多巴胺β羥化酶基因多態(tài)性和首發(fā)精神分裂癥的關(guān)聯(lián)分析☆

惠李 杜偉利 陳大春 張保華 王志仁修梅紅 王帆 張向陽⊙ 張萱

有研究發(fā)現(xiàn)多巴胺和腎上腺素異常在精神分裂癥發(fā)病機(jī)制中起重要作用［1］。 多巴胺 β 羥化酶（dopamine beta?hydroxy?lase，DBH）是催化多巴胺向去甲腎上腺素轉(zhuǎn)化的核心酶［2］。有研究已報道DBH活動和水平的異常被看做精神分裂癥發(fā)病的生物標(biāo)志物［3］。 而 DBH 基因 5′端 19 bp插入 ／缺失（位于位于染色體9q34）調(diào)控啟動子活動進(jìn)而調(diào)節(jié)血漿和腦脊液DBH活動和水平［3］。國外有研究報道DBH基因5′端 19bp插入／缺失（DBH5′?Ins／Del）不僅跟精神分裂癥精神癥狀相關(guān)，而且與臨床表型也相關(guān)［4－5］。 這些結(jié)果提示 DBH5′?Ins／Del可能是精神分裂癥的候選基因。因此本研究進(jìn)一步在漢族人群中驗證：DBH5′?Del／Ins多態(tài)性和首發(fā)精神分裂癥之間是否相關(guān)。以探尋精神分裂癥潛在的遺傳學(xué)發(fā)病機(jī)制。

1 對象和方法

1.1 研究對象 為2007年5月至2009年9月在北京回龍觀醫(yī)院就診的精神分裂癥患者。入組標(biāo)準(zhǔn)：①急性發(fā)作并符合美國精神障礙診斷與統(tǒng)計手冊第4版（DSM?IV）精神分裂癥診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡16～50歲；③入組前未服用抗精神藥物；④沒有其他器質(zhì)性精神疾??；⑤能理解知情同意書，自愿參加此研究并簽署。所有入組患者都經(jīng)兩名高年資精神科醫(yī)生獨立評定并確診為首次發(fā)病的的精神分裂癥住院患者。共計招募住院患者 230例，男 132例，女 98例女 98例，平均年齡（27.3±9.5）歲，平均（27.3±9.5歲）。健康正常組：在北京回龍觀周邊社區(qū)招募自愿者。入組標(biāo)準(zhǔn)：①年齡16～67；②排除精神疾病患者；③自愿入組并理解知情同意書基礎(chǔ)上簽署。共計318名，其中男138名，女180名，平均年齡（47.6±12.2）歲所有受試者均來自北京地區(qū)，并簽署經(jīng)北京回龍觀醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)開展此研究的知情同意書。人口學(xué)資料的比較：首發(fā)精神分裂癥和正常對照組在年齡和性別上均無統(tǒng)計學(xué)差異 （P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集 自編臨床CRF表收集患者信息，主要包括姓名、性別、年齡、教育年限、民族、家族史及既往身體健康狀況等一般人口學(xué)治療。

1.2.2 DNA的提取 采集所有受試者空腹外周肘靜脈血5ml，分離血漿后用博邁德DNA提取試劑盒依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案提取基因組DNA，保存 －80℃冰箱備用。

1.2.3 基因型檢測 根據(jù)早前報道該基因多態(tài)性文獻(xiàn)獲取引物序列［6］。缺失產(chǎn)物片段長度144 bp，插入產(chǎn)物片段長度163 bp；上游引物：5′?GCAAAAGTCA?GGCA?CATGCACC?3′下游引物：5′?CAATAATTTG?GCCTCAATCTTGG?3′。 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）條件（10 μL 體系）：模板DNA 25 ng，上下游引物 10 nM，Taq DNA 聚合酶（Tian Gen）0.8 U，廠家提供1×擴(kuò)增Taq Buffer和滅菌雙蒸水。PCR循環(huán)程序：94℃預(yù)變性 5 min；94℃變性 30 s，55℃退火 45 s，72℃延伸1 min，共計40個循環(huán)；72℃最后延伸10 min。 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用2%瓊脂糖膠（溴化乙錠加入膠中），電泳，成像和保存，最后鑒定基因型。每個樣本重復(fù)做兩次，以保證數(shù)據(jù)可靠性。

