吡格列酮對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠及合并糖尿病的降壓作用研究

高 云

吡格列酮近年來已取代羅格列酮作為2型糖尿病的主要治療藥物，原發(fā)性高血壓人群中約60%伴隨胰島素抵抗。在高脂喂養(yǎng)的SD大鼠中發(fā)現(xiàn)吡格列酮不僅可以降低血壓，而且可以減少腎臟的氧化應(yīng)激［1］，在腎素、血管緊張素原轉(zhuǎn)基因小鼠［2］、一腎一夾大鼠［3］、注射血管緊張素Ⅱ大鼠［4］等與胰島素抵抗關(guān)系不大的高血壓動(dòng)物模型中，也報(bào)道了噻唑烷二酮類（TZDs）的降血壓效應(yīng)。但在SHR－SP（stroke－prone）的大鼠中沒有發(fā)現(xiàn)吡格列酮有降壓和改善氧化應(yīng)激的作用［5］。本研究分析自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）以及高糖高脂誘導(dǎo)的胰島素抵抗SHR中吡格列酮是否具有降壓作用，并解釋其可能的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 吡格列酮為葛蘭素史克公司（天津）產(chǎn)品，果糖購自北京廣聯(lián)行化工產(chǎn)品有限公司，大鼠胰島素酶聯(lián)免疫試劑盒購自上海西塘生物制品有限公司。超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH－Px）試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)SHR，雄性，32只，8周齡，體重200g，同齡WKY大鼠16只，體重200g。每籠4只～5只，溫度（22±2）℃，光照12h／24h。適應(yīng)1周后用于實(shí)驗(yàn)。

1.3 分組及給藥方法 SHR中隨機(jī)挑出16只給予高脂飲食，同時(shí)飲用12%果糖水，其余正常飲食＋清潔水，高脂8周后胰島素抵抗模型建立成功。然后將高脂SHR和正常飲食SHR均隨機(jī)分為兩組，一組用采用灌胃法給予吡格列酮治療，另一組不做處理；WKY也隨機(jī)分為兩組，每組8只，一組給予吡格列酮，一組不做處理，給藥10周，吡格列酮?jiǎng)┝烤鶠?0mg／（kg·d）。

1.4 胰島素抵抗模型建立指標(biāo) 高脂高糖喂養(yǎng)8周后，SHR體重明顯增加，空腹血糖明顯升高，測(cè)得空腹胰島素＞正常對(duì)照的2倍，三酰甘油（TG）＞1.8mmol／L，收縮壓（SBP）均為150 mmHg以上，糖耐量明顯受損。

1.5 儀器與設(shè)備 微量血糖儀及血糖試紙（美國(guó)羅氏），Eppendorf低溫高速離心機(jī)，Beckman－700全自動(dòng)生化儀，RBP－I大鼠尾動(dòng)脈血壓計(jì)。

1.6 實(shí)驗(yàn)方法

1.6.1 血樣采集及檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將大鼠雙側(cè)眼球摘除，收集血樣，4℃離心，3 000／min，離心15min，取上清，在Beckman－700全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行血糖、血脂檢測(cè)。

1.6.2 血壓測(cè)量方法 采用RBP－I大鼠尾動(dòng)脈血壓計(jì)，每周測(cè)血壓1次，每次測(cè)3遍，取其平均值記錄在案，分別在給藥前、給藥1周～10周每周相同時(shí)間內(nèi)各測(cè)壓1次。

1.6.3 糖耐量檢測(cè) 動(dòng)物禁食12h后，斷尾采血，先測(cè)空腹血糖，葡萄糖用量1g／kg，注射葡萄糖后，測(cè)30min，60min，90 min，120min的血糖值，注意采血時(shí)動(dòng)作要輕柔，避免應(yīng)激。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，采用單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1 胰島素抵抗SHR模型的建立 高糖高脂喂養(yǎng)8周后，SHR體重顯著增加，空腹血糖（FBG）和空腹胰島素（FINS）水平顯著升高，TG和SBP等指標(biāo)均達(dá)到成模標(biāo)準(zhǔn)，高糖高脂喂養(yǎng)的SHR大鼠糖耐量明顯受損，胰島素抵抗動(dòng)物模型建立成功。詳見表1。

