體重以及肝指數(shù)的變化

3.5 肝組織病理學(xué)變化 3.5.1 大體形態(tài)觀察：正常組大鼠肝臟顏色鮮紅，質(zhì)地柔軟，富有彈性；模型組大鼠肝臟體積明顯增大，呈黃褐色，觸之有油膩感，邊緣飽滿，質(zhì)地稍韌。

3.5.2 肝臟組織HE染色觀察：正常大鼠肝細(xì)胞無(wú)脂肪變性，肝索排列整齊，肝竇清晰（圖1）；模型組肝細(xì)胞發(fā)生程度不等脂肪變性，肝細(xì)胞腫大變圓，胞漿疏松，內(nèi)含大的脂肪滴，將細(xì)胞核擠壓向胞膜，肝索排列混亂，肝竇受壓變形（圖2）；通便玉蓉丸大劑量組（圖3），中劑量組（圖4）肝臟未見(jiàn)脂變細(xì)胞，可見(jiàn)少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。通便玉蓉丸小劑量組（圖5）以及東寶肝泰組（圖6）可見(jiàn)大量脂變肝細(xì)胞以及炎細(xì)胞。

4 討 論 通便玉蓉丸是周永學(xué)教授臨床治療腎虛精虧型便秘常用方，由肉蓯蓉、當(dāng)歸、芒硝等中藥組成，具有滋補(bǔ)腎精，軟堅(jiān)散結(jié)，滋陰潤(rùn)腸、運(yùn)下通便的功效。目前對(duì)非酒精性脂肪肝的中醫(yī)藥治療以從肝脾論治為主［4－6］，通便玉蓉丸則體現(xiàn)了從腎論治非酒精性脂肪肝的思想。通便玉蓉丸所治的非酒精性脂肪肝及高脂血癥患者多表現(xiàn)為腎精虧虛，腎精不足則腎陰、腎陽(yáng)的功能不能正常發(fā)揮，腎陰不足，則水不涵木，肝的疏泄功能失常；腎陽(yáng)不足則血液運(yùn)行的原動(dòng)力不足，腎陽(yáng)不能溫煦脾陽(yáng)則脾不能正常運(yùn)化水濕痰濁，進(jìn)而導(dǎo)致脂肪肝以及高脂血癥等脂代謝紊亂性疾病。通便玉蓉丸能滋補(bǔ)腎精，有助于腎陰、腎陽(yáng)功能的發(fā)揮，方中當(dāng)歸活血潤(rùn)腸、芒硝通便瀉下，促進(jìn)了水濕痰濁的轉(zhuǎn)運(yùn)，從而起到影響脂質(zhì)代謝轉(zhuǎn)運(yùn)，對(duì)非酒精性脂肪肝以及高脂血癥起到治療作用。實(shí)驗(yàn)研究證明該藥能降低脂肪肝大鼠肝組織內(nèi)的甘油三脂和膽固醇含量，升高因脂肪肝而降低的組織內(nèi)SOD水平，而起到保護(hù)肝細(xì)胞的作用，SOD在機(jī)體的氧化和抗氧化平衡中起到了極為關(guān)鍵的作用，能清除超氧離子自由基，保護(hù)細(xì)胞免受損傷［7］。通便玉蓉丸能能降低高脂血癥大鼠血清甘油三脂、膽固醇和游離脂肪酸水平，起到治療高脂血癥的作用，且能有效降低肥胖大鼠體重，王歡［8］等通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究也發(fā)現(xiàn)該藥能有效降低便秘小鼠的體重的作用。高脂血是動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、糖尿病等高發(fā)疾病的主要誘發(fā)因素，因此本藥物通過(guò)治療高脂血癥對(duì)該類(lèi)疾病又有一定的預(yù)防作用。本實(shí)驗(yàn)從探索的角度初步驗(yàn)證了通便玉蓉丸對(duì)非酒精性脂肪肝以及高脂血癥的治療作用，其具體作用機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

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