舒肝和胃膠囊治療膽汁反流性胃炎實(shí)驗(yàn)研究

魚(yú) 濤 趙林濤 馬明弦 陜西省中醫(yī)醫(yī)院（西安710003）

膽汁反流性胃炎（Bile Reflux Gastritis，BRG）是一種臨床上常見(jiàn)的胃部疾病，約占胃炎的24.2%?，F(xiàn)在已有大量研究顯示膽汁反流性胃炎與萎縮性胃炎、胃癌、Barrett食管及食管腺癌等癌前疾病和癌癥密切相關(guān)。中藥以其多靶點(diǎn)作用的特點(diǎn)治療膽汁反流性胃炎顯示了廣闊前景，馬明弦主任醫(yī)師總結(jié)多年臨床經(jīng)驗(yàn)自擬并研制疏肝和胃膠囊治療該病效果滿意。筆者本實(shí)驗(yàn)旨在觀察疏肝和胃膠囊對(duì)BRG大鼠胃排空與胃粘膜病理改變的影響，以探討疏肝和胃膠囊治療膽汁反流性胃炎的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 ：SD大鼠由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK（陜）2007－001，合格證號(hào)：0003124。

1.1.3 試劑與儀器：圖像分析系統(tǒng)：BI－2000型，成都泰盟科技有限公司。722N型可見(jiàn)分光光度計(jì)：上海元板儀器有限公司生產(chǎn)。試劑：?；悄懰徕c OX BILE，胰蛋白酶 OX BILE，卵磷脂 OX BILE。

1.2 方法

1.2.1 藥物配制與劑量設(shè)置：藥物配制：疏肝和胃組膠囊內(nèi)容物用蒸餾水溶解，達(dá)喜和嗎丁啉先用研缽研細(xì)再用蒸餾水溶解。劑量設(shè)置：參考臨床用量，疏肝和胃大、中、小劑量為1.12g/kg、0.56g/kg、0.28g/kg，約分別相當(dāng)臨床人用量的16倍、8倍、4倍，給藥濃度分別為11.2%、5.6%、2.8%。陽(yáng)性組灌胃嗎丁啉和達(dá)喜混合液，嗎丁啉劑量為4mg/kg，相當(dāng)于臨床人用量的8倍，濃度為0.04%；達(dá)喜劑量為0.025g/kg，相當(dāng)于臨床人用量的8倍，給藥濃度為2%?？瞻捉M與模型組灌胃蒸餾水。各組均用蒸餾水稀釋，給藥體積均為10mL/kg。計(jì)算方式：如大劑量，1.12g/kg＝10mL/kg×11.2%。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)原理、動(dòng)物分組及給藥方法 實(shí)驗(yàn)原理：以牛磺膽酸鈉、胰酶、卵磷脂溶于水中配制成模擬膽汁反流液（膽汁反流液的制備：牛磺膽酸鈉2.5g，胰酶1.5g，卵磷脂0.25g，溶于100mL蒸餾水中），反流液①可改變胃粘液特性、破壞胃粘膜屏障、刺激肥大細(xì)胞釋放組胺、炎性滲出物增多、血流量減少；②使胃竇分泌胃泌素增加、膽汁激活卵磷脂酶A、胰酶引起粘膜損傷、導(dǎo)致炎癥的存在。動(dòng)物分組及給藥方法：參考文獻(xiàn)方法：取健康大鼠60只，♂♀各半，體重120～160g，根據(jù)體重均衡原則隨機(jī)分為空白組、模型組、陽(yáng)性組、疏肝和胃大、中、小劑量組6組，每組10只。①空白組灌胃蒸餾水，體積10mL/kg，每日1次。②模型組灌胃反流劑，體積10mL/kg，每日1次。③大劑量組灌胃11.2%疏肝和胃膠囊，體積10mL/kg，1h后灌胃反流劑，體積10mL/kg，每日1次。④中劑量組灌胃5.6%疏肝和胃膠囊，體積10mL/kg，1h后灌胃反流劑，體積10mL/kg，每日1次。⑤小劑量組灌胃2.8%疏肝和胃膠囊，體積10mL/kg，1h后灌胃反流劑，體積10mL/kg，每日1次。⑥陽(yáng)性組灌胃達(dá)喜嗎丁啉混合液，達(dá)喜濃度為2%，嗎丁啉濃度為0.04%，體積10mL/kg，1h后灌胃反流劑，體積10mL/kg，每日1次。以上6組均給藥30d。

1.2.3 樣本處理：甲基橙胃殘留率檢測(cè)：于末次給藥后禁食12h后，灌胃0.1%甲基橙溶液2mL/只，30min后①用10%的烏拉坦麻醉，備皮，開(kāi)腹，迅速結(jié)扎賁門(mén)和幽門(mén)。②切除胃囊，清洗收集胃殘留液，定容至10mL。③以2000轉(zhuǎn)/分離心，取上清液于分光光度計(jì)在420nm處測(cè)定吸光度值，以0.1%甲基橙2mL加入10mL蒸餾水搖勻后測(cè)量其吸光度值，作為基數(shù)甲基橙光密度，按下列公式計(jì)算甲基橙胃殘留率：

