酸棗組織培養(yǎng)及快繁的研究

張健夫，趙忠偉

(長春大學(xué) 特殊教育學(xué)院，長春 130022)

酸棗(Zizyphus jujuba var.spinosa)，為廣泛分布于我國的一種野生植物資源，主產(chǎn)于河北、陜西、甘肅、遼寧等北方地區(qū)［1］。耐干旱、瘠薄，抗寒冷。酸棗根系發(fā)達，是良好水土保持樹種［2］;而且酸棗花期長、果肉富含Vc、酸棗仁可入藥，所以又是上等蜜源植物［4］、經(jīng)濟植物［3］、藥用植物［6］，也是集觀葉、觀花、觀果于一身的園林綠化植物。對酸棗的大力開發(fā)利用具有重要的經(jīng)濟價值和生態(tài)價值。筆者以吉林省柳河縣五道溝鎮(zhèn)酸棗引種基地中篩選出來的良好酸棗品系為材料，進行初步的組培快繁研究，目的在于找到合適的途徑，為大量開發(fā)種植酸棗奠定良好基礎(chǔ)，對酸棗種質(zhì)資源保存也有重要意義。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料選取于吉林省柳河縣五道溝鎮(zhèn)酸棗引種基地中當(dāng)年生健壯無病害枝條，于2011年6月19日剪枝并裝入有水的桶中帶回實驗室，將材料在自來水下沖洗5min左右，于超凈工作臺上將外植體切割成適當(dāng)大小，放在滅過菌的三角瓶內(nèi)，先用濃度70%乙醇消毒40s，再用0.1%升汞消毒15min，無菌水沖洗5次后，用無菌濾紙將外植體表面的水分吸干。酸棗枝條消毒后切取帶1～2個腋芽大小莖段，垂直接種到培養(yǎng)基上。

1.2 試驗方法

(1)外植體誘導(dǎo):將外植體接種到以1/2MS作基本培養(yǎng)基，附加6-BA(1.0mg/L)、NAA(0.1、0.2、0.4、0.5、1.0mg/L)的五種培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，每2d觀察1次，30d后統(tǒng)計誘導(dǎo)率。

(2)分化培養(yǎng):采用MS培養(yǎng)基，附加6-BA的濃度為0.5、1.0、2.0 mg/L，附加NAA的濃度為0.0、0.1、0.2 mg/L，將誘導(dǎo)出的枝條切分成帶2個芽的莖段，垂直接種到7種分化培養(yǎng)基上，每種培養(yǎng)基上均接種30個，每2d觀察1次，30d后統(tǒng)計增殖率。

(3)生根培養(yǎng):將組培苗接種到1/2MS基本培養(yǎng)基，附加NAA(0.5、0.75、1.0mg/L)，進行兩種培養(yǎng)條件處理，一是接種后直接進行光培養(yǎng)，二是接種后先暗培養(yǎng)10d后再轉(zhuǎn)到光下培養(yǎng)。每種培養(yǎng)基上均接種30個，30d后統(tǒng)計生根率及平均生根數(shù)，篩選出最合適的激素不同質(zhì)量濃度配比。

(4)不同基質(zhì)對試管苗移栽的影響:采用三種基質(zhì)對試管苗進行移栽試驗，篩選出有利于試管苗生長，能促進成苗的培養(yǎng)基質(zhì)。

試驗中的基本培養(yǎng)基，附加蔗糖30g/L(生根培養(yǎng)20g/L)、瓊脂6.5g/L，pH值6.5，光照強度1000～1200 lx，溫度控制在(24±2)℃，光照時間10～12h/d［8］。

2 結(jié)果與分析

2.1 誘導(dǎo)培養(yǎng)

將無菌外植體接種到不同的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，8～12d后芽開始萌動生長，16～18d外植體基部有綠色突起出現(xiàn)，30d調(diào)查誘導(dǎo)情況。結(jié)果見表1。

表1 誘導(dǎo)培養(yǎng)基對外植體誘導(dǎo)率的影響

從表1中可知，1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA1.0mg/L培養(yǎng)基對外植體誘導(dǎo)效果最好，誘導(dǎo)率為93.3%;其次是1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L培養(yǎng)基，誘導(dǎo)率為66.7%。1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L培養(yǎng)基對外植體誘導(dǎo)效果最差，誘導(dǎo)率只有46.7%。

2.2 分化培養(yǎng)

由表2可知，接種在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L培養(yǎng)基上的莖段，經(jīng)過30 d的培養(yǎng)，增殖系數(shù)較高，達到3.5;其次是MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L培養(yǎng)基，增殖系數(shù)為2.9。接種在MS+6-BA 0.5mg/L和MS+6-BA 1.0mg/L兩種培養(yǎng)基上的莖段，增值系數(shù)最低，分別為1.6和1.9。