表1 高脂高糖喂養(yǎng)前后SHR各項(xiàng)指標(biāo)比較（x±s）

2.2 吡格列酮對(duì)WKY、SHR及HF－SHR大鼠收縮壓的影響吡格列酮治療10周后，WKY治療與未治療兩組之間血壓無明顯差異；SHR與SHR＋吡格列酮組血壓亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HF－SHR＋吡格列酮組血壓明顯降低（P＜0.01）。詳見表2。

表2 吡格列酮對(duì)WKY、SHR及HF－SHR收縮壓的影響（x±s） mmHg

2.3 吡格列酮對(duì)SHR、HF－SHR各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)的影響 吡格列酮治療10周后，SHR組、HF－SHR組與未治療的對(duì)照組相比體重均顯著增加。SHR組的FBG、FINS、TG、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）無明顯變化，HF－SHR＋吡格列酮組的FBG、FINS和 TG明顯降低（P＜0.05），LDL、HDL無明顯差異。詳見表3。

表3 吡格列酮對(duì)SHR、HF－SHR大鼠各項(xiàng)指標(biāo)的影響（x±s）

2.4 吡格列酮對(duì)SHR、HF－SHR腎臟組織等指標(biāo)的影響SHR＋吡格列酮組與SHR組相比，SOD、GSH－Px活性和MDA的含量沒有明顯差異。HF－SHR＋吡格列酮大鼠腎臟GSH－Px活性和MDA的含量與治療組有明顯差異，但是SOD含量沒有明顯差異。詳見表4。

表4 吡格列酮治療對(duì)SHR、HF－SHR大鼠腎組織SOD、GSH－Px活性和MDA含量的影響（x±s）

3 討 論

本研究發(fā)現(xiàn)，吡格列酮治療10周后，可以顯著降低HF－SHR大鼠的收縮壓，并且可以減少腎臟氧化應(yīng)激程度，吡格列酮治療后的HF－SHR大鼠腎臟GSH－Px活性明顯增加，MDA含量降低。而GSH－Px是機(jī)體抗過氧化能力指標(biāo)之一，Shinzato等［6］在原發(fā)性高血壓易卒中SHR－SP模型中發(fā)現(xiàn)，吡格列酮治療逆轉(zhuǎn)了高血壓左心室向心性肥厚的癥狀，但沒有降低血壓或減少氧化應(yīng)激反應(yīng)［5］。本文對(duì)正常飲食的SHR經(jīng)吡格列酮治療10周后也沒有發(fā)現(xiàn)明顯的降壓作用。但是，高糖高脂喂養(yǎng)的SHR，吡格列酮卻顯著降低了血壓，并減少了腎臟的氧化應(yīng)激程度。經(jīng)吡格列酮治療后SHR體重明顯增加，與國(guó)外文獻(xiàn)一致［1，7］，但其具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

吡格列酮屬于TZDs類胰島素增敏劑，作用靶點(diǎn)是過氧化物酶體增殖因子活化受體（PPARγ）［8］。吡格列酮通過選擇性地激動(dòng)PPARγ，調(diào)節(jié)一大類參與葡萄糖生成、轉(zhuǎn)運(yùn)、利用以及與脂肪酸代謝、胰島素反應(yīng)性基因的轉(zhuǎn)錄［9］，并增加外周組織葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)子對(duì)葡萄糖的攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)，從而可提高胰島素的敏感性，改善胰島素抵抗和高胰島素血癥［10］。胰島素升高可以引起腎小管重吸收鈉增加，使體內(nèi)總鈉增加，導(dǎo)致細(xì)胞外液容量增多，機(jī)體為維持鈉平衡，通過提高腎小球灌注壓促進(jìn)尿液排泄，導(dǎo)致高血壓；胰島素還可以通過增強(qiáng)交感神經(jīng)活性，促進(jìn)腎小管鈉的重吸收，提高心輸出量和外周血管阻力；還可以使血管壁增厚，血管腔變窄，使外周血管阻力增加而導(dǎo)致血壓升高。因此，吡格列酮的降壓作用主要是通過改善高胰島素血癥、調(diào)節(jié)胰島素功能從而使血壓降低，對(duì)自發(fā)性高血壓沒有明顯的降壓作用。

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