1.3 統(tǒng)計分析 以SPSS 15.0對兩組樣本人口學(xué)資料比較用獨立樣本t檢驗或χ2檢驗。 由SHEsis在線遺傳統(tǒng)計軟件（http：／／analysis2.bio?x.cn／myAnalysis.php）處理數(shù)據(jù)；對各組進(jìn)行Hardy?Weinberg定律的遺傳平衡吻合度檢驗，計算DBH5′?Ins／Del的基因型和等位基因頻率，用χ2分析病例對照組等位基因和基因型差異；調(diào)整年齡和性別后，采用多因素回歸模型對DBH5′?Del／Ins多態(tài)性和首發(fā)精神分裂癥的關(guān)系進(jìn)行分析，以P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Hardy-Weinberg檢驗 精神分裂癥和正常組的DBH5′?Del／Ins的基因型頻率均符合 Hardy?Weinberg平衡法則 （P＞0.05）； 按性別分層，4 組的 DBH5′?Del／Ins 的基因型頻率也均符合 Hardy?Weinberg平衡法則（P ＞ 0.05）。

2.2 患者組和對照組DBH5′-19bp插入／缺失等位基因和基因型頻率比較 首發(fā)精神分裂癥組和正常組比較等位基因和基因型頻率出現(xiàn)顯著差異（χ2=10.57，P=0.001；χ2=10.72，P=0.005）。 具有 19 bp Del（Del／Del和 Del／Ins）人群患病風(fēng)險是Ins／Ins人群的1.50倍在調(diào)整性別和年齡后（95%CI：1.17～1.91，P=0.002）。 見表 1。

表1 首發(fā)精神分裂癥和正常組DBH5'-19 bp插入／缺失的等位基因和基因型關(guān)系

3 討論

本研究結(jié)果顯示DBH5′-Ins／Del多態(tài)性是首發(fā)精神分裂癥的易感位點；并且DBH5′-Del等位基因的人群患有首發(fā)精神分裂癥風(fēng)險明顯增加。這個結(jié)果可能的機(jī)制是DBH5′-Del降低腦部多巴胺向去甲腎上腺素的轉(zhuǎn)化，同時升高多巴胺／去甲腎上腺素的比率；并且導(dǎo)致多巴胺和去甲腎上腺素系統(tǒng)異常神經(jīng)遞質(zhì)傳遞。這個機(jī)制支持DBH5′-Ins／Del多態(tài)性和精神分裂癥的臨床癥狀和表型相關(guān)［4－5］；也支持了精神分裂癥的多巴胺異常假說［1］。 此外，有研究發(fā)現(xiàn) DBH5′-Ins／Del貢獻(xiàn)精神分裂癥患者吸煙嚴(yán)重程度［7］。同時這個結(jié)果也進(jìn)一步證實DBH5′-Ins／Del是多態(tài)性功能位點［6］。 然而以前研究發(fā)現(xiàn)DBH5′-Del／Ins 多 態(tài) 性 并 不 是 慢 性 精 神 分 裂 癥 易 感 位 點［5］。DBH5′-Del／Ins多態(tài)性是首發(fā)精神分裂癥易感位點但不是慢性精神分裂癥的易感位點可能機(jī)制（假說）：具有DBH5′-Del／Del首發(fā)精神分裂癥患者對抗精神病藥物敏感，治療效果好。但具體機(jī)制仍然不清楚，有待進(jìn)一步研究。

總之，我們的研究結(jié)果表明DBH5′-Del／Ins多態(tài)性是首發(fā)精神分裂癥的易感位點，并且DBH5′-Del等位基因的人群患有首發(fā)精神分裂癥風(fēng)險明顯增加。但僅僅是初步結(jié)果，仍需要謹(jǐn)慎考慮以下三個方面：一樣本量小，需要在更大的樣本量檢驗；二樣本主要來源北京周邊，需要在不同地區(qū)和不同種族間重復(fù)；三科研經(jīng)費充裕的條件下，我們應(yīng)該檢驗另外一個功能位點-1021C／T （rs1611115）［8］，并和該位點做單倍型分析。

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