表2 分化培養(yǎng)基對增殖系數(shù)的影響

2.3 生根培養(yǎng)

將經(jīng)過分化培養(yǎng)的組培苗接種在生根培養(yǎng)基上，生根情況見表3。接種在1/2MS+NAA 0.75mg/L培養(yǎng)基上的組培苗出現(xiàn)根原基早一些，為10～12天;組培苗在其他生根培養(yǎng)基上12～18d出現(xiàn)根原基。接種后先暗培養(yǎng)10d后，再光培養(yǎng)更有利于生根，這與其他樹種的無菌苗生根結(jié)果一致［10］。由表3可知，接種在1/2MS+NAA 0.75 mg/L培養(yǎng)基上的酸棗組培苗的生根率最高，為96.7%，生根效果好，到30 d時平均根數(shù)3.4個，平均根長達到1.8cm，即可進行移栽。

表3 生根培養(yǎng)基對組培苗生根的影響

2.4 不同基質(zhì)對試管苗移栽的影響

當(dāng)試管苗長出3～4條新根，即可出瓶移栽。移栽前要先放在自然光下培養(yǎng)3d后打開瓶蓋取出試管苗，放在盛有20℃溫水的盆中，清洗掉附著在根上的培養(yǎng)基，以免引起污染霉?fàn)€。試管苗移栽到3種培養(yǎng)基質(zhì)中進行試驗，栽植深度以試管苗不倒伏為準(zhǔn)，栽后噴適量水。移栽后要保持環(huán)境溫度在20℃～25℃，空氣相對濕度在80%～90%，采用塑料膜保濕，10d后揭開塑料膜，用遮光率為50%的遮陽網(wǎng)遮陽，15d后撤掉遮陽網(wǎng)。40d后調(diào)查統(tǒng)計，結(jié)果見表4。

表4 不同基質(zhì)對試管苗移栽的影響

由表4可知，3種基質(zhì)對試管苗移栽成活率無明顯差異，但對試管苗生長速度和生長勢有很大影響，以河沙+園土+森林腐殖土(2:2:6)的培養(yǎng)基質(zhì)效果最好，移栽后40天調(diào)查，平均苗高達到11.9cm，生長旺盛，能促進成苗。

3 結(jié)論

(1)1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA1.0mg/L培養(yǎng)基對外植體誘導(dǎo)效果最好，誘導(dǎo)率為93.3%;接種在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L培養(yǎng)基上的莖段，經(jīng)過30 d的培養(yǎng)，增殖系數(shù)較高，達到3.5，達到繼代壯苗同步，保證分化出的芽粗壯，正常生長，實現(xiàn)高增殖率;接種在1/2MS+NAA 0.75 mg/L培養(yǎng)基上的酸棗組培苗的生根率最高，為96.7%，生根效果好，到30 d時平均根長達到1.8cm，平均根數(shù)3.4個，接種后先暗培養(yǎng)10d比直接光培養(yǎng)更有利于生根;用河沙+園土+森林腐殖土(2:2:6)作培養(yǎng)基質(zhì)移栽試管苗效果最好，能促進成苗。

(2)試驗的外植體選擇當(dāng)年生枝條，取材方便，不影響產(chǎn)量，材料量大，對酸棗樹體沒有大的影響。也有研究利用休眠芽做外植體進行組培取得較好效果［12］。外植體消毒后，培養(yǎng)初期會有一定程度的褐化現(xiàn)象，隨著繼代時間的增加，褐化現(xiàn)象逐漸減輕。如果褐化現(xiàn)象嚴(yán)重，可加入抗氧化劑來防止。

［1］張亞利，李新崗，姜少娟，等，陜西黃土高原酸棗仁品質(zhì)比較分析［J］，西北林學(xué)院學(xué)報，2007，22(4):146-148.

［2］內(nèi)蒙古植物志編輯委員會，內(nèi)蒙古植物志［M］.呼和浩特:內(nèi)蒙古人民出版社，1989.

［3］郭廷輔.水土保持經(jīng)濟植物實用開發(fā)技術(shù)［M］.濟南:黃河水利出版社，1995.

［4］侯學(xué)煜.中國植被地理及優(yōu)勢植物化學(xué)分析［M］.北京:科學(xué)出版社，1982.

［5］王宗訓(xùn).中國資源植物利用手冊［M］.北京:中國科學(xué)技術(shù)出版社，1989.

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［8］曹孜義，劉國民.實用植物組織培養(yǎng)技術(shù)教程［M］.蘭州:甘肅科學(xué)技術(shù)出版社，2002.

［9］曹孜義.現(xiàn)代植物組織培養(yǎng)技術(shù)［M］.蘭州:甘肅科學(xué)技術(shù)出版社，2003.

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