甲基橙胃殘留率（%）＝胃甲基橙吸光度值/基數(shù)甲基橙光密度×100%

甲基橙胃殘留率的高低可反映胃排空的快慢（實(shí)驗(yàn)過(guò)程中模型、陽(yáng)性、大、中、小劑量組均死亡2只）胃黏膜病理形態(tài)變化檢測(cè)：于末次給藥后禁食12h后，在實(shí)驗(yàn)1基礎(chǔ)上測(cè)定完甲基橙殘留率后將胃部延大彎剪開(kāi)胃壁，并使胃黏膜面外翻，生理鹽水漂洗3遍后浸泡于4%甲醛溶液固定，石蠟包埋，做厚4μm切片用于HE染色，觀察胃黏膜病理形態(tài)變化。根據(jù)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分后用T檢驗(yàn)進(jìn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果（實(shí)驗(yàn)過(guò)程中模型、陽(yáng)性、大、中、小劑量組均死亡2只）。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：①炎細(xì)胞浸潤(rùn)輕度：炎細(xì)胞浸及黏膜表層，數(shù)量較少，計(jì)1分；中度：炎細(xì)胞浸入黏膜上2/3層，數(shù)量較多，計(jì)2分；重度：大量炎細(xì)胞浸入黏膜全層或肌層，計(jì)3分。②腸上皮化生輕度：占切片腺體1/3以下，計(jì)1分；中度：占切片腺體1/3～2/3，計(jì)2分；重度：幾乎整個(gè)腺體被腸化上皮所代替，計(jì)3分。③腺體增生：根據(jù)腺管組織結(jié)構(gòu)的異型性、上皮細(xì)胞的異型性及分化不成熟性，也相應(yīng)分為輕、中、重3級(jí)，分別計(jì)1、2、3分。無(wú)癥狀者計(jì)0分。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS16.0for windows統(tǒng)計(jì)軟件分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，計(jì)量資料的數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用配對(duì)資料均數(shù)的t檢驗(yàn)來(lái)檢驗(yàn)其統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，用P值來(lái)表示其差異性。

2 結(jié) 果

夕陽(yáng)的余暉漸漸散去，禱過(guò)山下師生四人升起了一堆篝火。奇巧生搭了一頂簡(jiǎn)易帳篷，軒轅明從口袋里掏出幾個(gè)大果子遞給大家：“吃吧，這是剛才在樹(shù)上摘的，暫時(shí)果腹?！?/p>

2.1 對(duì)胃排空的影響 見(jiàn)表1。

表1 舒肝和胃膠囊對(duì)大鼠膽汁反流性胃炎模型胃排空的影響±s）

表1 舒肝和胃膠囊對(duì)大鼠膽汁反流性胃炎模型胃排空的影響±s）

與模型組比較，△P ＜0.05，▲P ＜0.01

組別 n 劑量 甲基橙胃殘留率（%空白組 10 —— 31.9±3.0▲38.7±5.4模型組 8 —— 42.4±4.6陽(yáng)性組 8 達(dá)喜0.025g/kg嗎丁啉4mg/kg 29.0±4.1▲疏肝和胃大劑量組 8 1.12g/kg 33.9±6.2▲疏肝和胃中劑量組 8 0.56g/kg 35.5±4.8▲疏肝和胃小劑量組 8 0.28g/kg

由表1可見(jiàn)，模型組甲基橙胃殘留率明顯高于空白組（P＜0.01）。與模型組比較，舒肝和胃膠囊1.12g/kg、0.56g/kg劑量組及陽(yáng)性組，可使大鼠甲基橙胃殘留率明顯低于模型組（P＜0.01）。

以上表明，舒肝和胃膠囊1.12g/kg、0.56g/kg劑量組明顯降低甲基橙胃殘留率，促進(jìn)大鼠胃排空。

2.2 對(duì)胃黏膜病理改變的影響 見(jiàn)表2。

表2 舒肝和胃膠囊對(duì)膽汁反流性胃炎模型大鼠胃黏膜病理改變的影響±s）

表2 舒肝和胃膠囊對(duì)膽汁反流性胃炎模型大鼠胃黏膜病理改變的影響±s）

注：與模型對(duì)照組比較，△P ＜0.05，▲P ＜0.01.

評(píng)分結(jié)果腺體增生 炎細(xì)胞浸潤(rùn) 腸上皮化生正常對(duì)照組 10 0.0±0.0▲ 0.6±0.5▲ 0.0±0.0分組 n▲模型組 8 1.5±0.5 2.3±0.5 2.8±0.5陽(yáng)性組 8 1.0±0.0▲ 1.3±0.7△ 1.5±0.5▲舒肝和胃大劑量組 8 1.2±0.7△ 1.6±0.5▲ 1.4±0.5▲舒肝和胃中劑量組 8 1.4±0.5 2.3±0.5△ 2.1±0.6▲舒肝和胃小劑量組8 0.5±0.5 1.8±0.5 1.6±0.5

從表2可見(jiàn)，與空白對(duì)照組比較，模型組胃黏腺體增生、膜炎細(xì)胞浸潤(rùn)、腸上皮化生評(píng)分明顯提高（P＜0.01），說(shuō)明反流性胃炎模型成立。與模型組比較，本品1.12g/kg劑量組可降低胃黏膜腺體增生評(píng)分（P＜0.01）、炎細(xì)胞浸潤(rùn)評(píng)分（P＜0.01）、腸上皮化生評(píng)分（P＜0.01）；0.58g/kg劑量組可降低胃黏膜腺體增生評(píng)分（P＜0.05）、腸上皮化生評(píng)分（P＜0.01）；陽(yáng)性組可降低低胃黏膜腺體增生評(píng)分（P ＜0.01）、炎細(xì)胞浸潤(rùn)評(píng)分（P＜0.05）、腸上皮化生評(píng)分（P ＜0.01）。（見(jiàn)圖1－6）

圖1 各組胃黏膜病理改變

以上表明，本品1.12g/kg劑量組可減輕胃黏膜腺體增生、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、腸上皮化生；0.56g/kg可減輕胃黏膜腺體增生、腸上皮化生。

3 討 論 膽汁反流性胃炎近似于中醫(yī)“膽倒”、“嘔吐”、“反胃”、“嘈雜”等病癥，發(fā)病多于情志失調(diào)、飲食不節(jié)、勞倦過(guò)度等有關(guān)，病機(jī)為臟腑失和、氣機(jī)升降失調(diào)，病位在膽、胃，涉及肝脾，病性為本虛標(biāo)實(shí)，以脾胃虛弱、運(yùn)化無(wú)力為本，以膽胃郁滯、膽邪逆胃、濕熱蘊(yùn)阻為標(biāo)。以胃脘疼痛、痞滿、燒心、口苦、嘔吐酸苦、噯氣等為主要臨床表現(xiàn)。舒肝和胃膠囊以柴胡溫膽湯加蓽橙茄、金錢(qián)草而成，溫膽湯名為溫膽，實(shí)為清膽，方中以柴胡、半夏為君，柴胡舒肝理氣，半夏燥濕化痰、和胃降逆，以陳皮、茯苓、枳實(shí)、竹茹、蓽澄茄、金錢(qián)草為臣，陳皮、茯苓、竹茹健脾化濕、理氣和胃，枳實(shí)、蓽澄茄降逆行氣，金錢(qián)草清熱利膽，生姜、大棗和中培土，且制半夏之毒，炙甘草益氣和中、調(diào)和諸藥為使，全方諸藥合用，膽胃同治，化痰濕而不燥，清熱而不寒，燥濕化痰與理氣并用，利膽與和胃兼顧，痰濕熱得清，膽胃得和，諸癥可解。

BRG發(fā)生的機(jī)制與幽門(mén)功能紊亂，胃竇與十二指腸逆蠕動(dòng)增多、胃竇收縮減弱等因素有關(guān)。陳化珠等研究認(rèn)為，BRG患者膽囊排空明顯不良，餐后膽囊膽汁潴留顯著增多。膽汁可以改變胃粘液特性，使胃粘膜上皮細(xì)胞溶解，破壞胃粘膜屏障，使H＋逆向彌散，H＋刺激肥大細(xì)胞釋放組胺，組胺使血管擴(kuò)張，滲透性增加，炎性滲出物增加，并使毛細(xì)血管瘀血，血流量減少。膽汁可使胃竇分泌胃泌素增加。當(dāng)膽汁、胰液混合時(shí)，膽汁激活卵磷脂酶A，使卵磷脂變?yōu)槿苎蚜字?，破壞胃粘膜上皮?xì)胞。當(dāng)堿性十二指腸液和酸性胃液中和，pH值接近中性時(shí)，胰酶激活也可引起粘膜損傷，這些因素導(dǎo)致胃粘膜慢性炎癥持續(xù)存在，長(zhǎng)期的慢性炎癥又使胃粘膜屏障功能進(jìn)一步降低，造成惡性循環(huán)。筆者實(shí)驗(yàn)研究顯示，舒肝和胃膠囊1.12g/kg、0.56g/kg劑量組明顯降低甲基橙胃殘留率，促進(jìn)大鼠胃排空。舒肝和胃膠囊1.12g/kg劑量組可減輕胃黏膜腺體增生、炎細(xì)胞浸潤(rùn)、腸上皮化生；0.56g/kg可減輕胃黏膜腺體增生、腸上皮化生。提示舒肝和胃膠囊正是通過(guò)對(duì)胃黏膜的保護(hù)作用以及提高胃排空率來(lái)達(dá)到對(duì)膽汁反流性胃炎的治療作用。